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脂多糖诱导食管鳞状上皮细胞表达BMP4的研究
目的:探讨脂多糖对食管鳞状上皮细胞的骨形态蛋白4(BMP4)表达的影响.方法:体外培养正常食管鳞状上皮Het-1A细胞,采用不同浓度脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)处理细胞、实时荧光定量PCR与蛋白印迹分析方法测定BMP4及Smad1表达的变化,并对其进行相关性分析.结果:10 ng/mL LPS组可轻微刺激食管鳞状上皮细胞表达BMP4、Smad1的表达,与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05);100 ng/mL LPS组和500 ng/mL LPS组均明显增强BMP4和Smad1的表达,且随浓度增强效应增强,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:脂多糖可能通过诱导BMP4及BMP信号通路相关蛋白Smad1的表达参与Barrett食管的发生.
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脂多糖通过NF-κb促CDX2表达在Barrett食管形成中的作用
目的 探讨脂多糖通过NF-κb诱导食管鳞状上皮细胞CDX2的表达. 方法 采用免疫组化S-P法检测32例人正常食管组织和20例BE组织中NF-κb和CDX2 的表达;体外培养正常食管鳞状上皮Het-1A细胞,采用不同浓度脂多糖(LPS)处理细胞,实时荧光定量PCR与蛋白印迹分析方法测定NF-κb和CDX2表达的变化. 结果 免疫组化检测发现:在20例BE组织中NF-κb阳性表达15例,阳性率75%,CDX2阳性2表达16例,阳性率80%,与人正常食管鳞状上皮组织比较,BE组织中NF-κb、CDX2表达均增高(χ 2 P＜0.05;χ=20.734,=26.475,P＜0.05).Real-time PCR及Western Blot检测结果显示10ng/mL LPS组可轻微刺激食管鳞状上皮细胞NF-κb、CDX2的表达,与对照组无统计学意义.100ng/mL LPS和500ng/mL LPS组可明显增强NF-κb、CDX2的表达,且随浓度增强表达增强,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 脂多糖可能通过诱导食管鳞状上皮细胞NF-κb表达,上调BE标志性分子CDX2从而参与BE的形成.
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小肠黏膜下层复合上皮细胞及成肌细胞构建组织工程食管的初步研究
目的 初步探索利用小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)作为支架材料,复合食管鳞状上皮细胞与成肌细胞构建组织工程食管的可行性. 方法 4周龄无胸腺小鼠20只,体重20.0±2.5 g,雌雄不限.体外分离、培养人胚胎食管鳞状上皮细胞、成肌细胞,并行5-BrdU标记;制备SIS材料并切割成1 cm×1 cm大小,在SIS材料同一表面接种两种细胞,待细胞在材料表面贴附后将其植入裸鼠体内深筋膜下,于术后第3天及1、2、3周取材行组织学和抗角蛋白、平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin, SMA)免疫组织化学观察,以了解食管鳞状上皮细胞、成肌细胞在SIS材料上的增殖、分化情况和复合物在裸鼠体内的血管化情况. 结果 人胚胎食管鳞状上皮细胞、成肌细胞能够渗透、生长于SIS材料中,并形成数层结构.植入体内第3天可见细胞增殖为多层覆盖于材料表面,并分泌大量细胞间基质.第2周时已经形成7～8层细胞,并伴有血管长入.3周时细胞增殖为十几层,大量血管长入.通过5-BrdU标记抗体染色观察,示SIS支架材料上生长的细胞多为所植入细胞.抗角蛋白,SMA免疫组织化学染色示移植细胞能够在体内分化. 结论 成肌细胞与鳞状上皮细胞在SIS材料上的复合培养物,在体内能继续增殖分化形成多层细胞结构,并能快速血管化,可用于组织工程化食管的构建.
