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硒对人脐静脉内皮细胞P38信号通路和环氧化酶-2表达的影响
环氧化酶-2 (COX-2)在动脉粥样硬化发生中起重要作用.P38信号通路(P38MAPK)是细胞信号传导的交汇点.硒做为一种抗氧化剂可延缓或消除动脉粥样硬化的形成,但其是否通过信号通路发挥作用还不清楚.我们在体外模拟糖尿病状态,探讨糖尿病时存在的各种应激如高葡萄糖(HG)、糖基化终末产物(AGE)、高胰岛素(HI)及过氧化氢(H2O2)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC) P38MAPK、COX-2蛋白表达的影响及二者的关系,从而探讨P38MAPK在糖尿病动脉粥样硬化形成中的作用及硒在抗糖尿病动脉粥样硬化中的作用机制.
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肠润通对糖尿病大鼠结肠糖基化终末产物及其受体表达的干预作用
目的:本研究通过糖尿病大鼠结肠生物力学重构与糖基化终末产物表达的相关性来探讨肠润通的干预作用机制.方法:将成年健康SD大鼠40只,每组10只随机分为空白对照组,糖尿病对照组,肠润通高(50g/kg)、低(25g/kg)剂量治疗组.肠润通每日1次经灌胃给药,定期检测血糖和体重,实验周期为60d.实验结束时,通过免疫组织化学染色方法观测各组糖基化终末产物(AGEs)及其受体(RAGE)在结肠肠壁各层的分布表达,利用图像分析软件对其表达进行定量分析.结肠管壁的湿重,壁厚、展开角、残余应变以及应力应变等形态学和生物力学参数取自本课题组之前相关研究报道的结果.采用线性回归方法对上述两组参数进行相关统计分析.结果:糖尿病对照组AGEs和RAGE在结肠肠壁各层的表达明显高于空白对照组(P＜0.05,P＜0.01)且与形态组织学和生物力学重构参数高度正相关.经肠润通治疗后,高剂量肠润通处理能显著降低AGEs和RAGE在结肠肠壁各层的表达(P＜0.05,P＜0.01),但低剂量肠润通处理无显著作用.结论:AGEs和RAGE在肠壁各层组织的表达与糖尿病结肠生物力学特性重构高度相关,高剂量肠润通对AGEs-RAGE表达的抑制作用是糖尿病结肠生物力学特性重构机制改善的有效途径之一.
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中药复方对糖基化终末产物培养下的肾小球系膜细胞增殖以及系膜基质增生的影响
目的 观察中药复方对糖基化终末产物(AGES)培养下的肾小球系膜细胞增殖以及细胞外基质分泌的影响.方法 MTT法检测肾小球系膜细胞的增殖,碱解法检测细胞上清液中羟脯氨酸的含量.结果 1×10-3,1×10-2、1×10-1mg/mL的中药复方提取液均能抑制AGEs培养下的鼠肾小球系膜细胞的增殖;能减少AGEs作用下的细胞上清液中羟脯氨酸含量,抑制系膜基质增生.结论 中药复方能抑制AGEs引起的大鼠肾小球系膜细胞增殖以及系膜基质增生,提示此方可能通过阻止AGEs受体信号通路抑制糖尿病肾病的发生发展.
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灵芝多糖对2型糖尿病大鼠胸主动脉AGEs及其受体的影响
目的:研究灵芝多糖对2型糖尿病大鼠胸主动脉糖基化终末产物及其受体的影响,探讨灵芝多糖对糖尿病大鼠主动脉的保护机制.方法:SD大鼠经4周高脂饮食后腹腔注射链脲佐菌素(STL)30mg·㎏-1建立2型糖尿病(T2DM)模型.大鼠随机分为对照组、模型组、小檗碱阳性对照组、灵芝多糖低、中、高剂量组(200,400,800mg·㎏-1).给药治疗12周后,测定大鼠空腹血糖、血清中糖基化终末产物(AGES)含量,免疫组化法和蛋白印迹法测定胸主动脉AGES,RAGE蛋白的表达情况.结果:灵芝多糖高、中剂量组与模型组大鼠相比,血糖和血清AGES明显降低(P＜0.01).各治疗组胸主动脉AGE.和RAGE的表达量较模型组都有所下调,其中灵芝多糖高剂量组表达明显下调(P＜0.01).结论:灵芝多糖对T2DM大鼠血糖的降低和主动脉保护作用明显,其机制可能是下调AGES及RAGE的表达从而对糖尿病大鼠主动脉起到保护作用.
