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eNOS基因单核苷酸多态性与习惯性流产患者的相关性研究
目的 探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因21个单核苷酸多态性位点(SNP)与习惯性流产(RSA)的相关性.方法 选择eNOS基因21个位点,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术对227例RSA患者和232例健康对照进行了基因分型及数据统计分析.结果 RSA组及对照组eNOS基因8个位点基因频率分布符合H-W平衡.3个Block处于强连锁不平衡(D'>0.9).RSA组rs11771443位点CC基因型[χ2=5.107,P=0.004,OR(95％CI)=1.710(1.071,2.731)]及C等位基因频率[χ2=7.076,P=0.008,OR(95％CI)=0.682(0.514,0.905)]显著高于对照组;RSA组rs1799983位点GG基因型[χ2=10.587,P=0.001,OR(95％CI)=0.487(0.314,0.754)]及G等位基因频率(χ2=6.250,P=0.012,OR(95％CI)=0.615(0.420,0.902)]显著高于对照组;对照组中T-T-G单倍型频率显著高于RSA组(P=0.015).结论 eNOS基因rs11771443(Promoter)和rs1799983(Exon 7)位点多态性可能与RSA有关,携带有rs11771443多态性位点C等位基因与rs1799983多态性位点G等位基因的个体可能更容易患RSA;携带有T-T-G单倍型可能是RSA的保护因素.
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中国人内皮型一氧化氮合酶基因G894T多态性与原发性高血压关系的Meta分析
目的 综合评价中国不同地区人群内皮型一氧化氮合酶基因G894T(Glu298Asp)多态性与原发性高血压的关系.方法 以高血压组和对照组基因型和等位基凼分布的OR值为统计,检索相关文献;应用MIX软件对各研究结果进行一致性检验和分析,并进行数据合并,评估发表偏倚的影响.结果 共10篇文献纳入Meta分析,包括1900例原发性高血压患者和1216例对照者,10篇文献中高血压组与对照组(GT+TT)/GG基因型频率和T/G等位基因频率OR值效应量的一致性检验结果均显著(P=0.013;P=0.011),并存在发表偏倚(P=0.049;P=0.038).高血压组与对照组(GT+TT)/GG基因型频率的合并OR值(95%CI)为1.79(1.33～2.42),显著性检验Z=3.83,P<0.001.高血压组与对照组T/G等位基因频率的合并OR值(95%CI)为1.73(1.32～2.27),显著性检验Z=3.92,P<0.001.结论 中国人(汉族为主)内皮型一氧化氮合酶基因894G→T多态性与原发性高血压相关.
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通心络对早期糖尿病肾病大鼠肾功能及肾组织NO/eNOS表达的影响
目的：观察通心络对高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素( streptozotocin, STZ)诱导的早期糖尿病肾病( diabetic nephropathy, DN)大鼠血清一氧化氮( nitric oxid, NO)含量及内皮型一氧化氮合酶( eNOS)蛋白表达的影响,探讨通心络防治早期DN大鼠肾小球高滤过的作用机制。方法采用高脂饲料联合小剂量STZ建立DN大鼠模型,将DN大鼠随机分为模型组、缬沙坦组、通心络组各10只,设立10只正常SD大鼠为空白组,通心络组给予通心络超微粉0．4 g/( kg·d),缬沙坦组给予缬沙坦10 mg/( kg·d)干预8周,于治疗4周、8周监测空腹血糖( fasting blood glucose, FBG),尿微量白蛋白排泄率( urinary albumin excretion, UAER )、血肌酐( serum creatinine, SCr )及尿素氮( blood urea nitrogen, BUN),并计算内生肌酐清除率( creatinine clearance rate, Ccr)。