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HPLC梯度洗脱法同时测定阿胶益寿晶中的二苯乙烯苷、大黄素甲醚、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素
目的:建立梯度洗脱法同时测定阿胶益寿晶中二苯乙烯苷、大黄素甲醚、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素含量的高效液相色谱法.方法:采用Agilent TC-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相A乙腈-甲醇(9∶1),流动相B0.1％磷酸溶液梯度洗脱,柱温30℃,流速1.0 mL·min-,进样量20 μL;二苯乙烯苷和大黄素甲醚检测波长为280nm,毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素检测波长为254 nm.结果:二苯乙烯苷、大黄素甲醚、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素分别在5.23～104.60 mg·L-1(r=0.999 5),5.05 ～ 101.00 mg·L-1(r=0.999 1),5.92 ～118.40 mg·L-1(r =0.999 3),4.74～94.80 mg·L-1(r=0.999 8),4.85～97.00 mg·L-1(r=0.999 7),6.91～138.20 mg·L-1(r =0.999 7)线性关系良好;平均加样回收率(n=6)和RSD分别为98.52％(1.6％),97.95％(1.4％),99.47％(1.6％),96.99％(1.0％),99.24％(1.1％),98.13％(1.4％).结论:建立的HPLC梯度洗脱法同时测定阿胶益寿晶中二苯乙烯苷、大黄素甲醚、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素含量.方法准确、灵敏度高、重复性好,为评价阿胶益寿晶质量控制提供可靠方法.
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HPLC同时测定不同产地葛根中6种主要异黄酮类成分的含量
目的:建立同时测定葛根药材中6种主要异黄酮类成分含量的HPLC方法.方法:采用RP-HPLC法,Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)柱；流动相:甲醇-0.1％枸橼酸溶液,梯度洗脱；流速1.0 mL· min-1,柱温30℃,检测波长250 nm.结果:3’-羟基葛根素、葛根素、大豆苷、染料木苷、芒柄花苷、大豆苷元的线性范围分别为76.2～1 016,65.8 ～1 316,85.6 ～1712,49.98 ～499.8,21.94 ～219.4,48.5 ～485 ng,相关系数(R2)均大于0.999 6,6种成分的平均加样回收率分别为99.73％(RSD 0.6％),100.48％ (RSD 1.11％),100.37％ (RSD 0.79％),100.28％(RSD 1.07％),99.96％ (RSD 1.22％),97.36％(RSD 1.59％).结论:方法简便快速,重复性良好,结果准确可靠,可用于葛根药材中6种主要异黄酮类成分的含量测定.
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HPLC-DAD-ELSD法同时测定芪蛭降糖胶囊中6种成分的含量
目的:建立定量测定芪蛭降糖胶囊中4种黄酮类成分:毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素,2种皂苷类成分:黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ的方法.方法:采用HPLC-DAD-ELSD法,Agilent SB-C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相乙腈-0.1％甲酸水溶液梯度洗脱,柱温30℃,体积流量1.0mL/min,检测波长254nm;ELSD漂移管温度100C,气体流量2.4L/min.结果:毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ在0.4296～1.0024μg(r=0.9993)、0.2214～ 0.5166μg(r=0.9991)、0.6762 ～ 1.5788μg(r=1.0000)、0.2286～0.5334μg(r=1.0000)、3.1374 ～ 7.3206μg(r=0.9990)、0.6375～1.4875μg(r=0.9993)范围内分别与峰面积积分值呈良好的线性关系;芪蛭降糖胶囊中6个成分的平均回收率分别为95.28％、96.18％、98.38％、97.61％、96.20％、100.39％.结论:建立了HPLC-DAD-ELSD法同时测定芪蛭降糖胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ含量的方法.方法准确、灵敏度高、重复性好,可为芪蛭降糖胶囊质量控制提供可靠方法.
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基于一测多评法测定甘肃红芪中4种黄酮类成分
目的 建立甘肃红芪中芒柄花苷、毛蕊异黄酮、金雀异黄酮、芒柄花素4种黄酮类成分的一测多评法,验证该方法 在红芪质量评价中应用的准确性及可行性.方法以毛蕊异黄酮为内标,分别建立毛蕊异黄酮与芒柄花苷、金雀异黄酮、芒柄花素的相对校正因子,计算红芪中毛蕊异黄酮、金雀异黄酮、芒柄花素的含量,实现一测多评.结果 各相对校正因子重复性良好,一测多评法测定结果与外标法无显著差异.结论 以毛蕊异黄酮为内标,同时测定芒柄花苷、金雀异黄酮、芒柄花素的一测多评法可用于红芪的定量分析.
