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InnVit/FBXO11在白癜风中的表达及其对酪氨酸酶输出内质网的影响
目的 通过检测InnVit(即FBX011)在白癜风患者中的表达及其对内质网形态和酪氨酸酶输出内质网的影响,探讨INNVit基因对黑素细胞功能的影响.方法 收集10例表皮片移植白癜风患者皮损区与正常供皮区组织,免疫组化检测InnVit蛋白的表达情况.化学合成InnVit基因特异性siRNA片段及构建过表达质粒载体P3XF-P120,Lipofectamine TM 2000脂质体方法转染BIOBr细胞,电镜观察不同处理组细胞的内质网形态变化;激光共聚焦显微镜观察酪氨酸酶蛋白及钙网蛋白在内质网中的共定位情况;Western印迹检测转染细胞中InnVit蛋白、酪氨酸酶及钙网蛋白的表达水平.结果 10例白癜风患者皮损区InnVit蛋白表达明显低于正常供皮区.未处理组与质粒转染组的黑素细胞内质网形态正常,而siRNA转染组的细胞内质网有明显膨胀,且其相对膨胀率(1.97±0.48)与未处理组(1.28±0.09,P=0.001)和质粒转染组间(1.24±0.13,P=0.001)比较,差异均有统计学意义.未处理组与质粒转染组细胞中酪氨酸酶的表达范围部分地超出了钙网蛋白的标记范围,而siRNA转染组细胞中酪氨酸酶几乎与钙网蛋白共定位于内质网中.siRNA转染组InnVit蛋白的相对表达量(0.030±0.004)低于未处理组(0.320±0.020)和质粒转染组(0.710±0.040),质粒转染组高于未处理组(均P＜0.01);钙网蛋白3组间差异无统计学意义(P＞0.05);siRNA转染组酪氨酸酶(1.040±0.060)高于质粒转染组(0.720±0.030)和未处理组(0.350±0.030),质粒转染组高于未处理组(均P＜0.01).结论 白癜风患者皮损区InnVit蛋白表达下降;InnVit基因的表达影响了黑素细胞内质网的形态,并可以调控酪氨酸酶在内质网中的输出,进而影响黑素细胞的功能.
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白癜风相关基因-1的确认及其序列分析
目的探讨白癜风患者黑素细胞VIT-1基因转录水平的表达情况,分析该基因序列的差异性.方法用半定量RT-PCR法检测黑素细胞VIT-1基因表达水平,克隆VIT-1 ORF cDNA全长并测序,序列差异由CLUSTAL W(1.83)软件分析.结果黑素细胞的VIT-1基因ORF含有81 bp的内含子,为FBXO11的3′端的部分序列,白癜风患者黑素细胞VIT-1基因表达量下降.结论VIT-1不是一个新基因,而是FBXO11,属于F-box蛋白家族成员.
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FBXO11基因对肺腺癌A549细胞迁移的影响
目的 研究泛素连接酶复合体特异性亚基FBXO11的表达对肺腺癌A549细胞迁移的影响.方法 将A549细胞株分为3组:Blank组、阴性对照RNA组和siRNA-FBXO11组,应用Lipofectamine 2000将阴性对照RNA、siRNA-FBXO11分别转染至A549细胞中.RT-PCR法检测FBXO11的mRNA,Western blot法检测FBXO11和Snai1的蛋白表达,划痕修复实验检测细胞迁移能力.结果 与Blank组和阴性对照RNA组比较,siRNA-FBXO11组FBXO11的mRNA水平和蛋白水平显著降低(P<0.05),而Blank组与阴性对照RNA组比较,FBXO11的mRNA水平和蛋白水平无显著性差异;与Blank组和阴性对照RNA组比较,siRNA-FBXO11组的Snail蛋白表达水平显著增加(P<0.05),而Blank组与阴性对照RNA组比较,Snail蛋白表达水平无显著性差异;划痕实验结果显示:与Blank和阴性对照RNA组比较,siRNA-FBXO11组的细胞迁移距离显著增加(P<0.05),而Blank组与阴性对照RNA组比较,细胞迁移距离无显著性差异.结论 FBXO11抑制肺腺癌A549细胞的迁移能力,这可能与Snail调控有关.