关键词： 灵芝多糖 糖尿病 糖基化终末产物 糖基化终末产物特异性受体 -
补肾活血中药复方对高糖及糖基化终末产物条件下视网膜Müller细胞的影响
目的 应用血清药理学方法探讨补肾活血中药复方对体外培养的视网膜Müller细胞在高糖及糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)干预条件下乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出量、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)以及VEGF mRNA表达的影响.方法 以改进酶消化法培养SD大鼠视网膜Müller细胞,将纯化的视网膜Müller细胞分别置于正常、高糖(50 mmol/L)以及AGEs (50 mg/L、100 mg/L)条件下进行培养,并以补肾活血中药复方含药血清进行干预,以酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定VEGF、LDH漏出量,以反转录-聚合酶链法(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)测定VEGF mRNA相对表达量.结果 高糖组及高、低AGEs组VEGF和VEGF mRNA的表达量均较正常对照组升高(P＜0.01);高AGEs组LDH漏出量较正常对照组及高糖组增加(P＜0.01);补肾活血中药复方含药血清能减少高糖组及高、低AGEs组LDH漏出量、VEGF与VEGF mRNA的表达量(P ＜0.05,P＜0.01),对正常条件下LDH漏出量、VEGF及VEGF mRNA均无明显影响(P＞0.05).结论 AGEs能明显降低视网膜Müller细胞膜的稳定性,高糖及AGEs均可致视网膜Müller细胞VEGF mRNA、VEGF的表达上调;补肾活血中药复方含药血清能增强高糖及AGEs条件下视网膜Müller细胞膜的稳定性、抑制VEGF mRNA的转录、进而减少VEGF蛋白表达,可能是其防治糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)的重要作用机制之一.
关键词： 糖基化终末产物 视网膜Müller细胞 血管内皮生长因子 乳酸脱氢酶 补肾活血 -
健脾清化方对脾虚湿热型慢性肾功能衰竭患者微炎症指标的影响
目的 观察健脾清化方对脾虚湿热型慢性肾功能衰竭(CRF)患者肾功能的影响及抗微炎症的可能作用机制.方法 70例CRF患者随机分为中药组和西药组,每组各35例,并设10例健康体检者作为健康对照组.两组患者均给予西医常规治疗,中药组在此基础上给予健脾清化方治疗.治疗12周后,检测两组患者血肌酐(Scr)、24小时尿蛋白定量,比较健康对照组与两组患者C反应蛋白(CRP)、白细胞介素6(IL-6)、糖基化终末产物(AGEs)水平. 结果 治疗前中药组和西药组患者CRP、IL6、AGEs显著高于健康对照组(P＜0.01),治疗后中药治疗组Scr、CRP、IL-6、AGEs较治疗前显著下降,且治疗后显著低于西药组(P＜0.05).中、西药组患者治疗前后24小时尿蛋白定量比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 健脾清化方结合西医治疗能改善脾虚湿热型CRF患者肾功能,其抗微炎症状态机制可能与调节CRP、IL-6及AGEs水平有关.
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益气活血方对糖尿病肾病大鼠肾组织中糖基化终末产物、转化生长因子β表达的影响
目的 探讨益气活血方治疗糖尿病肾病的可能作用机制.方法 42只自发性糖尿病大鼠(GK大鼠)随机分为假手术组、模型组、益气活血组,每组14只.模型组与益气活血组用高热量高脂饮食喂养+单肾切除方法建立糖尿病肾病模型.假手术组不切除肾脏.益气活血组给予益气活血方3.125 g/(kg·d)灌胃,假手术组及模型组给予蒸馏水4 ml灌胃.灌胃8周后观察肾脏病理形态,检测各组大鼠24h尿蛋白定量及肾组织AGE、TGF-β蛋白及mRNA表达. 结果 各组大鼠肾组织病理改变以肾小球体积增大、系膜细胞和基质增生、肾小管空泡样变性为主,益气活血组较其他组病理改变轻,仅肾小球肥大,轻度系膜基质增生,肾小管结构基本正常.与模型组比较,益气活血组24 h尿蛋白定量灌胃3周-灌胃前、灌胃6周-灌胃前、灌胃8周-灌胃前差异均有统计学意义(P＜0.01),益气活血方可显著降低模型大鼠24h尿蛋白定量结果.PASM、Masson阳性率,AGE、TGF-β蛋白表达及TGF-β mRNA均较模型组显著下降(P＜0.01). 结论 益气活血方治疗糖尿病肾病可能是通过抑制肾组织中AGE、TGF-β蛋白及mRNA表达起作用.
