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circRNA404524在PM2.5致BEAS-2B细胞炎症过程中的功能及机制研究
目的 研究circRNA 404524在PM2.5致永生化人支气管上皮样细胞(BEAS-2B)炎症过程中表达改变,探索circRNA在PM2.5致气道炎症过程中的功能及机制.方法 BEAS-2B细胞分为6组:NT组(DMSO),PM2.5组(75 μg/ml PM25),NC组(转染空载体质粒+DMSO),NC+PM2.5组(转染空载体质粒+75μg/ml PM2.5),OE组(转染circRNA 404524+DMSO),OE+PM2.5组(转染circRNA 404524+75μgml PM2.5).使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测circRNA404524在75 μg/ml PM2.5染毒BEAS-2B细胞中的表达水平,同时通过转染circRNA 404524拘过表达载体联合75 μg/ml PM2.5染毒后检测circRNA404524、IL-6及IL-8的表达水平.检测circRNA 404524在BEAS-2B细胞胞浆/胞核的表达水平,分析其表达位置.通过KEGG生物信息学软件分析circRNA 404524可能参与调控的基因通路,而后检测NF-κB炎症通路关键基因的表达水平.结果 与NT组相比,circRNA 404524在PM2.5组表达下调,相对变化倍数为2.63,差异有统计学意义(P＜0.01).转染circRNA 404524过表达载体后,通过检测发现,相比于NC组,OE组中circRNA 404524上调154.74倍,差异有统计学意义(P＜0.01).检测炎症因子表达水平发现,与NC组相比,OE组中IL-6及IL-8表达均下调,差异均具有统计学意义(P＜0.05),NC+PM25组中IL-6和IL-8表达均上调,差异均具有统计学意义(P＜0.01).胞浆胞核定位结果显示circRNA 404524主要在胞核表达,检测NF-κB炎症通路关键基因的表达水平发现,相比于NC组,OE组中IKK-alpha、IKB-alpha及NFKB1表达均下调,NC+PM2.5组中表达均上调,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 circRNA 404524在PM2.5染毒的BEAS-2B细胞中低表达,将其过表达后,PM2.5引起的炎症水平降低,提示其在PM2.5染毒致BEAS-2B细胞炎症过程中发挥抑炎基因的作用,并可能通过对NF-κB炎症通路的调控发挥功能.
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Herpes Simplex Virus Type1感染SH-SY5Y细胞与Aβ1-42诱导SH-SY5Y细胞AD模型比较
目的:探讨HSV-1感染SH-SY5Y细胞后.与Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞模型的病理差异.方法:建立HSV-1感染和Aβ1-42作用的SH-SY5Y细胞模型,同时设立未加干预的正常对照组,RT-PCR的方法检测炎症因子(IL-2、IL-4、IL-10,TNF-α及iNOS)在mRNA的表达水平,Western blot检测炎症通路相关蛋白(BDNF,NF-κB、Cox-2、TNF-α,iNOS)的表达水平,对比差异.结果:与正常对照组相比HSV-1感染组和Aβ1-42模型组有显著差异(P＜0.0 5),HSV-1感染组与Aβ1-42模型组相比有着较为一致的变化趋势.结论:HSV-1感染SH-SY5Y细胞也会导致与AD细胞模型相同的通路损伤,HSV-1的感染可能是导致AD的潜在因素之一.
