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尾静脉液压法导入人白细胞介素-10质粒在大鼠牙周膜的表达
目的 探讨尾静脉液压法导入质粒后外源基因在大鼠牙周膜的表达情况.方法 选用24只SD大鼠,随机分为hIL-10组与Vector组.尾静脉液压法导入质粒后,肝脏冰冻切片及血清检查外源基因的表达.取上颌第二磨牙根分叉区牙周膜,观察免疫组织化学法hIL-10的表达情况.结果 荧光镜下可见肝脏冰冻切片显示大量绿色荧光蛋白的表达；采用尾静脉液压法导入hIL-10质粒24 h后肝脏组织中有较高的hIL-10蛋白表达.导入hIL-10质粒~4h后即可在血清中检测到hIL-10表达,8h时可达高峰.牙周膜区域未显示明显的hIL-10蛋白表达.未能检测到空载体组大鼠hIL-10蛋白的表达.结论 尾静脉液压法导入hIL-10质粒后能使外源基因在大鼠体内获得相对稳定的表达,但在大鼠牙周膜区域未能观察到hIL-10蛋白的表达.
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人白细胞介素-10质粒转染抑制RANKL诱导的小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7分化形成破骨细胞
目的:探讨人白细胞介素-10(human interlenkin- 10,hIL-10)质粒转染后的表达产物对RANKL诱导的破骨细胞形成的影响.方法:将hIL-10及相应的空载体质粒在脂质体介导下转染293T细胞,获取含hIL-10蛋白的培养液；通过TRAP染色及骨吸收实验观察转染产物对RANKL诱导的小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7分化形成破骨细胞的影响.结果:hIL-10质粒脂质体法瞬时转染293T及RAW264.7细胞获得成功,部分细胞发出绿色荧光,ELISA检测表明目的基因获得表达,RAW264.7细胞在RANKL诱导下可形成破骨细胞样细胞,在该培养体系中加入含hIL-10蛋白的培养液上清,TRAP染色阳性细胞及骨吸收陷窝面积显著减少(P＜0.05).结论:本实验所采用的hIL-10质粒可以成功转染293T及RAW264.7细胞,产生的hIL-10蛋白在体外具有抑制破骨细胞形成和骨吸收的生物学功能.