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芒柄花苷与人体肠道细菌的相互作用研究
研究人体肠道细菌对芒柄花苷的代谢和芒柄花苷对人体肠道细菌生长的影响.芒柄花苷与人体多种肠道细菌共孵育,采用UPLC-Q-TOF/MS技术与MetabolynxTM软件分析芒柄花苷经人体肠道细菌作用后的代谢产物;采用选择性培养基分别培养4类细菌(肠球菌、肠杆菌、双歧杆菌和乳酸杆菌),并采用光比浊法测定加入不同浓度芒柄花苷溶液后这4类细菌的生长变化,从而推测芒柄花苷对人体肠道菌群生长的影响.从药物-细菌孵育液中鉴定出芒柄花苷的去甲基化产物、羟基化产物、氢化产物及去糖基化产物等7种代谢产物;芒柄花苷加入后会抑制病原菌肠球菌和肠杆菌的生长,促进有益菌双歧杆菌和乳酸杆菌的生长.结果提示,肠道细菌对芒柄花苷有代谢作用且由不同细菌完成,同时芒柄花苷对不同种类肠道细菌的生长有影响.
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超高效液相色谱法同时测定黄芪中6种黄酮类成分的含量
目的 本实验采用超高效液相色谱法(UPLC)建立同时测定主产地(甘肃、陕西、内蒙古)黄芪药材中毛蕊异黄酮苷,芒柄花苷,槲皮素,毛蕊异黄酮,山柰酚,芒柄花素6种黄酮类成分的含量测定方法.方法 采用ACQUITY UPLC BEH C18(2.1mm × 100 mm,1.7 μm),流动相A为0.1％甲酸水,流动相B为0.1％甲酸乙腈-异丙醇(7∶3),流速为0.25 mL· min-1,梯度洗脱,检测波长254 nm,柱温30 ℃,进样量2μL.结果 6种黄酮类成分在选定的范围内线性关系良好(r≥0.999),平均加样回收率(n=6)在99.60％～101.2％,RSD l.2％～2.0％.结论 本实验首次采用UPLC对黄芪中毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、槲皮素、毛蕊异黄酮、山柰酚、芒柄花素6种黄酮类成分进行含量测定,该方法专属性强、重复性好、稳定、可控,可作为黄芪药材质量控制的方法.
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红芪化学成分及其抗氧化活性研究
目的 对红芪化学成分及其抗氧化活性进行研究.方法 采用色谱技术对红芪化学成分进行分离, 利用理化性质和现代波谱技术确定化合物的结构,并应用过氧化氢损伤的SH-SY5Y细胞与野生型DJ-1基因转染的SH-SY5Y细胞模型对得到的代表性化合物进行抗氧化应激活性研究.结果 从红芪中分离鉴定了6个化合物,其结构分别为大豆皂苷II甲酯(1),大豆皂苷I(2),芒柄花苷(3),柚皮苷(4),下箴桐碱(5)和色氨酸(6).抗氧化活性实验结果表明化合物3具有较好的抗氧化作用.结论 化合物4和6为首次从该属植物中分离得到,化合物3具有抗氧化应激作用.
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蔓性千斤拔根的化学成分研究
目的 研究蔓性千斤拔Flemingia philippinensis根的化学成分.方法 采用多种色谱方法进行分离纯化,运用各种波谱学方法鉴定化合物的结构.结果 从蔓性千斤拔乙醇提取物的正丁醇萃取物中分离得到6个化合物,分别鉴定为3,5,7,4′-四羟基-3'-甲氧基黄酮-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷(1)、山柰酚-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、染料木苷(3)、芒柄花苷(4)、印度黄檀苷(5)和3′-O-甲基-香豌豆酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(6).结论 化合物1为新的黄酮醇碳苷类化合物,命名为千斤拔苷A,化合物2和4为首次从该属植物中分离得到.