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PKC/NADPH氧化应激途径对大鼠心脏微血管内皮细胞eNOS脱偶联的影响
目的 观察体外原代培养大鼠心脏微血管内皮细胞内PKC/NADPH氧化应激途径在eNOS脱偶联中的作用.方法 用牛血清白蛋白糖基化终末产物(BSA-AGEs)(100 mg/L)与LY33531(PKC抑制剂)和DPI(NADPH抑制剂)分别作用大鼠心脏微血管内皮细胞(24 h),HPLC法检测BH4,试剂盒检测NO和O2-生成,免疫组化检测eNOS蛋白表达,Western blot法检测P47phox蛋白表达.结果 随着LY33531和DPI浓度(5、10和20 μmol/L)的增加,eNOS脱偶联状态减轻:NO生成逐渐增加(90.7 ±0.3～122.6 ±0.3,160.6 ±0.6,P＜0.05),而O2-生成逐渐减少(P＜0.05),eNOS表达逐渐减少(126.1 ±3.5 ～ 112.6±1.7,114.4 ±1.8,P＜0.05),而BH4含量逐渐增加(P＜0.05).同时,ROS表达和P47phox表达减少(P＜0.05).结论 NADPH氧化应激途径可能参与AGEs诱导的心脏微血管内皮细胞eNOS脱偶联的发生.而AGEs诱导的心脏微血管内皮细胞内NADPH氧化应激的发生是依赖PKC激活的.
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糖基化终产物和高糖对小牛主动脉血管细胞的损伤作用
目的研究糖基化终产物(AGEs)和高浓度葡萄糖对血管细胞的损伤及对其糖基化终产物受体(RAGE)表达的影响.方法分别用10 g/L糖基化终产物、10 mol/L葡萄糖和两者的混合作用于牛主动脉血管细胞,利用生化方法测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)、还原型谷胱甘肽(GSH)和NO2-/NO3-的含量,用MTF法测定细胞的活性.用CELL-ELISA和RT-PCR检测细胞RAGE的表达.结果与正常组(C)相比,高糖组(G)、AGEs组(A)和联合损伤组(G+A)对主动脉内皮细胞的生长有明显的抑制作用(P＜0.01)和对平滑肌细胞的生长有明显的促进作用,主动脉血管细胞LDH的泄漏量明显增高,GSH和NO2-/NO3-的含量明显减少(P＜0.01);且在联合损伤组的作用强.同时,联合损伤组血管细胞的RAGE表达水平明显高于AGEs组和高糖组.结论 AGEs比高浓度葡萄糖更具损伤血管细胞的作用,且AGEs与高糖联合作用对细胞的损伤为明显,这种联合损伤的过程也是通过RAGE介导的.
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AGEs诱发体外大鼠心脏微血管内皮细胞iNOS表达
目的 观察体外原代培养心脏微血管内皮细胞内一氧化氮(NO)生成与诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的变化及相关性.方法 采用不同浓度牛血清白蛋白糖基化终末产物(BSA-AGEs)(50～200 mg/L)分别作用于心脏微血管内皮细胞(0～24 h),检测NO生成,免疫组化及Western blot检测iNOS表达.结果 随着AGEs浓度增加及作用时间的延长,心脏微血管内皮细胞中NO生成增多,iNOS表达也增多(P＜0.05).结论 BSA-AGEs可以诱发心脏微血管内皮细胞产生毒性NO,从而引发以微血管内皮功能障碍为特征的糖尿病性心肌病.
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吡哆胺对人肾小管上皮HK-2细胞凋亡及纤维化因子表达的影响
目的 探讨吡哆胺对人近曲肾小管上皮HK-2细胞凋亡及纤维化因子表达的影响及其作用机制.方法 以吡哆胺(P)和替米沙坦(T)分别干预血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用的HK-2细胞,分为对照组、AngⅡ(10-6 mol/L)组、AngⅡ分别加T(10-5 mol/L)组、P(0.01、0.1、1和10 mmol/L)、T+P(1 mmol/L)组,采用MTT法检测细胞存活率,Annexin V-FITC双染法检测细胞凋亡,流式细胞术分析活性氧簇(ROS)水平,ELISA检测细胞上清液晚期糖基化终末产物(AGEs)浓度,real-time PCR检测糖基化终末产物受体(RAGE)、TGF-β1、CTGF和MMP-9 mRNA表达,West-ern blot检测RAGE、TGF-β1、CTGF表达和NF-κB P65磷酸化水平.结果 与AngⅡ组相比,吡哆胺和替米沙坦均增加HK-2细胞存活率,抑制细胞早期凋亡,降低细胞上清液AGEs浓度,减少ROS生成,下调RAGE、TGF-β1、CTGF、MMP-9 mRNA/蛋白表达和NF-κB P65磷酸化水平(均P＜ 0.01).吡哆胺的作用较替米沙坦显著(P＜0.05或P＜0.01),合用组的作用较替米沙坦单用组显著(P＜0.01).结论 吡哆胺可能通过降低AGEs-RAGE水平、改善氧化应激以及减少NF-κB P65磷酸化,从而抑制细胞凋亡并下调纤维化分子表达.
