何首乌中二苯乙烯苷的现代研究

何首乌为蓼科属植物何首乌(PolygonummultHlorum Thunb)的干燥块根,现代研究证明2、3、5、4"-四羟基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄糖苷(简称二苯乙烯苷)为何首乌中的主要水溶性成分,其含量常作为何首乌药材及制剂质量控制的指标.近年来,发现二苯乙烯苷有很多药理作用,有关二苯乙烯苷的研究日渐增多.现对近年来医院有关二苯乙烯苷的提取分离和药理作用方面的文献进行综述如下.

HPLC高效液相色谱测定何首乌及其复方制剂中二苯乙烯苷含量

目的 采用高效液相色谱(HPLC)测定不同产地、不同炮制方法、不同提取方法及其复方制剂中二苯乙烯苷含量,并进行对比分析.方法 采用高效液相色谱法,色谱柱:十八烷基硅烷键合相硅胶C18柱(4.6×250mm,5μm),流动相:乙腈-水(25∶75),波长:320nm,流速:1.0mL/min,柱温:25℃,进样量:20μL.结果 从南宁某药店购买的制何首乌醇提(1)、水提液(2)、本市靖西县药市购买的生何首乌炮制后水提液(3)、从南宁另一药店购买的制何首乌复方制剂口服液(4)中二苯乙烯苷含量分别为(27.41±0.41)、(14.44±3.68)、(7.88±1.24)、(7.30±0.30)(mg/g生药),(1)(2)比较P＜0.01,(2)(3)比较P＜0.05,(3)(4)比较P＜0.05,差异均有统计学意义;本市靖西县药市购买的生何首乌,炮制后醇提、水提液、未炮制(生)醇提、水提液,二苯乙烯苷含量分别为7.22、7.88、25.10、10.75(mg/g生药),生首乌中无论是醇提或者水提,二苯乙烯苷含量均高于制首乌;生何首乌炮制(高压,120℃)不同时间0、30、60、90、120 min,二苯乙烯苷含量分别为10.75、9.79、8.96、7.70、7.04(mg/g生药);加样回收试验平均为87.72％,进样20μl测定浓度在0.08～0.20mg/mL按峰高值计有良好线性关系,相关系数为R=0.9987.结论 不同产地、不同炮制方法(传统法,高压法,不同温度,时间)、提取方法(醇提、水提),二苯乙烯苷含量有较大差异;同时该高效液相色谱(HPLC)法测定简便[1],准确,线性关系好,可用于何首乌产品质量控制.

益肾乌发口服液的质量标准探讨

目的 完善益肾乌发口服液的质量标准.方法 为了有效地控制制剂质量,结合工艺,我们在原有质量标准的基础上增加了薄层色谱法对牛膝,枸杞子的定性鉴别.采用HPLC法对主药何首乌的主要成分二苯乙烯苷的含量进行定量分析.色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相:乙腈-水(25:75)；流速:1ml/min；检测波长:320nm.结果 薄层色谱斑点清晰明显,易于识别；2,3,5,4-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在0.2016μg～4.032μg范围内与峰面积呈良好的线形关系,平均加样回收率为99.94％.结论 该方法精密度高,结果准确可靠,重复性好.

固本化痰通脉颗粒的质量标准研究

目的 建立固本化痰通脉颗粒的质量标准.方法 采用薄层色谱法对该制剂中的白术、甘草、何首乌和山楂进行鉴别；采用高效液相色谱法测定制剂中二苯乙烯苷的含量:色谱柱为DiamonsilTMC18柱(4.6mm×250mm,5μm)；甲醇:水(30:70)为流动相；流速:1.0 ml/min；检测波长为320nm.结果 薄层色谱斑点清晰,重现性好；二苯乙烯苷的平均加样回收率为98.83％,RSD=1.1％(n=6).结论 该方法准确可靠,重现性好,为固本化痰通脉颗粒的质量控制和评价提供了依据.

