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重组腺相关病毒介导的nm23H1对转移性卵巢癌原位移植模型的逆转研究
目的构建含转移抑制基因nm23H1全长的重组腺相关病毒(rAAV-nm23H1),探讨rAAV-nm23H1对以人卵巢癌细胞株SW626所建立的转移性原位移植模型转移性逆转的可行性.方法用基因重组方法构建含nm23H1全长的重组腺相关病毒骨架质粒pUF1-nm23H1,磷酸钙沉淀法将腺相关病毒载体系统共转染入病毒包装细胞293细胞中,分别合成rAAV-nm23H1和rAAV-Laz,并测定其转染效率,斑点杂交法测定重组病毒的滴度.建立转移性卵巢癌原位移植模型,观察其生物学特性,并用免疫蛋白印迹法检测瘤体nm23H1表达.肿瘤原位移植术后第10天对空白对照组(12只小鼠)、rAAV-Laz组(13只小鼠)和rAAV-nm23H1组(13只小鼠)分别行腹腔注射,观察rAAV-nm23H1对转移性卵巢癌模型的肝转移率和生存时间的影响.结果成功构建并鉴定了rAAV-nm23H1和rAAV-Laz,滴度均为1×1010个病毒分子/ml,转染效率为70%.生物学特性证明构建的卵巢癌模型属转移性;腹腔注射后,rAAV-nm23H1组瘤体中nm23H1的表达明显高于空白对照组(P＜0.05).空白对照组、rAAV-Laz组、rAAV-nm23H1组平均生存时间分别为:106.67 d、107.06 d、136.67 d;空白对照组与rAAV-Laz组间的生存率比较P=0.059,P＞0.05; rAAV-nm23H1组和rAAV-Laz组间在生存时间上的差异有显著意义(P＝0.018,P＜0.05), rAAV-nm23H1组和空白对照组间在生存时间上差异有显著意义(P＝0.0051,P＜0.05).空白对照组、rAAV-Laz组、rAAV-nm23H1组的肝转移率分别为75%、61.5%、30.8%,rAAV-nm23H1组与空白对照组、rAAV-Laz组间差异有显著意义(P＝0.03,P＝0.01), 空白对照组与rAAV-Laz组间比较P＞0.05.结论 nm23H1低表达的卵巢癌细胞SW626所建的卵巢癌原位移植模型具有较强的转移倾向,rAAV-nm23H1可有效逆转该模型的转移性,延长荷瘤小鼠生存时间.
关键词： nm23H1卵巢肿瘤 腺病毒科 肿瘤转移