于8周末处死大鼠,称量肾重,计算肾重指数,检测肾组织NO含量及eNOS蛋白表达。多组组间差异比较采用单因素方差分析。结果与空白组比较,模型组大鼠FBG、UAER、肾重及肾重指数、Scr、BUN、Ccr、NO含量显著升高、eNOS蛋白表达显著增强( P<0．05)。与模型组比较,通心络组及缬沙坦组FBG无明显变化(P>0．05),UAER、Scr、BUN、Ccr、肾重及肾重指数显著下降(P<0．05)。通心络组及缬沙坦组肾组织NO含量较模型组显著降低,eNOS蛋白表达较模型组减弱(P<0．05)。结论通心络可降低早期DN大鼠UAER、Scr、BUN、Ccr、肾重及肾重指数,保护肾功能。通心络抑制肾组织eNOS蛋白表达,减少肾组织NO的含量,从而降低早期DN大鼠肾小球率过滤,可能是通心络改善肾小球早期高滤过的作用机制之一。
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芝麻素对肾性高血压大鼠心肌重构的影响
目的:观察芝麻素对肾性高血压大鼠心肌重构的影响.方法:建立两肾-夹肾性高血压大鼠模型,灌胃给予不同剂量的芝麻素6周后,测定左室重量指数(LVWI)、心肌一氧化氮(NO)浓度和羟脯氨酸(HYD)含量;放射免疫分析法测定内皮素-1(ET-1)含量;免疫组织化学法观察心肌内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达;透射电镜观察心肌超微结构.结果:模型组LVWI明显增加,电镜显示心肌纤维紊乱、胶原纤维增生,心肌HYD,ET-1含量明显升高,NO浓度和eNOS蛋白表达明显减少.芝麻素100 mg/kg组LVWI和心肌纤维紊乱、胶原纤维增生等病变明显减轻,HYD,ET-1含量明显降低,NO浓度和eNOS蛋白表达明显增加.结论:芝麻素具有抗心肌重构的作用,其机制可能与其升高心肌NO、降低ET-1等有关.
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补阳还五汤对动脉粥样硬化模型主动脉Rho激酶,PAl-1及eNOS mRNA表达的影响
目的:通过运用益气活血法的代表方剂补阳还五汤对动脉粥样硬化模型的干预,观察主动脉组织Rho激酶,纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS) mRNA的表达、血脂等指标的变化,揭示该方药抗动脉粥样硬化作用的新靶点和新途径.方法:60只大鼠随机分为正常组,模型组,补阳还五汤低、高剂量组(10,20 g·kg-1),辛伐他汀组(0.6 mg·kg-1),补阳还五汤预防组(10 g·kg-1),除正常组外,其余各组维生素D3加高脂饮食诱导大鼠动脉粥样硬化模型,分别ig给予相应药物,补阳还五汤预防组给药的同时造模,造模成功后干预28 d,检测主动脉Rho激酶,PAl-1及eNOS mRNA表达,血脂水平总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白(HDL),低密度脂蛋白(LDL)和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL).结果:与正常组比较,模型组大鼠Rho激酶,PAl-1 mRNA表达量水平明显升高,eNOS mRNA表达量水平明显降低及血脂TC,TG,LDL,ox-LDL水平明显升高(P＜0.01),HDL水平明显降低,均具有明显统计学差异(P＜0.01),补阳还五汤低、高剂量治疗组、辛伐他汀组、补阳还五汤预防组明显降低大鼠Rho激酶,PAl-1 mRNA表达量水平,明显升高eNOS mRNA表达量水平,明显降低血脂TC,TG,LDL,ox-LDL水平,明显升高HDL水平,均具有明显统计学差异(P ＜0.05,P＜0.01).结论:补阳还五汤可以下调Rho激酶,PAl-1 mRNA的表达,同时,上调eNOS mRNA的表达水平、降低血脂,具有抗动脉粥样硬化作用,抑制Rho激酶mRNA,PAl-1 mRNA表达及上调eNOS mRNA表达水平可能是其作用机制之一.