354 韦茎百合根茎中的1,2-二苯乙烯苷和2-芳基苯并呋喃苷

二苯乙烯苷与三七总皂苷配伍对阿尔茨海默病模型PC12细胞损伤的影响

目的 探讨二苯乙烯苷(TSG)与三七总皂苷(PNS)配伍对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型PC12细胞的细胞存活率的影响.方法 将接种于培养板上的神经细胞培养1d后去掉原培养液,每板除空白组外,模型组和药物配伍组每孔均加入5μl的淀粉样β蛋白(Aβ) 25-35诱导PCl2细胞损伤,接触24 h,建立AD细胞损伤模型.分别采用均匀设计法、析因设计法分组,1d后,采用四甲基偶氮唑盐比色法检测各组细胞存活率.结果 均匀设计结果显示,细胞存活率和TSG、PNS之间呈显著线性关系.从方程看,TSG、PNS的剂量增大,则细胞存活率提高,在本实验条件下,理论上当TSG、PNS分别以200 mmol/L、50 mg/L合用时,细胞存活率高.2×2析因设计试验发现,与模型组比较,TSG+PNS组细胞存活率[(74.46±2.06)％比(65.42±1.42)％]提高(P＜0.05),但TSG与PNS未见交互作用(P=0.053).结论 TSG与PNS配伍对AD细胞损伤有相加的保护作用.

二苯乙烯苷神经保护作用及其机制的研究进展

二苯乙烯苷(TSG)为何首乌的主要有效成分.现代药理研究表明,TSG能提高纹状体多巴胺水平,具有抗氧化及清除自由基、抗兴奋性毒性、调节Bcl-2蛋白及海马基因表达等多种功效,能多途径直接或间接地发挥脑保护作用,对帕金森病和阿尔茨海默病等神经变性疾病的防治有着良好的应用前景.

二苯乙烯苷及其β-环糊精包合物的稳定性研究

目的：明确影响二苯乙烯苷及其β-环糊精包合物稳定性的因素。方法以β-环糊精与二苯乙烯苷用量比、包合时间、包合温度为影响因素,按L9(34)正交实验筛选包合条件；利用高效液相色谱法,以二苯乙烯苷含量为指标,分别考察了人工胃液、人工肠液及醋酸-醋酸钠缓冲液、氨-氯化铵缓冲液、光照对二苯乙烯苷及其β-环糊精包合物稳定性的影响。结果(1)根据正交实验结果,确定佳包合条件为：8倍量的β-环糊精,包合时间为2小时,包合温度为35℃；(2)12小时内,二苯乙烯苷未包合物的含量在人工胃液中由100%下降至79.7%,在醋酸-醋酸钠缓冲液中由100%下降至15.9%；β-环糊精包合物中二苯乙烯苷含量在人工胃液中1小时达到100%,在醋酸-醋酸钠缓冲液中2小时达到100%,随后受酸度影响逐渐下降。二苯乙烯苷未包合物在人工肠液及氨-氯化铵缓冲液中的稳定性差,几乎无法存在；其β-环糊精包合物的稳定性有所改善,在肠液中0.5小时含量达95.8%,之后未检出；在碱性缓冲液中4小时达到峰值,6小时后未检出。光照条件下,48小时后二苯乙烯苷的含量由100%下降至50.2%；β-环糊精包合物的含量在实验条件下明显得到改善,48小时后含量仍可达90.5%。结论二苯乙烯苷及其β-环糊精包合物在酸性环境下较碱性条件下稳定；在酸性溶液中,随着溶液酸性增强,其稳定性变差；β-环糊精包合物的稳定性明显强于未包合物,说明利用β-环糊精对二苯乙烯苷进行包合可以在一定程度上使其稳定。

HPLC梯度洗脱法同时测定固肾生发丸中6种成分的含量

目的:采用高效液相梯度洗脱法建立固肾生发丸中二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚、芝麻素、女贞苷和特女贞苷6种成分的含量测定方法.方法:Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流速:0.9 mL· min-1;流动相A为甲醇-乙腈(2:1),流动相B为0.1％磷酸溶液;检测波长λ1=254 nm(检测二苯乙烯苷),λ2=320 nm(检测大黄素和大黄素甲醚),λ3=290 nm(检测芝麻素),λ4=224 nm(检测女贞苷和特女贞苷).结果:二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚、芝麻素、女贞苷和特女贞苷分别在0.171 8-3.436 0μg(r=0.999 9)、0.013 0-0.260 0μg (r=0.999 3)、0.015 6-0.312 0μg (r=0.999 4)、0.047 4-0.948 0μg(r=0.999 7)、0.018 2-0.364 0μg(r=0.999 7)、0.109 6-2.192 0μg(r=0.999 8)范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为98.28％、96.90％、98.06％、98.40％、97.75％、99.06％,RSD(n=6)分别为0.71％、1.02％、1.30％、0.98％、1.19％、0.81％. 结论:该方法简便、准确、灵敏、重复性好,可作为固肾生发丸的含量控制方法.