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百尾参化学成分的分离与鉴定(Ⅱ)
目的 研究百尾参Disporum cantoniense的化学成分.方法 通过大孔树脂、十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)、SephadexLH20、MCI-gel CHP20树脂反复柱色谱及制备HPLC方法分离纯化并通过波谱分析鉴定百尾参的化学成分.结果 从百尾参中分离得到20个化合物,分别鉴定为邻羟基苯甲醇(1)、对羟基苯甲醛(2)、对羟基苯乙酮(3)、丁香醛(4)、覆盆子酮(5)、新甘草苷(6)、2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(7)、反式-1-(4'-羟基苯基)-丁-1-烯-3-酮(8)、异槲皮苷(9)、3-羟基-1-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-1-丙酮(10)、icariol A2(11)、蜕皮激素(12)、glansreginic acid (13)、橙皮苷(14)、芒柄花苷(15)、槲皮素(16)、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷(17)、(E)-4-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl) but-3-en-2-one (18)、(-)-secoisolariciresinol (19)、木犀草素(20).结论 化合物1、3～8、10～15、17～19为首次从该属植物中分离得到.
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甘草中2个新三萜皂苷
目的对甘草Glycyrrhiza uralensis根及根茎的化学成分进行研究.方法采用硅胶柱、ODS柱色谱、制备液相色谱等分离技术进行分离纯化,利用UV、MS、1D-NMR、2D-NMR等波谱数据鉴定化合物结构.结果从甘草正丁醇部分分离得到14个化合物,分别鉴定为macedonoside E(1)、22β-乙酰基乌拉尔甘草皂苷C(2)、甘草酸(3)、乌拉尔甘草皂苷F(4)、甘草皂苷G2(5)、22β-乙酰基甘草醛(6)、甘草酸甲酯(7)、甘草素(8)、柚皮素(9)、异甘草素(10)、芒柄花苷(11)、甘草苷(12)、异佛来心苷(13)、芹糖甘草苷(14).结论化合物1和2为新化合物.
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红芪提高免疫功能活性部位的谱效关系研究
目的 研究红芪提高正常小鼠机体免疫功能活性部位与HPLC指纹图谱的相关性.方法 建立二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠迟发型变态反应(DTH)模型,以1批甘肃宕昌野生红芪的不同提取部位ig给药,选择优部位.HPLC测定条件:色谱柱为Hypersil ODS C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈和0.1％甲酸,梯度洗脱;体积流量为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为275 nm;测定12批红芪药材水提部位的HPLC指纹图谱及其提高免疫功能的活性,采用偏小二乘(PLS)法将HPLC图谱的各组分峰面积与提高免疫功能药效指标相关联,研究谱效相关性.结果 红芪水提部位提高免疫功能活性强,根据PLS法回归系数大小确定红芪药材水提部位中物质群对提高机体免疫功能的贡献程度,常用于表征红芪质量的腺苷、芒柄花苷、金雀异黄酮、芒柄花素、美迪紫檀素等指标化合物均表现为负相关.结论 红芪药材水提部位具有明显的提高免疫功能活性,不同来源的红芪药材提高免疫功能的活性不同,谱效关系研究表明常用于表征红芪质量的腺苷、芒柄花苷、金雀异黄酮、芒柄花素、美迪紫檀素等指标化合物对红芪提供免疫功能活性未表现出积极作用.
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红芪活性组分抗骨质疏松作用的谱效关系研究
目的 研究红芪抗骨质疏松药效与HPLC指纹图谱的相关性.方法 建立去卵巢大鼠所致骨质疏松模型,红芪(S1)的不同提取部位ig给药,选择红芪抗骨质疏松活性强的提取部位.采用HPLC法建立10批不同产地红芪乙醇提取部位指纹图谱,获取相应的药效数据,运用偏小二乘法,进行相关性分析.将筛选出的活性物质单体作用于成骨细胞,验证其抗骨质疏松活性.结果 红芪乙醇提取部位抗骨质疏松药效强.经过相关性分析,该组分指纹图谱共确定9个共有峰,鉴定出的3种化合物中,腺苷、毛蕊异黄酮与药效呈正相关,芒柄花苷与药效呈负相关.体外验证实验结果表明毛蕊异黄酮可以提高成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性.结论 红芪抗骨质疏松作用是其所含各种成分共同作用的结果,腺苷、毛蕊异黄酮对药效有一定的贡献,且毛蕊异黄酮有促进成骨细胞分化的作用.