关键词： 补阳还五汤 动脉粥样硬化 Rho激酶 纤溶酶原激活物抑制剂1 内皮型一氧化氮合酶 -
罗布麻叶提取物的抗高血压作用及其机制研究
目的:研究罗布麻叶提取物(extracts from leaves of Apocynum venetum,ELA)的抗高血压作用及其激活磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和(或)蛋白激酶B(Akt)信号转导通路促进一氧化氮释放的作用.方法:采用双肾双夹法建立Beagle犬高血压模型,随后按血压值将Beagle犬随机分为模型组(ig,生理盐水)、马来酸依那普利组(ig,1.66 mg· kg-1)、ELA低剂量组(ig 23mg· kg-1)、高剂量组(ig ELA 46 mg· kg-1).受试动物在单次给予上述药物后,每隔1h记录1次动物血压,连续8h,观察ELA的降压作用；采用细胞培养法,观察ELA对内皮细胞(EAhy 926)一氧化氮(NO)产量和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性的影响；采用Western blot法,观察ELA对eNOS,磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)以及磷酸化蛋白激酶B (p-Akt)表达量的影响.结果:给药后,ELA高、低剂量组Beagle犬收缩压分别为(140.4±7.5),(136.2±6.8) mmHg;舒张压分别为(63.5±3.3),(72.2 ±4.4) mmHg;平均血压分别为(88.9±4.7),(93.3±5.2) mmHg,与给药前相比均显著降低(P＜0.01)；ELA可显著增加EA Hy926细胞NO的释放量(P＜0.01),提高eNOS活性(P＜0.01)；Western blot 结果表明,ELA可显著增加p-eNOS,p-PI3K以及p-Akt的表达量,与对照组相比,具有显著差异(P＜0.01).结论:ELA具有明显的降压作用.激活血管内皮细胞内PI3K/Akt信号转导途径,从而促进eNOS磷酸化,提高eNOS活性、增加NO可能是ELA降压作用的机制之一.
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天麻多糖对脑瘫幼鼠脑内神经递质的影响
目的:探讨天麻多糖(Gastrodiae Rhizoma polysaccharide,GRPS)对脑瘫幼鼠神经递质的影响及其机制.方法:58只SD幼鼠,除空白组外,48只幼鼠结扎左侧颈总动脉并缺氧lh造脑瘫模型,成模大鼠随机分为模型组,施普善组(2.5 mL·kg-1),GRPS高、低剂量组(300,150 mg·kg-1).给药21 d后,Y型迷宫及跳台实验检测大鼠记忆力.化学或酶联免疫吸附(ELISA)法检测大脑皮层及左侧海马一氧化氮(nitric oxide,NO),乙酰胆碱脂酶(acetylcholin esterase,ACHE),5-羟色胺(5-hydroxytryptamin,5-HT),去甲肾上腺素(noradrenaline,NE)和y-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)水平.实时荧光定量PCR(Real-time PCR)及ELISA法检测大脑皮层及海马内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)表达及含量.苏木素-伊红(HE)染色观察右侧海马组织结构.结果:与空白组比较,模型大鼠行为学错误次数增加,跳台潜伏期减少,大脑皮层和海马中5-HT,NE和GABA下降,ACHE和Glu增加(P＜0.05,P＜0.01).与模型组比,GRPS高和低剂量组大鼠行为学错误次数减少,跳台潜伏期增加(P＜0.05,P＜0.01).GRPS高和低剂量组大鼠在大脑皮层中NO,NE,5-HT和eNOS增加,ACHE减少;GRPS高剂量组大鼠海马的NO,NE和eNOS增加,ACHE减少(P ＜0.05,P＜0.01).GRPS低高剂量组大鼠海马组织结构未见水肿,细胞排列整齐.结论:GRPS可以增强脑瘫幼鼠记忆力,其机制与增加大脑皮层及海马中NO,NE和5-HT含量,降低ACHE水平,增加eNOS表达,保护海马区组织有关.
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丹参对单侧输尿管结扎大鼠肾组织一氧化氮及一氧化氮合酶的作用
目的:观察复方丹参注射液及苯那普利对梗阻性肾病大鼠的保护作用.方法:采用单侧输尿管结扎的方法制备间质性肾炎模型,分别投以复方丹参注射液及苯那普利,检测肾组织中一氧化氮含量及一氧化氮合酶的免疫组织化学表达.结果:复方丹参注射液组大鼠肾组织中一氧化氮含量为14.80±2.66μmol/mg蛋白,较病理组9.82±1.66μmol/mg明显增加,P=0.001,苯那普利组为14.73±2.82μmol/mg,两者合用组为13.97±2.40μmol/mg,与病理组相比P=0.002及0.001均有显著性差别.肾组织中一氧化氮合酶(内皮型)表达亦有相似结果且以肾皮质表达较为理想.结论:复方丹参注射液及苯那普利能有效提高梗阻性大鼠肾组织中一氧化氮含量,增强内皮型一氧化氮合酶在肾皮质的表达以改善肾内血液循环.