二苯乙烯苷联合PDTC抗H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的:研究二苯乙烯苷(2,3,5,4’-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,TSG)联合吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的作用及机制.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为正常对照组、模型组(300 μmol·L-1H2O2)、TSG组(10 μmol·L-1TSG+300μmol·L-1H2O2)、联合预处理组(75μmol·L-1PDTC+10 μmol·L-1TSG+300 μmol·L-1H2O2)、PDTC组(75 μmol·L-1 PDTC+300 μmol·L-1H2O2),采用MTT法检测细胞增殖率,Hoechst 33258染色观察凋亡细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3,核因子-κB(NF-κB)蛋白的表达.结果:与正常对照组比较,模型组细胞凋亡率增加,细胞增殖率降低；Caspase-3,NF-κB蛋白表达增加,差异均有显著性(P＜0.01).与模型组相比,经TSG或PDTC预处理后,细胞的增殖率增加,细胞凋亡率降低；Caspase-3,NF-κB蛋白表达显著减少(P＜0.01).联合预处理组与PDTC组或TSG组相比,细胞活力增加,细胞凋亡率下降；Caspase-3,NF-κB蛋白表达进一步减少(P＜0.01).结论:PDTC或TSG预处理可抑制H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,PDTC可联合TSG协同发挥抗H2O2诱导的内皮细胞凋亡,其机制与抑制NF-κB、Caspase-3的表达有关.

二苯乙烯苷对SAMP8小鼠APP mRNA和PS1mRNA表达的影响

目的:探讨灌胃给二苯乙烯苷(TSG)后SAMP8小鼠β淀粉样蛋白前体(APP) mRNA和早老蛋白-1(PS1) mRNA表达的变化.方法:6月龄快速老化模型小鼠SAMP8 50只,随机均分为SAMP8空白组,阳性药石杉碱甲对照组,高、中、低剂量TSG组(0.3,0.1,0.033 g·kg-1· d-1)共6组；6月龄正常老化小鼠SAMR1鼠10只为正常对照组.各组分别灌胃相应药物60 d后,应用实时定量PCR法检测海马组织APP和早老蛋白-1(PS1) mRNA的表达.结果:与SAMP8空白组比较,TSG组APP mRNA2-△△CT值明显降低,PS1 mRNA 2-△△CT值也明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05),表明TSG组APP mRNA和PS1 mRNA表达下调.结论:二苯乙烯苷对痴呆小鼠SAMP8有显著地抗痴呆作用,其作用机制可能与调控APP,PS1表达有关.

二苯乙烯苷对Aβ25-35致神经干细胞损伤的保护作用

目的:观察不同浓度二苯乙烯苷(TSG)对β-淀粉样肽(Aβ25-35,25μmol· L-1)致损伤的神经干细胞(NSCs)生长、增殖及自我更新能力的影响,探讨TSG对Aβ25-35致NSCs损伤的保护作用.方法:从孕14 d昆明小鼠体外提取神经干细胞,以25 μmol·L-1浓度Aβ25-35诱导NSCs建立稳定的AD细胞模型,与不同浓度二苯乙烯苷共同孵育,分为对照组、模型组(Aβ25-3525 μmol· L-1)、TSG 1×10-8mol· L-1+ Aβ25-35组、TSG 1×10-7 mol·L-1+ Aβ25-35组、TSG 1×10-6mol·L-1+ Aβ25-35组,共5组,分别采用EDU化学荧光染色法检测NSCs增殖情况；采用WST-1细胞增殖及细胞毒性检测法检测不同时段NSCs的细胞活性；体外培养7d后通过神经干细胞球计数法观察NSCs的自我更新能力.结果:与模型组相比,二苯乙烯苷各剂量组均能在一定程度上抑制Aβ25-35对NSCs的损伤,细胞生长状态良好,细胞增殖率、细胞活性及神经干细胞球计数与模型组相比均有显著性差异(P＜0.01).结论:二苯乙烯苷对Aβ25-35诱导的神经干细胞损伤具有一定保护作用.

