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H5N1禽流感病毒实验室检测方法灵敏性比较
目的 比对实验室常用的H5N1禽流感病毒检测方法灵敏性.方法 增殖H5N1病毒,蚀斑技术定量待检病毒,应用细胞接种、血凝实验、RT-PCR、Real-time RT-PCR等方法检测稀释的病毒悬液,比较检测的低滴度.结果 细胞接种、Real-time RT-PCR、RT-PCR及血凝实验能检测病毒的低滴度为10 PFU/mL、10 PFU/mL、10(3)PFU/mL及3.52 × 10(5)PFU/mL.结论 几种检测方法比较而言,细胞接种与Real-time RT-PCR枪测灵敏性高;血凝实验用时短,但灵敏性低,结果 需要进一步确认;RT -PCR用时较较短,检测灵敏性较高.
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溶血标本对 sysmex CA-1500仪检测血凝四项结果的影响
血凝实验是检测血凝功能异常的筛选实验，在出血性疾病的诊断，抗凝治疗监测，术前检查及在血液病诊治监测出血倾向中具有重要作用，且应用广泛。Sysmex CA-1500仪是应用于临床实验室中，对各项血液凝固指标进行体外检查的一种全自动血液凝固分析仪，能快速高精度的分析大量送检样本，CA-1500仪利用凝固，显产色和免疫等测定方法进行检测，测定结果的准确度往往不是来自分析过程本身而是来自分析过程之外，样本的采集是重要的一环，样本溶血直接影响检测结果的准确性。报告如下。
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银翘散在不同煎煮时间下体外抑制流感病毒及对小鼠巨噬细胞Toll样受体及其下游信号转导通路的影响
目的:观察并比较银翘散在不同煎煮时间下体外抑制甲型流感病毒FM1株的作用,及其含药血清对FM1刺激小鼠巨噬细胞Ana-1株Toll样受体及其下游信号转导通路的影响,探讨银翘散的抗病毒作用及其佳煎煮时间.方法:采用血凝试验观察银翘散在不同煎煮时间、不同浓度下体外抑制流感病毒及对流感病毒感染鸡胚的预防和治疗作用;用FM1刺激巨噬细胞Ana-1,同时给予不同煎煮时间的银翘散含药血清进行干预,培养24h后提取细胞RNA,应用实时定量PCR方法测定TLR3、TLR4及其下游信号转导通路MyD88、TRAF-6、TRAM和TRIF mRNA的表达.结果:与病毒对照组比较,银翘散在不同煎煮时间、不同浓度下均可直接抑制FM1株的活性,其抑制作用时间从1h持续到24h,其中以3 min高、中浓度组抑制作用强;银翘散各组对流感病毒感染鸡胚均有一定的预防和保护作用,其中以3 min高、中浓度组和6 min高浓度组的作用强(P＜0.05).银翘散在不同煎煮时间下的含药血清均能显著降低FM1诱导的巨噬细胞TLR3、TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM和TRIF的高表达(P＜0.05),尤以3 min高、中、低浓度组和6 min高浓度组为显著(P＜0.05).结论:银翘散在不同煎煮时间、不同浓度下均可有效抑制甲型流感病毒,尤以3～6 min高浓度组的作用强;不同煎煮时间下的银翘散均能阻断TLR3和TLR4的高表达,并能阻断TLR4信号转导的MyD88依赖和非依赖途径,尤以3 min和6 min组显著,由此推断银翘散的佳煎煮时间可能为煮沸后3 ～6 min.
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两种流感病毒检测方法敏感性研究
目的 利用实时荧光PCR相对定量方法和细胞培养法比较不同方法检测流感病毒敏感性差异.方法 将流感病毒咽拭子分别接种24代和42代狗肾传代细胞(MDCK),比较不同代数MDCK细胞培养获得的毒株的血凝滴度及细胞病变(CPE).对流感病毒咽拭子和毒株分别进行实时荧光PCR,比较实验结果CP值.结果 实时荧光PCR相对定量结果显示:毒株病毒载量是咽拭子病毒载量的104倍～105倍；接种24代MDCK细胞获得毒株血凝滴度略高于接种42代MDCK细胞获得的毒株,42代MDCK细胞CPE更为明显.结论 结合实时荧光PCR检测和流感病毒培养可提高流感病毒毒株分离率,24 ～42代MDCK传代细胞对2012年甲3型流感病毒均具有较好的敏感性,低代数MDCK传代细胞更有利于提高甲3型流感病毒分离.