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山西恒山地区蒙古传统黄芪和移栽黄芪的质量差异研究
目的 比较生长于山西北部恒山及其周边地区的蒙古传统黄芪和移栽黄芪化学成分差异.方法 采用1H-NMR代谢组学技术结合HPLC-UV-ELSD联用技术分别对两种种植模式黄芪的初级代谢物和次级代谢物进行差异性比较.结果 从核磁图谱中共指认出25个代谢物,其中甲醇水相中主要为氨基酸和有机酸等初级代谢物,氯仿相中主要为脂肪酸类物质;多元统计结果显示二者的初级代谢物差异不大,但8,2'-羟基-7,4'-甲氧基异黄烷只在传统黄芪中检测到.采用HPLC-UV-ELSD联用技术测定不同黄芪样本中6种黄酮和4种皂苷的量,结果显示传统黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷和黄芪皂苷Ⅲ量显著高于移栽黄芪,而移栽黄芪中黄芪皂苷Ⅰ的量显著高于传统黄芪,传统黄芪总黄酮量显著高于移栽黄芪,总皂苷量无显著性差异.结论 恒山地区蒙古传统黄芪和移栽黄芪差异性主要体现在次级代谢物上,说明不同种植方式对黄芪次级代谢物的积累影响较大,为恒山地区发展优质的传统黄芪资源奠定了基础.
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防己黄芪汤HPLC-UV/ELSD指纹图谱研究
目的 建立防己黄芪汤(FHD) HPLC-UV/ELSD指纹图谱分析方法,归属和指认复方中主要特征峰.方法 采用HPLC法,色谱柱为Venusil MP C18 (250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液(梯度洗脱),紫外检测器:检测波长为254 nm,蒸发光散射检测器:漂移管温度为110℃,空气体积流量为3 L/min;进样量10 μL;体积流量为1 mL/min.运用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2008版)》对10批FHD指纹图谱进行相似度计算,并对共有峰进行药材归属及成分指认.结果 建立了FHD指纹图谱;10批FHD指纹图谱相似度良好;在FHD HPLC-UV指纹图谱中标定了20个共有峰,其中3、6～8号峰来自防己,1、2、4、5、9、12、13、16、20号峰来自黄芪,10、11、13、14、15、17～19号峰来自甘草.在FHD HPLC-ELSD指纹图谱中标定了16个共有峰,其中1'～3'号峰来自防己,4'、7'、9'、11'、13'、15'、16'号峰来自黄芪,5'～8'、10'、12'、14'号峰来自甘草.通过进样对照品、复方以及在复方中加对照品的方式指认出复方中9个成分,分别为9/4'号峰(毛蕊异黄酮葡萄糖苷)、11/6'号峰(甘草苷)、13/7'号峰(芒柄花苷)、15号峰(甘草素)、16/9,号峰(毛蕊异黄酮)、20/15'号峰(芒柄花素),11'号峰(黄芪甲苷)、13'号峰(黄芪皂苷Ⅱ)、16'号峰(黄芪皂苷Ⅰ).结论 首次建立了FHD HPLC-UV/ELSD指纹图谱分析方法,该法操作简单、准确,精密度、重复性好,可用于表征FHD中化学成分信息,为FHD质量控制提供了可靠的科学依据.
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芪麝丸体外释放度研究
目的 研究芪麝丸在2种溶出介质中的溶出特性,为建立以溶出法评价该制剂质量方法奠定基础.方法 采用浆法,以1％聚山梨酯80水溶液和0.5％十二烷基硫酸钠(SDS)水溶液为溶出介质,以HPLC法测定的毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花素、芒柄花苷、洋川芎内酯Ⅰ、洋川芎内酯A、青藤碱为指标,考察芪麝丸在不同时间的累积溶出度,同时比较采用不同溶出介质时的各成分释放情况,拟合其溶出模型,求算溶出参数.结果 青藤碱、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、洋川芎内酯Ⅰ、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、洋川芎内酯A分别在0.718～10.770、0.190～2.850、0.100～1.500 μg、31.4～471.0、34.0～510.0、33.6～504.0、40.0～600.0 ng呈良好线性关系,以1％聚山梨酯80水溶液为溶出介质时,在45 min时各指标成分的累计溶出率均达到90％以上(毛蕊异黄酮葡萄糖苷除外),以0.5％ SDS水溶液为溶出介质时,各指标成分溶出均较缓慢.在2种介质中Weibull模型拟合芪麝丸中7种指标成分均较好,但个别成分在不同种介质中的其他模型拟合相关性更高.f2相似因子法作为模型比较表明芪麝丸中同种成分在2种不同溶出介质下的溶出不具有相似性.结论 各指标成分在1％聚山梨酯80水溶液中的溶出速率明显快于0.5％ SDS水溶液;以1％聚山梨酯80水溶液为溶出介质时,各指标成分的溶出具有相似性,释放具有同步性.芪麝丸溶出研究适合在1％聚山梨酯80水溶液的介质中进行.