HPLC梯度洗脱法同时测定阿胶益寿晶中的二苯乙烯苷、大黄素甲醚、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素

目的:建立梯度洗脱法同时测定阿胶益寿晶中二苯乙烯苷、大黄素甲醚、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素含量的高效液相色谱法.方法:采用Agilent TC-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相A乙腈-甲醇(9∶1),流动相B0.1％磷酸溶液梯度洗脱,柱温30℃,流速1.0 mL·min-,进样量20 μL;二苯乙烯苷和大黄素甲醚检测波长为280nm,毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素检测波长为254 nm.结果:二苯乙烯苷、大黄素甲醚、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素分别在5.23～104.60 mg·L-1(r=0.999 5),5.05 ～ 101.00 mg·L-1(r=0.999 1),5.92 ～118.40 mg·L-1(r =0.999 3),4.74～94.80 mg·L-1(r=0.999 8),4.85～97.00 mg·L-1(r=0.999 7),6.91～138.20 mg·L-1(r =0.999 7)线性关系良好;平均加样回收率(n=6)和RSD分别为98.52％(1.6％),97.95％(1.4％),99.47％(1.6％),96.99％(1.0％),99.24％(1.1％),98.13％(1.4％).结论:建立的HPLC梯度洗脱法同时测定阿胶益寿晶中二苯乙烯苷、大黄素甲醚、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素含量.方法准确、灵敏度高、重复性好,为评价阿胶益寿晶质量控制提供可靠方法.

UPLC-MS/MS测定何首乌中10个二苯乙烯苷类成分的含量

目的:建立超高效液相色谱三重四级杆串联质谱法同时测定不同产地何首乌中10种二苯乙烯苷类成分的方法,比较不同产地何首乌该类成分的含量差异.方法:采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8 μm);以0.1％甲酸水(A)-0.1％甲酸乙腈(B)溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.5 mL· min-1,柱温40℃;采用电喷雾离子源,负离子检测方式,得到相应的提取离子流图,以峰面积进行定量.结果:何首乌中白藜芦醇,虎杖苷,2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-葡萄糖苷,2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2,3-O-二葡萄糖苷,2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-葡萄糖基-(1→6)-葡萄糖苷,2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-(2"-O-没食子酰基)-葡萄糖苷,2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-(6"-O-乙酰基)-葡萄糖苷,2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-(2"-O-阿魏酰基)-葡萄糖苷和2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-(2"-O-香豆酰基)-葡萄糖苷具有良好的线性关系,r均≥0.998 7,平均加样回收率为96.5％～106.3％,RSD均≤3.5％.结论:该方法操作简便、准确、重复性好,为何首乌二苯乙烯苷类成分的深入研究及其质量控制提供了参考依据.

正交试验法优选桑椹补脑膏的壳聚糖絮凝工艺

目的:优选桑椹补脑膏的絮凝除杂工艺.方法:以除杂率,2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-β-D-葡萄糖苷和总多糖保留率的综合评分为指标,选取药液比、温度、壳聚糖用量及pH为考察因素,采用L9(34)正交试验法优选桑椹补脑膏的絮凝除杂工艺.结果:佳絮凝工艺为药液比1∶2,温度50℃,每100 mL药液加1％壳聚糖溶液10 mL,pH 4.结论:该絮凝工艺稳定可行,除杂率高,有效成分损失量少.

高压炮制对何首乌中有效成分含量的影响

目的:考察高压炮制对何首乌中大黄素、大黄素甲醚及二苯乙烯苷含量的影响.方法:何首乌采用高压清蒸法炮制,考察不同蒸制时间对何首乌中蒽醌类成分、二苯乙烯苷含量的影响,并观察其在炮制过程中性状变化.采用HPLC测定大黄素、大黄素甲醚含量,色谱条件为Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-0.1％磷酸(80∶20),流速1.0 mL· min-,检测波长254 nm,柱温30℃,进样量10 μL;二苯乙烯苷的HPLC测定条件为Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流速1.0 mL· min-,流动相乙腈-水梯度洗脱,检测波长320 nm,柱温30℃,进样量10 μL.结果:高压蒸制0,1,2,3,4,5,6h时二苯乙烯苷质量分数(n=2)依次为4.55％,3.54％,2.20％,1.87％,1.52％,1.15％,0.76％.随着蒸制时间的增加,何首乌中结合蒽醌、二苯乙烯苷含量逐渐下降,游离蒽醌含量在一定蒸制时间内随蒸制时间的增加而增多.结论:何首乌作为补益药应用时宜采用高压蒸制4h炮制品.

LSA-21型大孔吸附树脂富集何首乌中二苯乙烯的工艺研究

目的:研究LSA-21型大孔树脂对何首乌二苯乙烯苷的吸附性能及分离纯化工艺参数.方法:采用高效液相色谱法测定2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-θ-β-D-葡萄糖苷含量,计算LSA-21大孔树脂对二苯乙烯苷的吸附率和解析率.结果:佳吸附纯化工艺为:大上样量为1.2 g·g-1(生药量/干树脂),药液浓度为0.2 g·mL-1(相当于生药量),60%乙醇洗脱,洗脱剂用量为6倍树脂量,吸附及洗脱流速均为1.0 mL·min-1(10 g树脂).结论:LSA-21大孔树脂对何首乌二苯乙烯苷的吸附纯化效果较好,本研究结果可为实际生产提供理论依据.