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普罗布考减轻糖基化终末产物诱导人真皮成纤维细胞NF-κB活化及ICAM-1表达
目的 观察普罗布考对糖基化终末产物(AGEs)诱导成人真皮成纤维细胞(Fb)细胞核因子κB(NF-κB)活化与ICAM-1表达的影响.方法 取足部创面皮肤进行Fb培养.实验分4组:对照组、AGE-BSA作用组(AGE-BSA浓度100 mg/L)、高浓度普罗布考组(100μmol/L普罗布考+100 mg/L AGE-BSA)、低浓度普罗布考组(50 μmol/L普罗布考+ 100 mg/L AGE-BSA).光镜下观察细胞形态学改变,测定细胞中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,应用Western blot检测细胞核NF-κB P65蛋白和总ICAM-1蛋白表达.结果 1)与对照组相比,AGEBSA作用组Fb形态改变,核蛋白NF-κB P65表达明显增加(P＜0.01),细胞总ICAM-1表达明显升高(P＜0.05)；普罗布考可在不同程度纠正上述变化.2)普罗布考显著抑制AGE-BSA诱导Fb MDA含量增加和SOD活性下降(P＜0.05)；普罗布考能抑制AGE-BSA诱导Fb NF-κB和ICAM-1蛋白表达水平上升.结论 普罗布考对AGE-BSA诱导Fb的保护作用可能是通过抑制NF-κB活化以及减低ICAM-1表达来实现的.
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AGE-RAGE 系统在糖尿病神经病变中的作用
糖尿病神经病变是糖尿病常见的并发症之一，其确切发病机制目前还不是很清楚，但糖基化终末产物（ advanced glycation end products ，AGE）的形成在糖尿病神经病变的发病机制中起到了至关重要的作用，本文仅就AGE的形成、AGE与糖基化终末产物受体（ receptor for advanced glyca-tion end products ，RAGE）在糖尿病神经病变中的作用及针对AGE-RAGE系统的治疗做一综述。
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糖基化终末产物及其受体在动脉粥样硬化中的作用及意义
Framingham心脏研究(1979年)表明,糖尿病患者大血管、微血管病变和心脏疾病风险显著增加,而动脉粥样硬化是糖尿病患者大血管病变共同的病理生理基础.糖尿病患者与无糖尿病人群相比,急性冠脉综合征和急性心肌梗死后的病死率和致残率升高,发生心力衰竭的风险增加.研究发现,糖尿病患者更易合并富含脂质易破裂的动脉粥样硬化斑块,血小板具有较高的凝集性和激活黏附因子表达的增加,以及血管内皮功能受损的改变.总体来说,糖尿病是动脉粥样硬化和心血管疾病进展的独立危险因素.糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)和糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)结合介导的一系列复杂的分子信号转导及调控机制已被证明是糖尿病大血管并发症发生、发展的重要机制,本文就近几年的相关研究进展进行综述.
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糖基化终末产物对糖尿病慢性并发症的早期诊断价值
目的 探讨糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)与糖尿病(diabetes mellitus,DM)慢性并发症之间的关系及在DM诊断中的作用.方法 选择2009年9月至2010年3月在我院就诊的DM患者87例,其中男51例,女36例,年龄45～74岁.采用ELISA法检测AGEs;采用葡萄糖氧化酶法检测血糖;采用高效液相色谱法检测糖化血红蛋白(HbA1c).结果 单纯DM组、DM伴脑梗死组、DM伴冠心病组、DM伴肾病组、DM伴眼病组AGEs水平同对照组比较差异均有统计学意义(P均＜0.01);同单纯DM组相比,DM伴慢性并发症各组AGEs水平差异亦均有统计学意义(P均＜0.05);DM伴慢性并发症各组间AGEs水平差异无统计学意义(P＞0.05).DM患者血清中AGEs水平同血糖水平、HbA1c水平呈正相关(r=0.452,r=0.416,P均＜0.01).结论 血清AGEs水平的升高是早期诊断DM合并各种慢性并发症的重要指标,而ELISA方法具有快速、灵敏、准确且无放射性污染的特点,适于在临床实验室中作为常规检测AGEs的方法.
