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HPLC波长切换联合梯度洗脱法同时测定消疲灵颗粒中的7种成分
目的 建立同时测定消疲灵颗粒中7种成分含量的HPLC波长切换联合梯度洗脱方法.方法 采用Venusil MP-C18色谱柱,流动相为乙腈-1％冰醋酸溶液,流速为0.9 mL·min-1,梯度洗脱,柱温为30℃,进样量为10 μL.结果 牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、金丝桃苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素检测浓度分别在2.56～51.20 μg·mE-1,14.87～297.40 μg·mL-1,2.14～42.80 μg.mL-1,3.16～63.20 μg·mL-1,3.80～76.00 μg.mL-1,2.14～42.80 μg·mL-1,4.81～96.20 μg·mL-1内与峰面积呈良好的线性关系(r≥0.999 1),平均回收率97.0％～100.0％,RSD 0.55％～1.67％,精密度和重复性良好,供试品溶液在室温条件下12h内稳定.结论 该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于消疲灵颗粒中7种有效成分含量的同时测定.
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高速逆流色谱法分离纯化黄芪中毛蕊异黄酮苷和芒柄花苷
目的:建立高速逆流色谱法(HSCCC)分离纯化黄芪中毛蕊异黄酮苷和芒柄花苷的方法.方法:黄芪粗提物分别采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1:10:2:10)、乙酸乙酯-乙醇-正丁醇-水(30:10:6:50)两相溶剂系统进行HSCCC分离纯化,下相为流动相,流速分别为2.5 mL·min-1、2.0 mL·min-1,转速900 r·min-1,检测波长254 nm,所得产物采用高效液相进行纯度测定.结果:300 mg黄芪粗提物分离得到毛蕊异黄酮苷(20 mg)、芒柄花苷(25 mg),两个化合物经高效液相色谱法(HPLC)分析,纯度均大于95%.结论:高速逆流色谱法是一种高效分离纯化黄芪中毛蕊异黄酮苷和芒柄花苷的方法.
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基于HPLC波长切换法对舒肝益脾液中7种成分的质量控制研究
目的:建立HPLC波长切换法同时测定舒肝益脾液中7个成分.方法:色谱柱:Luna C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.05％磷酸溶液,梯度洗脱;流速:0.9 ml·min-1;检测波长:345 nm(滨蒿内酯)、254 nm(毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素)和210 nm(去氢茯苓酸和茯苓酸);柱温:30℃,进样量:10μl.结果:滨蒿内酯、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、去氢茯苓酸、茯苓酸7个成分的线性范围分别为6.09～152.25μg·ml-1(r=0.999 9)、2.42～60.50 μg·ml-1(r =0.999 8)、1.61 ～40.25 μg·ml-1(r =0.999 6)、2.95～73.75 μg·ml-1(r =0.999 4)、6.88 ～ 172.00 μg·ml-1(r =0.999 9)、2.55 ～63.75μg·ml-1(r =0.999 5)、2.09～52.25 μg·ml-1(r =0.999 9);平均加样回收率分别为98.96％ (RSD=1.18％),97.89％(RSD=1.41％),97.18％(RSD=0.88％),96.87％ (RSD =0.97％),99.32％(RSD=1.25％),96.77％(RSD=0.86％)和98.55％(RSD=1.03％)(n=9).结论:本文建立的HPLC波长切换法同时测定舒肝益脾液中的7个成分,方法简便,可作为舒肝益脾液全面可靠的质量控制方法.
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新胃乃安片中4种异黄酮成分的同时鉴别及抗氧化活性的初步筛选
目的:建立新胃乃安片中芒柄花素、毛蕊异黄酮、芒柄花苷及毛蕊异黄酮苷4种异黄酮成分的同时鉴别方法,并对其抗氧化活性进行初步筛选研究.方法:采用薄层色谱-生物自显影技术,以甲苯-乙酸乙酯-甲醇(20∶ 20∶9)为展开剂对上述4种成分进行分离鉴别,以清除2,2-二苯基-1-苦肼基(DPPH)自由基能力对鉴定成分进行抗氧化活性筛选.结果:薄层色谱特征明显,在同一薄层板上能同时鉴别芒柄花素、毛蕊异黄酮、芒柄花苷及毛蕊异黄酮苷4种成分,其中筛选出毛蕊异黄酮和毛蕊异黄酮苷具有清除DPPH自由基的活性.结论:建立的方法操作简单,重现性好,可为新胃乃安片的质量控制及药效物质研究奠定基础.