不同产地加工方法对何首乌饮片质量的影响

目的:研究不同产地加工方法对何首乌饮片中二苯乙烯苷和蒽醌类成分含量的影响,为该饮片产地加工方法的建立提供依据.方法:将新鲜何首乌药材分别切成5,10,12 mm的片,或者8 mm3和12 mm3的方块,经晒干或60,70,80℃烘干处理制成不同何首乌饮片.采用UPLC测定不同何首乌饮片中二苯乙烯苷和蒽醌类成分的含量,考察不同加工方法对何首乌饮片质量的影响,流动相乙腈(A)-0.1％甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0～4.5 min,10％ ～ 35％A,4.5 ～6.5 min,35％ ～ 100％A),检测波长280 nm,流速0.6 mL·min-1,进样量1 μL.结果:二苯乙烯苷、大黄素8-O-B-D-葡萄糖苷、大黄素甲醚8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素和大黄素甲醚的进样量分别在0.187 2～2.34,0.007 72 ～0.096 5,0.001 688 ～0.021 1,0.008 28 ～ 0.103 5,0.002 976 ～0.037 2μg与各自峰面积积分值成良好线性关系.5种成分的平均加样回收率分别为99.99％,100.70％,98.22％,98.12％和97.90％,RSD分别为1.7％,1.0％,1.8％,1.0％和2.7％.不同加工方法的何首乌中待测成分的含量有一定规律性,干燥温度相同,饮片厚度增大,待测成分含量趋向增高.二苯乙烯苷,大黄素和大黄素甲醚的含量均以8 mm3块80℃烘干品质量分数高,大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷以12 mm厚片80℃烘干品含量高,大黄素甲醚-8-O-B-D-葡萄糖苷以10 mm厚片晒干品含量高.结论:不同加工方法对何首乌有效成分的含量影响较大,而且切制方式和规格对待测成分含量的影响大于干燥方式和干燥温度,为何首乌产地加工方式的选择提供了一定的依据.

基于药效筛选乌鳖颗粒中间体的醇沉工艺

目的:优选乌鳖颗粒中间体的醇沉工艺,降低该制剂的日服用量.方法:通过考察卵巢摘除大鼠雌二醇(E2),卵泡刺激素(FSH),黄体生成素(LH)的活性和幼鼠子宫、卵巢发育情况,评价乌鳘颗粒中间体醇沉工艺的合理性.以二苯乙烯苷、川续断皂苷Ⅵ和固含物转移率为指标,通过单因素试验确定佳醇沉工艺.采用HPLC测定二苯乙烯苷、川续断皂苷Ⅵ含量.结果:乌鳖颗粒中间体醇沉前后对药效试验无显著性差异.佳醇沉工艺为何首乌组提取液浓缩至相对密度1.10(60℃),加乙醇使含醇量达60％,静置时间＞12 h,上清液减压浓缩至相对密度1.20～1.23(60℃).结论:药效评价结合单因素试验确定的何首乌组醇沉工艺更加合理、可靠,降低乌鳖颗粒日服用量的同时,还保证了该制剂的有效性.

正交试验法优选补肾祛瘀颗粒的提取工艺

目的:优选补肾祛瘀颗粒的提取工艺,为该制剂的工业化生产提供参考.方法:采用UV测定总多糖和总黄酮含量,检测波长分别为489,510 nm;采用HPLC测定二苯乙烯苷含量,流动相乙腈-水(22∶78),检测波长320 nm.以总多糖得率为指标,通过正交试验考察料液比、提取时间、提取次数、醇沉浓度对水提工艺的影响;以总黄酮、二苯乙烯苷提取量和浸膏得率的综合评分为指标,通过正交试验考察提取时间、提取次数、乙醇用量及体积分数对醇提工艺的影响.结果:佳水提工艺为加12倍量水浸泡1h,回流提取3次,每次1.5h,醇沉浓度80％;总多糖得率8.682％.佳醇提工艺为加10倍量80％乙醇回流3次,每次1.5h;总黄酮和二苯乙烯苷提取量分别为660.19 mg·g-1和145.91 μg·g-1,浸膏得率11.81％.结论:优选的提取工艺合理可行,为补肾祛瘀方的临床推广与应用提供实验依据.