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尿畅舒胶囊对去势雌鼠膀胱及血清内皮型一氧化氮合酶、水通道蛋白1的影响
目的：观察尿畅舒胶囊对去势雌鼠膀胱质量、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及水通道蛋白1(AQP1)含量的影响，探讨其治疗绝经后膀胱过度活动症的机理。方法SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组、尼尔雌醇组及尿畅舒组。摘除卵巢建立大鼠雌激素缺乏模型，各给药组给予相应药物灌胃，空白组及模型组灌胃等量生理盐水。给药4周后，测定膀胱质量、膀胱壁厚度；采用ELISA测定血清及膀胱组织中eNOS、AQP1的含量，分光光度法测定一氧化氮(NO)浓度。结果大鼠双侧卵巢切除后，膀胱质量减轻，膀胱黏膜层及肌层明显萎缩、变薄；尿畅舒组大鼠膀胱质量增加，黏膜层细胞排列紧密、层次分明，肌层增厚。空白组、尼尔雌醇组及尿畅舒组血清eNOS、NO均明显高于模型组(P＜0.05)；尿畅舒组与尼尔雌醇组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)；去势大鼠血清AQP1明显下降，给予雌激素及尿畅舒胶囊后上升；而膀胱AQP1含量在去势前后及给予雌激素、尿畅舒胶囊后差异无统计学意义。结论尿畅舒胶囊可逆转雌激素缺乏导致的膀胱黏膜及平滑肌萎缩，提高血清及膀胱eNOS含量，从而治疗绝经后膀胱过度活动症。
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丹参酮ⅡA对大鼠肥厚心肌NO产生及eNOS基因表达的影响
目的:研究丹参酮ⅡA(TSN)对腹主动脉缩窄大鼠肥厚心肌一氧化氮合酶及蛋白激酶C的影响,探讨丹参酮ⅡA逆转高血压左心室肥厚的分子生物学机制.方法:SD大鼠行腹主动脉缩窄术建立高血压左室心肌肥厚模型,术后4周将手术大鼠随机分为手术组、TSN低、高剂量组(10,20mg·kg-1·d-1,腹腔注射)、缬沙坦组(10 mg·kg-1·d-1,灌胃),每组8只;另有8只作为假手术组.用药8周后检测各组尾动脉压,取左心室组织检测左心室质量指数(INMI)、心肌纤维直径(MFD);硝酸还原法测定心肌组织NO的含量,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫印迹法(Western blotting)分别检测eNOS的基因表达水平和蛋白激酶C(PKC)的活性.结果:①TSN低、高剂量组的血压仍显著高于假手术组和缬沙坦组(P<0.01).②TSN低、高剂量组和缬沙坦组的LVMI,MFD虽然高于假手术组(P<0.05),却显著低于手术组(P<0.01).③TSN低、高剂量组和缬沙坦组的NO含量以及eNOS蛋白、mRNA表达水平明显高于手术组(P<0.01),TSN两组的eNOS上调超过缬沙坦组(P<0.05).④手术组的PKC蛋白水平显著升高(P<0.01),TSN低、高剂量组PKC水平明显低于缬沙坦组(P<0.05).结论:丹参酮ⅡA对心肌肥厚的逆转作用是非血压依从性的,丹参酮ⅡA通过抑制PKC蛋白的表达、促进心肌局部NO的产生及eNOS基因表达,起到阻止、逆转高血压心肌肥厚的发展.
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二苯乙烯苷对动脉硬化大鼠一氧化氮合酶及其基因的调节作用
目的:探讨二苯乙烯苷(TSG)对动脉粥样硬化(AS)大鼠一氧化氮合酶(NOS)及其基因的调节作用与抗AS机制.方法:采用高脂饲料喂饲+维生素D3复制大鼠动脉粥样硬化模型,雄性SD大鼠60只,随机分为6组:正常组、模型组、辛伐他汀阳性对照组、TSG高、中、低剂量组(120,60,30 mg·kg-1·d-1).造模12周后抽样检测大鼠主动脉,以大鼠动脉粥样硬化斑块形成为造模指标.经治疗给药6周后,检测大鼠血清和主动脉组织中NOS水平,RT-PCR检测大鼠主动脉eNOS和iNOS mRNA表达.结果:与模型组相比,辛伐他汀组和TSG高、中剂量组均能显著增加血清和主动脉组织NOS的活性、主动脉组织eNOS mRNA的表达及降低主动脉组织iNOS mRNA的表达.结论:TSG能上调AS大鼠动脉壁eNOS mRNA的表达,抑制AS大鼠动脉壁iNOS mRNA的表达,这可能是TSG抗AS的机制之一.
