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芒柄花黄素对阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力及海马β-淀粉样蛋白前体蛋白的影响
目的 探讨芒柄花黄素(FMN)对阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆及海马β-淀粉样蛋白前体蛋白(APP)的影响.方法 小鼠随机分成对照组、模型组、多奈哌齐组(1 mg/kg)、FMN高剂量组(30 mg/kg)、FMN中剂量组(15 mg/kg)、FMN低剂量组(7.5 mg/kg).采用β-淀粉样蛋白1-42(80pmol/μL)双侧脑室注射的方法诱导AD模型,连续治疗40天后取材.采用Morris水迷宫检测AD小鼠学习记忆能力,采用酶联免疫吸附检测AD小鼠海马APP含量.结果 与对照组比较,模型组小鼠潜伏期明显延长(P<0.05);与模型组比较,FMN高剂量组(30 mg/kg)和FMN中剂量组(15mg/kg)小鼠的学习记忆能力明显改善(P<0.05),包括潜伏期明显缩短(P<0.05),游泳距离明显减少(P<0.05),目标停留时间明显延长(P<0.05),跨平台次数明显增加(P<0.05),游泳轨迹多为直线型和趋化型,并且海马APP水平明显降低(P<0.05).结论 FMN能改善AD模型小鼠的学习记忆能力,FMN能够通过抑制APP在AD治疗中发挥重要的作用.
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芒柄花黄素对大鼠局部脑缺血再灌注损伤保护作用的初步研究
目的 探讨芒柄花黄素对大鼠脑局部缺血再灌注损伤的神经保护作用.方法 采用随机数字表法将42只SD雄性大鼠分为假手术组、缺血再灌注组和芒柄花黄素组,每组14只.芒柄花黄素组腹腔注射芒柄花黄素溶液20 mg/kg,假手术组和缺血再灌注组注射等剂量生理盐水,连续7d.线栓法复制大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,缺血时间1.5 h.再灌注后24 h各组分别进行神经功能缺损测定;干/湿重法检测脑水肿程度;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TrC)染色计算脑梗死体积并检测血浆超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)水平.结果 与缺血再灌注组比较,芒柄花黄素组大鼠神经功能缺损评分降低,第二脑片梗死体积和第三脑片水肿程度减轻,血浆SOD活性提高,MDA水平下降,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 芒柄花黄素可改善大鼠脑缺血再灌注后神经功能缺损程度,减小脑梗死体积,其机制可能与减低氧化应激水平有关.
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芒柄花黄素对人膀胱癌细胞T739增殖、凋亡的影响及机制探讨
目的 观察芒柄花黄素对人膀胱癌细胞T739增殖与凋亡的影响及其机制探讨.方法 分别采用0、15、30、60 μmol/L的芒柄花黄素作用T739细胞后,CCK8法检测T739细胞的增殖情况,流式细胞术检测凋亡率的变化,Hoechst 33258荧光染色法观察凋亡情况,Western blot检测GSK-3β、Axin、β-catenin蛋白含量变化.结果 15、30、60 μmol/L的芒柄花黄素以浓度和时间依赖方式明显抑制T739细胞的增殖(P＜0.05),且作用T739细胞48 h后凋亡率随药物剂量增加显著上升(P＜0.05),呈浓度-效应关系.Hoechst33258染色显示T739细胞随药物浓度的升高,凋亡明显增多.Western blot法显示GSK-3β及Axin蛋白表达随药物浓度升高而增加(P＜0.05),β-catenin 蛋白水平则随药物浓度升高而降低(P＜0.05),且均呈浓度-效应关系.结论 芒柄花黄素对T739细胞有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与芒柄花黄素上调GSK-3β、Axin蛋白表达和降低β-catenin蛋白水平有关.