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HPLC法同时测定黄芪中4种黄酮类成分的含量
目的:建立以高效液相色谱法同时测定11个产地黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素4种黄酮类成分含量的方法,从有效成分含量探讨药材道地性内在因素.方法:色谱柱为Zorbax Eclipse XDB-C_(18)(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%甲酸水溶液(梯度洗脱),检测波长为280nm.结果:毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素的检测浓度分别在0.005 1～0.510、0.005 0～0.300、0.004 9～0.294、0.004 6～0.276mg·mL~(-1)范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r均为0.999 9).内蒙古、山西等4个产地的黄芪中毛蕊异黄酮苷和芒柄花苷的含量较高;河北安国、赤城和甘肃定西产黄芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素含量较高.结论:本方法简便、快速、准确,试验结果与黄芪本草考证、道地沿革的文献基本相符.
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不同品种、产地和种植方式黄芪药材中黄酮类成分的质量分析
目的：建立同时测定黄芪药材中黄酮类成分含量的方法，探讨黄芪药材中黄酮类成分与品种、产地和种植方式的关系。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Venusil ASB，流动相为乙腈-0.3％甲酸（梯度洗脱），流速为1.0 ml/min，检测波长为260 nm，柱温为25℃。比较多省份28批野生和栽培的蒙古黄芪和膜荚黄芪的药材质量。结果：毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素检测质量浓度线性范围分别为0.0089～2.224 mg/ml（r＝0.9995）、0.0052～1.3 mg/ml（r＝0.9996）、0.0028～0.6976 mg/ml（r＝0.9999）、0.002～0.5 mg/ml（r＝0.9999）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜1％；加样回收率分别为99.52％～100.74％（RSD＝0.41％，n＝6）、98.84％～100.60％（RSD＝0.60％，n＝6）、98.47％～101.74％（RSD＝1.08％，n＝6）、100.10％～101.59％（RSD＝0.32％，n＝6）。从品种分析，蒙古黄芪药材中毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、总黄酮的含量要高于膜荚黄芪，但毛蕊异黄酮、芒柄花素的含量少于膜荚黄芪；从产地分析，内蒙古、山西产黄芪药材中毛蕊异黄酮苷、总黄酮的含量高，东北、甘肃次之，山东、安徽、陕西较低；从种植方式分析，野生黄芪药材中毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、总黄酮的含量高于栽培品种，栽培黄芪药材中毛蕊异黄酮、芒柄花素含量高于野生品种。结论：该方法操作简便、稳定、重复性好，可用于黄芪药材中黄酮类成分含量的同时测定。不同产地黄芪药材中4种黄酮类成分含量差异大，药材的品种、产地和种植方式是影响黄芪质量的主要因素。
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单因素试验结合Box-Behnken设计-响应面法优化甘草中黄酮类成分的提取工艺
目的:优化甘草中黄酮类成分的提取工艺.方法:以芹糖甘草苷、甘草苷、芹糖异甘草苷、芒柄花苷4种黄酮类成分的总提取量为考察指标,以提取溶剂种类(水、乙醇)及其不同体积分数、加入量与提取时间为考察因素,在单因素试验基础上,运用Box-Behnken设计-响应面法优化甘草中黄酮类成分的提取工艺,并进行验证试验.结果:优化的提取工艺为以50％乙醇为提取溶剂,在0.200 g药材中加入50 mL,超声提取50 min.在验证试验中,芹糖甘草苷、甘草苷、芹糖异甘草苷、芒柄花苷提取量分别为10.7330、27.7849、3.4419、0.4291 mg/g(RSD均<3.0％,n=3),4种黄酮类成分平均总提取量为42.3889 mg/g,与预测值(42.1732 mg/g)的相对误差为0.52％(n=3).结论:优化的提取工艺简便、快捷、稳定,可用于甘草中黄酮类成分的提取.
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HPLC法测定不同产地黄芪中芒柄花苷的含量
目的:测定十批不同产地黄芪药材中芒柄花苷的含量,用以评价不同产地的黄芪的质量,为实际生产和临床应用黄芪药材的选择提供参考.方法:采用80％甲醇回流提取,反相高效液相色谱法进行测定.Diamonsil钻石C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相∶乙腈∶水=25∶75等度洗脱;流速:1ml· min-1;柱温:30℃;检测波长254nm.结果:内蒙古和山西产的黄芪中芒柄花苷的含量较甘肃与长春高.结论:不同产地的黄芪中芒柄花苷的含量差异较大,同一产地黄芪中的芒柄花苷的含量也存在差异.