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痰瘀同治方含药血清对ox-LDL损伤的人脐静脉内皮细胞产生NO,caveolin-1和eNOS的影响研究
目的:观察痰瘀同治方含药血清对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)所致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用及探讨其抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制.方法:体外培养HUVECs,分别以痰瘀同治方和辛伐他汀含药血清预处理细胞2h,然后加入100 mg·L-1 ox-LDL作用24h.MTT法检测细胞活力;Griess法检测细胞上清中一氧化氮(NO)含量变化;Real-time RCR法检测小窝蛋白-1(Cav-1)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS) mRNA表达;Western blott检测Cav-1和eNOS蛋白表达.结果:HUVECs经100 mg·L-1ox-LDL刺激后细胞活力显著降低(P＜0.01);加入不同剂量痰瘀同治方和辛伐他汀含药血清后,细胞活力显著升高,细胞上清中NO含量明显提高(P＜0.05).此外,痰瘀同治方和辛伐他汀含药血清可下调Cav-1 mRNA和蛋白表达和上调eNOS mRNA和蛋白表达,其中以辛伐他汀和痰瘀同治方高剂量含药血清作用尤为显著(P＜0.01).结论:痰瘀同治方能够通过提高NO含量,下调Cav-1表达和上调eNOS表达起到内皮细胞保护作用,可能是其抗AS分子机制之一.
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低氧环境下黄芪甲苷促进人骨髓间充质干细胞分泌血管内皮细胞相关因子的实验研究
目的 观察在低氧环境下,黄芪甲苷能否诱导人骨髓间充质干细胞(BMSCs)向血管内皮样细胞分化,提高BMSCs经血管内皮生长因子(VEGF)诱导分化后的血管内皮样细胞的功能.方法 将人BMSCs分为4组:对照组(单纯人BMSCs培养)、VEGF组(含VEGF载体的腺病毒的完全培养基加入人BMSCs)、黄芪甲苷组(含黄芪甲苷粉剂加入人BMSCs)和联合诱导组(含黄芪甲苷粉剂和VEGF载体的腺病毒的完全培养基加入人BMSCs),5％ O2干预2周,对分化的细胞进行形态学观察,流式细胞仪检测细胞表型CD31和CD105的表达,ELISA检测细胞培养上清液中VEGF及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)因子的含量,Real-time PCR和Western blot检测内皮素(ET)和前列环素(PGI)的表达.结果 (1)2周后,镜下观察对照组与黄芪甲苷组细胞形态无明显变化,VEGF组和联合诱导组细胞似铺路石子样生长.(2)流式结果显示,对照组与黄芪甲苷组细胞不表达CD31,高表达CD105;VEGF组和联合诱导组细胞高表达CD31,低表达CD105,且VEGF组CD31表达高于联合诱导组(P＜0.05),而CD105低于联合诱导组(P＜0.05).(3) ELISA检测发现,与对照组比较,各干预组的VEGF及eNOS因子表达均增高(均P＜0.05),且大小顺序为VEGF组＞联合诱导组＞黄芪甲苷组.(4) RT-PCR及Western blot检测发现,与对照组比较,各干预组ET水平均升高(P＜0.05),PGI表达量均降低(P＜0.05);且联合诱导组ET蛋白表达水平高,VEGF组PGI表达量低.结论 在低氧环境下,黄芪甲苷促进人BMSCs分泌VEGF相关因子;黄芪甲苷联合VEGF可以促进VEGF诱导分化后的血管内皮样细胞分泌ET.
