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β淀粉样蛋白对人神经母细胞瘤细胞内质网应激的影响
目的 研究β淀粉样蛋白(Aβ25～35)对人神经母细胞瘤细胞(SHSY5Y)凋亡过程中内质网应激的影响,探讨在内质网应激过程中未折叠蛋白质反应途径(UPR pathway)在凋亡中的作用.方法 将处于对数生长期的细胞分别暴露于含0(对照)、5、10、20、30、40μmol/L Aβ25～35的培养基染毒48 h,采用CCK8法检测细胞活性.将对数生长期的细胞分别暴露于含0(对照)、5、10、15 μmol/L Aβ25～35的培养基染毒24、48和72 h.采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用Western blotting法检测内质网应激分子伴侣葡萄糖调节蛋白GRP78以及跨膜蛋白活化转录因子-6(ATF-6)、蛋白激酶-1(IRE1α)和RNA-激活蛋白激酶样内质网激酶(PERK)蛋白的表达水平.结果与对照组比较,各浓度Aβ25～35染毒组SHSY-5Y细胞的存活率均较低,差异均有统计学意义(P＜0.05);且随着Aβ25～35染毒浓度的升高,SHSY-5Y细胞的存活率呈下降趋势.与对照组比较,各浓度Aβ25～35染毒组SHSY-5Y细胞的凋亡率均较高,除5μmol/L Aβ25～35染毒24 h外,差异均有统计学意义(P＜0.05);且随着Aβ25～35染毒浓度的升高和染毒时间的延长,SHSY-5Y细胞的凋亡率均呈上升趋势.与对照组相比,各剂量、时间点Aβ25～35染毒组SHSY5Y细胞内质网ATF-6蛋白的表达水平较高;15μmol/L Aβ25～35染毒24、48 h和各剂量Aβ25～35染毒72 h后SHSY5Y细胞内质网GRP78蛋白的表达水平较高;10、15 μmol/L Aβ25～35染毒24 h和15 μmol/L Aβ25～35染毒48 h及各剂量Aβ25～35染毒72 h后SHSY5Y细胞内质网IRE-1α蛋白的表达水平较高;15 μmol/L Aβ25～35染毒24 h和10、15 μmol/L Aβ25～35染毒72 h后SHSY5Y细胞质网PERK蛋白的表达水平较高,差异均有统计学意义(P＜0.05).随着Aβ25～35染毒浓度的升高和染毒时间的延长,细胞内GRP78、ATF-6、IRE1α和PERK蛋白的表达水平均呈上升趋势.结论Aβ25～35可以诱导SHSY5Y神经细胞内质网应激,导致SHSY5Y细胞发生凋亡.