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氧化应激和糖基化终末产物在2型糖尿病心肌病变中的作用及其相关性
目的：研究氧化应激因素和糖基化终末产物（AGEs）在2型糖尿病（T2DM）心肌病变（DCM）的作用及其相关性。方法选择泰安地区的T2DM患者78例，根据超声心动图、冠状动脉造影等情况，分为单纯T2DM组40例，DCM组38例，另选取正常对照组（NC）40例。测定超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）以及谷胱甘肽过氧化物酶（GHS-PX）等氧化应激指标和糖基化终末产物（AGEs），进行数据统计，并进行相关性分析。结果 T2DM组SOD、NO、GHS-PX较NC组均明显下降，MDA、AGEs则较NC组均明显升高；而DCM组较T2DM组SOD、GHS-PX 明显下降，MDA、AGEs 明显升高，差异均有统计学意义（P＜0.01），而血清 NO水平T2DM组较NC组下降，DCM组再次升高，且高于NC组，差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论氧化应激因素和AGEs在DCM的进展中均有重要作用，促进DCM的发生和发展，且二者之间有相关性，SOD的下降和MDA的升高是AGEs的独立相关因素。
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后期糖基化终末产物在糖尿病合并心血管、肾脏病变中的作用
问:有关糖尿病引起心血管、肾脏病变的机制近研究的动向是什么?答:近年来特别注意肾素-血管紧张素系统对糖尿病器官并发症的研究.糖尿病主要的生理紊乱应当说是慢性高血糖血症.高血糖血症通过什么途径引起靶器官损伤是近年来又一研究动向.近20年来,发现后期糖基化终末产物Advanced Glycation End Products(AGE),可能起作用.
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糖基化终末产物及其受体在胃肠道中的分布
目的:研究糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGE)及其受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)在胃肠道中的分布,为进一步探索其在慢性糖尿病胃肠功能紊乱中的作用奠定基础.方法:分别对成年Wistar大鼠食管、胃、十二指肠、空肠、回肠、结肠及直肠组织进行AGE及RAGE免疫组织化学染色.结果:(1)食管:AGE及RAGE主要分布在横纹肌的肌细胞及黏膜的鳞状上皮细胞；(2)胃:AGE在壁细胞为强阳性.RAGE在主细胞、肥大细胞、神经细胞为强阳性,在壁细胞为中等强度阳性,在表面黏液细胞为弱阳性;(3)小肠:AGE及RAGE在绒毛及固有层上皮细胞为阳性或强阳性.RAGE在肠道的神经细胞亦为强阳性；(4)结肠及直肠:AGE及RAGE在黏膜上皮细胞为弱阳性,RAGE在神经细胞为强阳性.结论:AGE及RAGE广泛分布于肠道上皮细胞及食管的横纹肌细胞,AGE亦分布于胃的壁细胞,RAGE亦分布于胃的壁细胞、主细胞、表面黏液细胞、肥大细胞及胃肠道的神经细胞.
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如何给食物减“毒”
北京市丰台区邢×我几年前在《糖尿病天地》的一篇文章里看到糖基化终末产物(AGEs)是糖尿病危害全身健康的一个重要因素,前段时间我在网上看到说AGEs在我们平时吃的食物里也有,摄入后同样危害健康.
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糖尿病肾脏病与其他糖尿病并发症
糖尿病肾脏病(diabetic kidney disease,DKD)系慢性高血糖所致的肾脏损害,病变可累及全肾,包括肾小球、肾小管肾间质、肾血管等.临床上以持续性白蛋白尿和(或)肾小球滤过率(glomerular filtration rate,GFR)进行性下降为主要特征,可进展为终末期肾病.目前的研究结果提示糖代谢紊乱(糖基化终末产物的生成,多元醇代谢通路过度活化等)、脂代谢紊乱、肥胖、血流动力学改变、炎性反应机制、细胞因子、氧化应激、遗传因素等多种因素参与了DKD的发生,而糖尿病其他相关微血管和大血管并发症发生机制存在上述共同原因,因此,DKD常可能与糖尿病其他慢性并发症共存或互为因果加重病情的进展.