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大承气汤含药血清对内毒素刺激的人支气管上皮细胞表达CAV-1、eNOS及NF-κB的影响
目的 观察大承气汤含药血清对内毒素( lipopolysaccharide,LPS)刺激的人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBECs)表达小凹蛋白-1(caveolin-1、CAV-1),内皮型一氧化氮合酶( endothelial nitric oxide synthase,eNOS)及核转录因子κB (nuclear transcription factor-kappa B,NF-κB)的影响.方法 制备大承气汤及大承气汤含药血清.将体外培养的HBECs分为7组进行处理(正常血清组,单纯LPS干预组,低剂量大承气汤含药血清组,中剂量大承气汤含药血清组,高剂量大承气汤含药血清组,西药对照组,空白血清对照组),采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、Real-time PCR、免疫细胞化学及Western blot法检测不同剂量的大承气汤含药血清对内毒素刺激HBECs表达CAV-1、eNOS及NF-κB mRNA水平及蛋白的影响.结果 正常血清组HBECs有基础量的CAV-1、eNOS及NF-κB mRNA及蛋白的表达,经LPS刺激后,单纯干预组CAV-1、eNOS及NF-κB mRNA及蛋白表达较正常血清组显著增加(P＜0.01),而不同剂量大承气汤含药血清均可抑制CAV-1、eNOS及NF-κB mRNA及蛋白表达.结论 大承气汤含药血清能抑制LPS刺激的HBECs中CAV-1、eNOS及NF-κB的表达.
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丹参酮ⅡA对猪主动脉内皮细胞受血管紧张素Ⅱ作用时产生NO及eNOS基因表达的影响
目的 探讨丹参酮ⅡA对血管内皮细胞的保护作用.方法 采用硝酸还原酶法、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫组织化学法,分别检测不同作用时间(1 h、6 h、24 h)的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)以及在AngⅡ作用的不同时间点(0h点为A组、6 h点为B组)加入丹参酮ⅡA对培养的猪主动脉内皮细胞产生NO及其内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的蛋白和mRNA表达.结果 (1)随着AngⅡ作用时间的延长,血管内皮细胞NO的产生及eNOS的表达呈显著下降(P＜0.01),表现出时间依赖性的负性作用.(2)丹参酮ⅡA可抑制AngⅡ对内皮细胞分泌NO及eNOS基因表达的负性作用(P＜0.01).(3)在丹参酮ⅡA作用1 h、6 h,A组的抑制效应明显强于B组(P＜0.05);随着作用时间延长至24 h,两组比较差异无显著性.结论 丹参酮ⅡA可抑制AngⅡ对血管内皮细胞分泌NO以及细胞eNOS基因表达的负性作用.
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丹参酮Ⅱ A对人脐静脉内皮细胞系一氧化氮合酶和磷脂酰肌醇-3激酶的影响
目的 探讨丹参酮ⅡA促血管生成的作用机制.方法 将人脐静脉内皮细胞系(HUV-EC-C)分为空白组、二甲基亚枫(DMSO,终浓度1％)组、血管内皮生长因子(VEGF,终浓度5μg/L)组、丹参酮ⅡA(终浓度6mg/L)组,分别加入相应药物48h后,镜下观察各组细胞形态,并采用蛋白质印迹法测定各组细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、磷酯酰肌醇-3激酶(PI3K)表达情况.结果 VEGF组和丹参酮ⅡA组HUV-EC-C细胞形态饱满,丰度明显增加,细胞间隙缩小,均未见脱落.与空白组比较,VEGF组和丹参酮ⅡA组细胞eNOS、PI3K蛋白表达均显著增强(P＜0.05或P＜0.05). 结论 丹参酮ⅡA能提高HUV-EC-C内PI3K和eNOS蛋白表达,可能是其促血管生成的作用机制之一.
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回阳生肌散对糖尿病皮肤溃疡大鼠创面血管生成相关因子的影响
目的 探讨回阳生肌散促进糖尿病皮肤溃疡大鼠创面愈合的可能作用机制.方法 56只SD大鼠随机分为对照组8只、模型组12只、全方组12只、温阳组12只和活血组12只.除对照组外其余各组采用“腹腔注射链脲佐菌素(STZ)-激素干预-皮肤缺损-塑料环埋置”方法制备糖尿病皮肤溃疡动物模型.对照组和模型组给予黄凡士林纱条,全方组给予回阳生肌散全方药纱条,将回阳生肌散方拆方为温阳益气方和活血生肌方,温阳组给予温阳益气方药纱条,活血组给予活血生肌方药纱条.各组每天给药1次,15天后检测创面新生肉芽组织中血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体-2(VEGFR-2)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达水平.结果 模型组肉芽组织中VEGF、VEGFR-2、eNOS表达水平均明显低于对照组(P＜0.01),全方组VEGF表达水平明显高于模型组和活血组(P＜0.01),全方组VEGFR-2、eNOS表达水平明显高于模型组、温阳组和活血组(P＜0.01).结论 回阳生肌散可能通过提高创面肉芽组织中VEGF、VEGFR-2、eNOS的表达水平,促进创面愈合.
