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红芪提高免疫功能活性部位的谱效关系研究
目的 研究红芪提高正常小鼠机体免疫功能活性部位与HPLC指纹图谱的相关性.方法 建立二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠迟发型变态反应(DTH)模型,以1批甘肃宕昌野生红芪的不同提取部位ig给药,选择优部位.HPLC测定条件:色谱柱为Hypersil ODS C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈和0.1％甲酸,梯度洗脱;体积流量为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为275 nm;测定12批红芪药材水提部位的HPLC指纹图谱及其提高免疫功能的活性,采用偏小二乘(PLS)法将HPLC图谱的各组分峰面积与提高免疫功能药效指标相关联,研究谱效相关性.结果 红芪水提部位提高免疫功能活性强,根据PLS法回归系数大小确定红芪药材水提部位中物质群对提高机体免疫功能的贡献程度,常用于表征红芪质量的腺苷、芒柄花苷、金雀异黄酮、芒柄花素、美迪紫檀素等指标化合物均表现为负相关.结论 红芪药材水提部位具有明显的提高免疫功能活性,不同来源的红芪药材提高免疫功能的活性不同,谱效关系研究表明常用于表征红芪质量的腺苷、芒柄花苷、金雀异黄酮、芒柄花素、美迪紫檀素等指标化合物对红芪提供免疫功能活性未表现出积极作用.
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后莫紫檀素、美迪紫檀素对人肝癌细胞抑制作用的研究
观察刺果甘草活性成分后莫紫檀素(homopterocarpin)、美迪紫檀素(medicarpin)的体外抗癌活性，通过人肝癌细胞（Hep-2）进行体外实验，结果表明它们均有抑制和杀灭人肝癌细胞的作用，并且美迪紫檀素的作用强于后莫紫檀素。此2个单体化合物是刺果甘草的活性成分。
关键词： 刺果甘草 后莫紫檀素 美迪紫檀素 人肝癌细胞(Hep-2) -
刺果甘草的提取及化学成分的研究
本次实验主要研究了刺果甘草有效成分的提取、分离和结构鉴定.实验以刺果甘草干燥的根为原料,用乙醇浸泡,超声波提取,提取液减压浓缩得浸膏180.5g.然后提取液依次用石油醚、二氯甲烷和乙酸乙酯萃取,分别得到石油醚提取物3.614 5g,二氯甲烷提取物11.965 2g和乙酸乙酯提取物8.919 7g,分别占刺果甘草总质量的0.72%、2.39%和1.78%.二氯甲烷提取物经过柱层析,重结晶方法的分离,得到了2种晶体(白色针晶和白色针簇状结晶).晶体经过1H-NMR、13C-NMR鉴定并与文献对照确定其结构,分别为β-谷甾醇和美迪紫檀素.β-谷甾醇占二氯甲烷提取物的3.53%.美迪紫檀素占二氯甲烷提取物的1.31%.实验首次应用超声波提取刺果甘草根的有效成分,为进一步开发利用提供了依据.
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HPLC同时测定红芪中4种黄酮类成分的含量
目的：：建立HPLC法测定红芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、金雀异黄酮、芒柄花素、美迪紫檀素4种主要黄酮类成分的方法。方法：采用HPLC法,样品经甲醇回流,采用Waters公司SunFire C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm,5μm),乙腈-0.2%磷酸水为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 ml·min-1,检测波长为240 nm,柱温为35℃,进样量为20μl。结果：毛蕊异黄酮葡萄糖苷在0.035~1.042μg(r=0.9996),金雀异黄酮在0.027~0.821μg(r=0.9997),芒柄花素在0.031~0.941μg(r=0.9999),美迪紫檀素在0.025~0.745μg(r=0.9992)范围内均成良好的线性关系。毛蕊异黄酮葡萄糖苷、金雀异黄酮、芒柄花素和美迪紫檀素的加样回收率分别为100.32%(RSD=1.87%),99.3%(RSD=1.76%),100.5%(RSD=1.48%),99.2%(RSD=1.45%)(n=6)。结论：该方法分析时间短、稳定性和准确度良好,对红芪药材的质量控制具有一定的参考价值。
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牛大力的化学成分研究
目的 研究牛大力Millettia speciosa Champ.的化学成分.方法 对牛大力的乙醇提取物进行色谱分离,用波谱方法和理化性质鉴定各化合物的结构.结果 分离得到14个化合物,分别鉴定为3β,11α-二羟基-6(7),12(13)-二烯-乌苏烷(Ⅰ)、3β,11α-二羟基-12(13)-烯-乌苏烷(Ⅱ)、异甘草素(Ⅲ)、美迪紫檀素(Ⅳ)、2',4,4',α-四羟基二氢查耳酮(Ⅴ)、2',4-二羟基-4'-甲氧基查耳酮(Ⅵ)、高丽槐素(Ⅶ)、3',4'-二羟基-7-甲氧基异黄酮(Ⅷ)、4-羟基-2',4-二甲氧基查耳酮(Ⅸ)、2',4',α-三羟基-4-甲氧基二氢查耳酮(Ⅹ)、毛蕊异黄酮(Ⅺ)、8-hydroxypinoresinol(Ⅻ)、甘草异黄醇(Ⅻ)、3',4',7-三羟基异黄酮(ⅩⅣ).结论 除化合物Ⅲ、Ⅳ、Ⅶ外,其余11个均为首次从该植物中分离得到.