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反相二维色谱制备甘草中黄酮类化合物
目的 构建甘草黄酮类化合物系统性分离制备方法.方法 采用特异性吸附材料富集甘草中的黄酮类化合物,以自主研发的制备色谱工厂系统,采用色谱分离专家系统软件优化分离制备条件,通过上样量和富集次数等参数的考察,建立了基于分离富集模式的反相二维色谱制备甘草黄酮有效部位及单体化合物的方法.结果 建立了以C18为分离、富集填料,甲醇-水、乙腈-水为一维、二维分离流动相,水为富集稀释液,梯度洗脱体积流量和稀释富集液的体积流量均为21 mL/min,上样量300 mg,富集次数3次的二维色谱分离制备甘草黄酮的方法,其分离过程具有良好的重复性.应用该方法分离制备,可重复获得16个甘草黄酮部位和甘草苷、甘草素、芒柄花黄素、刺甘草查耳酮、7,4'二羟基黄酮、4'-O-[β-D-apio-D-furanosyl-(1 →2)-β-D-glucopyranosyl] liquiritigenin、异甘草素、甘草酚、甘草香豆素共9个单体化合物.结论 建立的甘草黄酮的制备方法为甘草资源的综合利用和甘草黄酮活性药物开发奠定了基础.
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芒柄花黄素对人黑色素瘤细胞株A375凋亡的影响
目的：研究芒柄花黄素对人黑色素瘤细胞 A375凋亡的影响。方法以人黑色素瘤细胞 A375为研究对象，MTT法检测不同浓度的芒柄花黄素对 A375细胞活性的影响，并用流式细胞术检测芒柄花黄素导致的细胞凋亡率；用Western blot方法检测cleaved Caspase-3、Bax、Bcl-XL的蛋白表达水平，从而初步探讨其凋亡的机制。结果芒柄花黄素可降低A375细胞的活力并增加其凋亡率，Western blot 结果显示芒柄花素增加了 A375中 cleaved Caspase-3蛋白的表达，减少了抗凋亡蛋白 Bcl -XL 的表达，并增加促凋亡蛋白 Bax 表达。结论芒柄花黄素可抑制 A375细胞的活力并诱导细胞凋亡，其机制与减小 Bcl-XL/ Bax 蛋白表达比例，从而启动 Caspase-3介导的凋亡途径有关。
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山奈酚和芒柄花黄素对缺氧/复氧条件下H9C2心肌细胞活性氧水平的影响
目的:分析中药单体山奈酚和芒柄花素对缺氧复氧诱导的H9C2心肌细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的影响.方法:采用缺氧复氧的造模方法对H9C2心肌细胞进行造模,选用夹竹桃作为阳性药组,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验阐明含药培养基对实验体系的影响,并初步确定中药单体的给药浓度;通过倒置荧光显微镜观察经乙酰乙酸双氯荧光素(DCFH-DA)染色的H9C2心肌细胞的荧光强弱,即细胞内活性氧的变化;通过流式细胞仪进一步测定细胞内活性氧的定量变化.结果:通过MTT实验确定各组给药浓度为10-6mol/L,用DCFH-DA法染色后经倒置荧光显微镜观察各组细胞内绿色荧光有显著变化,即正常组镜下观察细胞内的荧光很暗,模型组细胞内的绿色荧光很强,发光细胞数量也相对很多,给药组细胞内绿色荧光介于两组之间,与阳性药组相似;流式细胞仪测定结果显示除山奈酚组外,各给药组与模型组相比都有统计学差异,其中以芒柄花素组、混合组、夹竹桃组为显著.结论:山奈酚和芒柄花素对心肌细胞有一定的保护作用,能够改善细胞贴壁的状态,增加细胞存活率,降低心肌细胞内ROS水平.
