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一氧化氮合酶在氟致大鼠原代海马神经细胞氧化损伤及细胞凋亡中的作用
目的 采用一氧化氮合酶(eNOS)抑制剂L-亚氨基乙基鸟氨酸(L-NIO)探讨一氧化氮合酶在氟致大鼠原代海马神经细胞氧化损伤及细胞凋亡中的作用.方法 将体外培养的大鼠海马神经细胞分为对照(空白培养基)组和NaF(0.05、0.1、0.2、0.4、0.5、1、2、4mmol/L)单独染毒组及L-NIO(1、2、3、4、5、10 μmol/L)单独染毒组,染毒48 h后,采用CCK-8法测定细胞活性.将大鼠海马神经细胞分为对照(空白培养基)组、NaF(0.2、1 mmol/L)单独染毒组、NaF和L-NIO联合染毒组(0.2 mmol/L NaF+3 μmol/L L-NIO和1 mmol/L NaF+3μmol/L L-NIO),染毒48 h后,检测细胞中eNOS蛋白和mRNA的表达水平及细胞凋亡情况以及细胞培养液中一氧化氮(NO)含量和NOS活力.结果 与对照组相比,0.02～4 mmol/L NaF染毒组及4～10 mmo1/L L-NIO染毒组大鼠海马神经细胞的存活率均较低,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,仅0.2、1 mmol/L NaF染毒组大鼠海马神经细胞中eNOS蛋白和mRNA的表达水平升高,除0.2 mmol/L NaF染毒组eNOS蛋白的表达水平外,差异均有统计学意义(P＜0.05).与相同浓度NaF染毒组相比,0.2、1 mmol/L NaF+3 μmol/L L-NIO染毒组大鼠海马神经细胞中eNOS蛋白和mRNA的表达水平降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,仅1 mmol/LNaF染毒组大鼠海马神经细胞的凋亡率升高,差异有统计学意义(P＜0.05).与相同浓度NaF染毒组相比,0.2、1 mmol/LNaF+3 μmol/L L-NIO染毒组大鼠海马神经细胞的凋亡率较低,差异均有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,0.2、1 mmol/LNaF染毒组大鼠海马神经细胞培养液中NO含量和NOS活力较高.与相同浓度NaF染毒组相比,0.2、1 mmol/L NaF+3μmol/L L-NIO组大鼠海马神经细胞培养液中NO含量和NOS活力较低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 过量氟可致大鼠原代海马神经细胞NOS活力上升,NO合成增强,导致氧化损伤及细胞凋亡;L-NIO可以拮抗过量氟引起的原代海马神经细胞eNOS蛋白、mRNA表达及细胞凋亡率增高,起到一定的神经保护作用.
关键词： 氟中毒 海马神经细胞 内皮型一氧化氮合酶 一氧化氮 L-亚氨基乙基鸟氨酸