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罗格列酮减轻2型糖尿病大鼠血管内皮功能受损
目的 观察2型糖尿病大鼠血清内皮素(ET)和一氧化氮(NO)水平、主动脉病理变化、在主动脉的内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白和mRNA表达及罗格列酮的干预作用.方法 将大鼠随机分为对照组、高脂组、糖尿病组和罗格列酮组,每组20只.制备2型糖尿病大鼠模型后,罗格列酮治疗组4 mg/kg·d灌胃给药,于治疗6周和12周时检测血糖、ET、NO及光镜下主动脉的病理变化;用Western blot和real-time PCR检测主动脉的eNOS蛋白和mRNA表达.结果 1)与对照组比较,高脂组、糖尿病组及罗格列酮治疗组ET升高,NO降低(P<0.01).12周时糖尿病组较高脂组和罗格列酮治疗组ET升高,NO降低(P<0.05).糖尿病组NO水平在12周时比6周时明显下降(P<0.05).2)12周时高脂组、糖尿病组和罗格列酮组大鼠主动脉出现不同程度病理改变.3)6周和12周时,与对照组比较,高脂组、糖尿病组和罗格列酮组主动脉eNOS的蛋白和mRNA表达下调(P<0.01);糖尿病组较罗格列酮组主动脉eNOS的蛋白表达下调(P<0.01).结论 罗格列酮可以缓解糖尿病组大鼠血管内皮功能受损.
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PKC/NADPH氧化应激途径对大鼠心脏微血管内皮细胞eNOS脱偶联的影响
目的 观察体外原代培养大鼠心脏微血管内皮细胞内PKC/NADPH氧化应激途径在eNOS脱偶联中的作用.方法 用牛血清白蛋白糖基化终末产物(BSA-AGEs)(100 mg/L)与LY33531(PKC抑制剂)和DPI(NADPH抑制剂)分别作用大鼠心脏微血管内皮细胞(24 h),HPLC法检测BH4,试剂盒检测NO和O2-生成,免疫组化检测eNOS蛋白表达,Western blot法检测P47phox蛋白表达.结果 随着LY33531和DPI浓度(5、10和20 μmol/L)的增加,eNOS脱偶联状态减轻:NO生成逐渐增加(90.7 ±0.3～122.6 ±0.3,160.6 ±0.6,P＜0.05),而O2-生成逐渐减少(P＜0.05),eNOS表达逐渐减少(126.1 ±3.5 ～ 112.6±1.7,114.4 ±1.8,P＜0.05),而BH4含量逐渐增加(P＜0.05).同时,ROS表达和P47phox表达减少(P＜0.05).结论 NADPH氧化应激途径可能参与AGEs诱导的心脏微血管内皮细胞eNOS脱偶联的发生.而AGEs诱导的心脏微血管内皮细胞内NADPH氧化应激的发生是依赖PKC激活的.
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肿瘤坏死因子α致HUVECs内皮型一氧化氮合酶降解
目的 研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是否可以通过细胞内蛋白质降解途径引起人脐静脉内皮细胞(HUVECs)内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的蛋白量减少.方法 建立原代HUVECs培养,选取TNF-α不同浓度(0.01、0.1、1和10 ng/mL)、不同时间(24、48和72 h)处理HUVECs;溶酶体抑制剂氯化铵(NH4Cl)、caspase 抑制剂(caspase inhibitor)和泛素-蛋白酶体抑制剂(MG-132)预处理HUVECs 1.5 h后加入TNF-α(1 ng/mL)共处理 24 h,Western blot方法检测HUVECs中eNOS蛋白表达.结果 与对照组比较,1 ng/mL TNF-α处理细胞24 h,eNOS蛋白量明显减少(P<0.01);MG-132与TNF-α共处理组,eNOS蛋白量明显增加(P<0.01).结论 TNF-α可以通过泛素-蛋白酶体途径引起eNOS蛋白降解.