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HPLC法测定不同主产地黄芪饮片的4种黄酮的含量
目的 采用HPLC法同时测定不同主产地黄芪饮片中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素的含量.方法 色谱柱固定相为Inertsil ODS-SP C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相乙腈-水(含0.2％甲酸),梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,紫外检测波长260 nm,柱温为40℃.结果 毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素在0.00569 ～0.0569、0.00448 ～0.0448、0.00257～0.0257、0.00265～0.0265mg/mL时与色谱峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为98.72％、99.32％、100.03％、99.78％,RSD为1.06％、2.32％、2.86％、1.08％.结论 该方法准确灵敏,可作为评价不同产地黄芪饮片的质量控制方法.
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UPLC法同时测定三黄睛视明丸中9个成分含量
目的:建立超高效液相色谱法同时测定三黄睛视明丸中香蒲新苷、毛蕊异黄酮苷、异鼠李素-3-O-新橙皮苷、芒柄花苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd 9个成分的含量.方法:采用Waters Acquity UPLC(R) BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm),柱温30℃,流动相为水(A)-乙腈(B),梯度洗脱,流速0.3 mL· min-1,检测波长203 nm.结果:香蒲新苷、毛蕊异黄酮苷、异鼠李素-3-O-新橙皮苷、芒柄花苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd的线性范围分别为1.92～36.94 ng(r=0.999 8)、1.90～36.63 ng(r=0.999 9)、1.88～36.20 ng(r=0.999 6)、0.99～19.09 ng(r=0.999 2)、40.04～770.05 ng(r=0.999 8)、107.78～2 072.68 ng(r=0.999 8)、31.74～610.34 ng(r=0.999 1)、81.33～1 564.08 ng(r=0.999 9)、19.711～379.06ng(r=0.999 9);平均回收率(n=6)均在91％～105％之间,RSD均小于3.0％.测定的3批样品中上述9个成分含量范围分别为0.261～0.294、0.196～0.209、0.189～0.193、0.101～0.111、2.728～2.773、12.051～12.196、3.235～3.313、8.317～8.464、2.131～2.229 mg·g-1.结论:所建立的多成分含量测定方法可用于三黄睛视明丸质量控制.
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黄芪颗粒的HPLC特征图谱研究及4个成分含量测定
目的:建立黄芪颗粒的HPLC特征指纹图谱分析方法,并测定该制剂中毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素的含量,为其质量控制提供依据.方法:利用HPLC法,采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(5 μm,4.6 mm×250mm),使用甲醇-0.5％甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长254 nm.采用外标法,利用毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素的混合对照测定其在30批制剂中的含量.结果:建立了黄芪颗粒HPLC特征指纹图谱共有模式,标定了23个共有峰,指认了其中4个共有峰,统计结果显示,不同生产时间30批次黄芪颗粒被分为两大类,两类样品的色谱峰共有模式具有一定差异,这与黄芪颗粒投料原料黄芪药材有2个法定来源相吻合.4个物质在两类制剂之间含量存在较大差异,两类制剂之内含量基本一致.结论:HPLC特征图谱方法与4个物质的含量测定方法快速、准确、简便,均可用于黄芪颗粒的质量控制.
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碱处理在微量黄芪药材质控指标成分含量测定中的应用研究
目的:建立碱处理微量黄芪药材测定黄芪皂苷Ⅳ、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花苷含量的方法,表征碱处理提高上述指标成分收率的有关物质转化特征.方法:取传统采收期黄芪根0.15 g,按1∶30的比例加入70％乙醇(内含不同浓度的氨水),超声提取,进行碱处理体系的优化.利用UPLC-QTRAP-MS多反应离子监测模式,采用BEH C18(2.1mm×50 mm,1.7 rm)色谱柱,以0.1％甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,流速:0.2 mL·min-1,柱温:30℃,测定黄芪皂苷Ⅳ含量;采用2015年版《中华人民共和国药典》黄芪含量测定项下毛蕊异黄酮葡萄糖苷色谱条件,HPLC法测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花苷含量;UPLC-Q-TOF-MS法进行有关化合物的指认.结果:用含4％氨水的70％乙醇提取时,三质控指标成分收率高,对应的检测线性范围分别为10.70～85.60μg·mL-1、1.039～72.73 μg· mL-1和1.051～73.57 μg· mL-1.该优化体系中,黄芪皂苷Ⅰ、酰基化毛蕊异黄酮葡萄糖苷和酰基化芒柄花苷转化较为完全,黄芪皂苷Ⅱ部分转化;此外,还存在一未知化合物向黄芪皂苷Ⅳ的明显转化.采用该优化体系分析发现,根施外源正己醛组黄芪药材中黄芪皂苷Ⅳ含量明显高于对照,但两异黄酮组分组间无显著差异.结论:建立了一种碱处理微量黄芪测定黄芪皂苷Ⅳ、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花苷含量的方法,该方法显著提高了黄芪药材中3个质控指标成分的收率,可应用于微量黄芪的质量评价与品质形成研究.