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HPLC法测定康复春口服液中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪甲苷和人参皂苷Rb1
目的 建立HPLC同时测定康复春口服液中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪甲苷和人参皂苷Rb1的方法.方法 采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈–0.2％甲酸溶液,梯度洗脱;检测波长254 nm(0～30 min,检测毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素)、210 nm(30～36 min,检测黄芪甲苷)和203 nm(36～50 min,检测人参皂苷Rb1);体积流量:0.8 mL/min;柱温:30℃;进样量为20μL.结果毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪甲苷、人参皂苷Rb1分别在3.29～82.25μg/mL(r=0.9991)、4.77～119.25μg/mL(r=0.9998)、4.16～104.00μg/mL(r=0.9992)、11.33～283.25μg/mL(r=0.9997)、7.39～184.75μg/mL(r=0.9999)、2.05～51.25μg/mL(r=0.9995)线性关系良好;平均加样回收率分别为97.98％、98.45％、97.38％、99.72％、98.67％、96.99％,RSD值分别0.91％、1.41％、0.78％、1.09％、1.22％、0.85％.结论 方法专属性强,结果准确,重复性好,为更好地评价康复春口服液的质量提供参考.
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HPLC法测定复方黄芪注射剂中两种黄酮苷的含量
目的:用高效液相色谱测定复方黄芪注射剂中芒柄花苷和9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖的含量,进一步完善了黄芪及其制剂的质量评价工作.方法:用Nova-parkR C183.9×150mm4μm色谱柱;乙腈-水(20:80)为流动相;流速1.0mL/min;检测波长280nm.结果:高效液相法能更好分离和检测复方黄芪注射剂中的有效成份.芒柄花苷和9,10-二甲氧基紫檀烷苷分别在0.3～4.2μg和0.4～4μg范围内线性关系良好,相关系数分别0.9998和0.9995,平均回收率为分别为100.2%和100.5%,RSD分别为1.51%和1.22%.结论:该方法准确可靠,简便快捷,可以有效的控制复方黄芪注射剂的质量.
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黄芪化学成分的研究
目的:对蒙古黄芪的化学成分进行研究.方法:采用D101大孔树脂精制法、溶剂法、色谱法提取分离,用波谱法鉴定其化学结构.结果:从蒙古黄芪的乙醇提取物中分得3个化合物,并鉴定为芒柄花苷,9,10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D葡萄糖苷,黄芪甲苷.结论:该方法简便易行,是一种较好的分离纯化方法.
关键词： 黄芪 芒柄花苷 9 10-二甲氧基紫檀烷-3-0-β-D葡萄糖苷 -
HPLC法同时测定天山岩黄芪中4种异黄酮
目的 建立HPLC法同时测定天山岩黄芪中4种异黄酮的含有量.方法 天山岩黄芪70％乙醇提取液的分析采用YMC-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈-0.2％甲酸为流动相,梯度洗脱;体积流量0.8 mL/min;检测波长254 nm;柱温35℃.结果 毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素分别在1～50、2～70、0.8～50、2～70 μg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率95.1％ ～104.1％,RSD 0.5％～2.8％.结论 该方法稳定可靠,可用于天山岩黄芪的质量控制.
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LC-MS-MS法同时测定黄芪注射液和黄芪口服液中5种成分
目的 建立LC-MS-MS法同时测定黄芪注射液和黄芪口服液中黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花黄素5种有效成分的含有量.方法 黄芪注射液和黄芪口服液甲醇稀释液在Agilent ZORBAX SB C18(2.1 mm×150mm,5μm)色谱柱上分离,流动相为甲醇-水(含0.1％甲酸,70:30,V/V);体积流量为300μL/min.MS采用电喷雾离子源,多反应监测方式进行正离子扫描.结果 5种成分在测定浓度范围内均具有良好的线性关系,在黄芪注射液和黄芪口服液中的平均回收率分别为96.8％ ～102.3％和95.9％ ～101.5％.结论 本法测得结果准确、可靠、灵敏度高,可用于黄芪注射液和黄芪口服液的质量控制.