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RP-HPLC法测定毛果鱼藤中美迪紫檀素的含量
目的 建立毛果鱼藤药材中美迪紫檀素的RP-HPLC含量测定方法.方法 采用Hypersil-BDS C18色谱柱(5μm,250 mum ×4.6 mm),柱温30.0℃,流动相为乙腈(A)-0.1％醋酸水溶液(B)梯度洗脱(0 ～30 min,20％ A→40％A,80％ B→60％B),流速为1.0 mL/min,检测波长为276 nm,进样体积为20μL.结果 美迪紫檀素在0.0572～1.1440μg(R2=0.9992)范围内与峰面积有良好的线性关系,加样回收率为100.78％,RSD为1.81％.结论 该方法简便、准确,重复性好,可用于毛果鱼藤药材的质量控制.
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美迪紫檀素的体外细胞毒性研究
目的：探究美迪紫檀素对正常大鼠心肌细胞 H9C2、人胚肝细胞 L-02、人胚肾上皮细胞 HEK293、大鼠主动脉血管平滑肌细胞 VSMC的细胞毒性作用。方法体外培养 H9C2、L-02、HEK293、VSMC细胞，加入不同浓度（0．1、1、5、10、50、100、200、250、300μmol／L）的美迪紫檀素溶液，采用 MTT法检测美迪紫檀素对细胞增殖的影响；同时给予1、50、300μmol／L的美迪紫檀素溶液，利用 Hoechst33342荧光染色观察细胞凋亡情况，并考察细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）及肌酸激酶（CK）活性的变化。结果与对照组比较，0．1～300μmol／L浓度下的美迪紫檀素对 H9C2细胞增殖和凋亡没有影响，培养液中的 LDH、AST、ALT活性无统计学差异（P ＞0．05）。0．1～300μmol／L浓度下的美迪紫檀素均可抑制 L-02和 VSMC细胞增殖，促进细胞的凋亡，并可使培养上清液中的 LDH活力增加，L-02细胞培养上清液中 AST和 ALT活力也增加（P ＜0．05），在250～300μmol／L范围内对 HEK293细胞有一定的抑制作用，促进其凋亡，并增加 LDH活力。美迪紫檀素对 L-02和 HEK293细胞的抑制作用呈浓度依赖性。结论美迪紫檀素对 H9C2细胞生长没有影响，对 L-02、VSMC 细胞生长有一定的影响，250～300μmol／L浓度的美迪紫檀素对 HEK293细胞生长有影响。
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HPLC同时测定鸡血藤中芒柄花素和美迪紫檀素等6个黄酮类成分
目的:建立HPLC同时测定鸡血藤中原儿茶酸、儿茶素、表儿茶素、甘草素、芒柄花素、美迪紫檀素含量的方法,为鸡血藤药材质量标准改进提供参考.方法:采用ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),以乙腈(A)-0.2％磷酸(B)为流动相进行梯度洗脱,流速1 mL· min-1,检测波长为260 nm(检测原儿茶酸、芒柄花素)和280 nm(检测儿茶素、表儿茶素、甘草素、美迪紫檀素),柱温30℃.结果:原儿茶酸、儿茶素、表儿茶素、甘草素、芒柄花素、美迪紫檀素的质量浓度分别在2.286～228.6 μg· mL-1(r=0.999 9)、2.174～217.4 μg· mL-1(r=0.999 9)、2.79～279 μg· mL-1(r=0.999 9)、0.424～42.4 μg·mL-1(r=0.999 9)、2.426～242.6μg· mL-1(r=0.999 9)、0.339～33.92 μg· mL-1(r=0.999 8)的范围内线性关系良好,加样回收率分别为99.8％(RSD=1.0％)、99.8％(RSD=2.5％)、101.2％(RSD=2.3％)、100.8％(RSD=1.8％)、100.9％(RSD=2.3％)、100.6％(RSD=2.4％).11批药材中原儿茶酸、儿茶素、表儿茶素、甘草素、芒柄花素、美迪紫檀素含量范围分别为0.250～0.898、1.447～5.662、1.759～11.925、0.035～0.134、0.218～0.535、0.065～0.585 mg·手1.结论:该方法可用于同时测定鸡血藤中6个黄酮类成分的含量,为该药材的质量标准改进提供参考.