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芒柄花黄素对阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力及海马毛细血管超微结构的影响
目的 探讨芒柄花黄素(FMN)对阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆能力和海马毛细血管超微结构的影响.方法小鼠随机分成对照组,模型组,多奈哌齐组(1 mg/kg),FMN高、中、低剂量组(30.0、15.0、7.5 mg/kg).采用 β-淀粉样蛋白(Aβ)1～42(80 pmol/μl)脑室注射诱导AD模型,连续治疗30 d后取材.采用Morris水迷宫(MWM)检测AD小鼠学习记忆能力,透射电镜观察海马超微结构,免疫组织化学法(IHC)检测海马Aβ转运蛋白低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)1与晚期糖基化终产物(RAGE)表达,采用酶联免疫吸附实验检测海马白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量.结果与模型组比较,FMN高、中剂量组学习记忆能力明显改善(P<0.05),透射电镜观察毛细血管结构明显改善,海马组织LRP1蛋白表达量明显升高(P<0.05)且RAGE、IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达量明显降低(P<0.05).结论FMN通过改善Aβ转运蛋白和炎症介质水平来改善AD小鼠学习记忆能力和海马毛细血管超微结构.
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LC-MS-MS法同时测定黄芪注射液和黄芪口服液中5种成分
目的 建立LC-MS-MS法同时测定黄芪注射液和黄芪口服液中黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花黄素5种有效成分的含有量.方法 黄芪注射液和黄芪口服液甲醇稀释液在Agilent ZORBAX SB C18(2.1 mm×150mm,5μm)色谱柱上分离,流动相为甲醇-水(含0.1％甲酸,70:30,V/V);体积流量为300μL/min.MS采用电喷雾离子源,多反应监测方式进行正离子扫描.结果 5种成分在测定浓度范围内均具有良好的线性关系,在黄芪注射液和黄芪口服液中的平均回收率分别为96.8％ ～102.3％和95.9％ ～101.5％.结论 本法测得结果准确、可靠、灵敏度高,可用于黄芪注射液和黄芪口服液的质量控制.
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芒柄花黄素通过SphK1-SIP信号通路抑制大鼠局灶性脑缺血再灌注后的炎症反应
目的:探讨芒柄花黄素(formononetin,FN)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后炎症反应的治疗作用及其可能机制.方法:60只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、FN低中高剂量组(8、16、32 mg/kg)和尼莫地平组(12 mg/kg),每组10只,应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,并评价其神经功能缺损情况,缺血2h再灌注24 h后处死动物,红四氮唑(TTC)染色观察脑梗死体积的变化,并测定各组缺血区脑组织炎症因子表达,同时测定各组缺血区脑组织核转录因子-kappaB (NF-κB)和鞘氨醇激酶-1/1-磷酸鞘氨醇(SphK1/S1P)信号通路的表达变化.结果:FN各剂量组炎症因子表达均显著降低,且NF-κB和SphK1/S1P信号通路的激活均得到显著抑制.结论:FN对大鼠局灶性脑缺血再灌注后炎症反应保护作用机制可能与抑制SphK1/S1P信号通路表达有关.
关键词： 芒柄花黄素 缺血再灌注 炎症 SphK1/S1P信号通路 -
异黄酮类化合物抗肿瘤细胞增殖作用
目的研究3个从怀槐(Maackia amurensis)中提取分离得到的异黄酮单体化合物(染料木素genistein、芒柄花黄素formononetin、鸢尾种苷元tectorigenin)的抗肿瘤细胞增殖效应.方法采用MTT法将不同浓度的异黄酮单体化合物分别对2种肿瘤细胞进行生长抑制实验.结果三者在浓度为10 μg/ml和100 μg/ml时对人胃癌细胞(BGC)和人淋巴样白血病细胞(HL-60)的生长均有不同程度的抑制作用.结论三者中染料木素genistein对BGC细胞的生长抑制作用强,鸢尾种苷元tectorigenin对HL-60细胞的生长抑制作用强.
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HPLC法测定新风胶囊中芒柄花黄素的含量
目的：建立测定新风胶囊中芒柄花黄素含量的方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为 welch material Inc C18柱，流动相为乙腈-0.2％磷酸水（40∶60），流速为1.0mL· min －1，检测波长为250nm，柱温为30℃，进样量为10μL。结果芒柄花黄素在0.197μg～1.574μg范围内线性关系良好（r＝1.0000，n＝6），平均回收率为100.73％（RSD＝1.48％）。结论该方法简便、准确、重复性好，适用于新风胶囊中芒柄花黄素的含量测定，可为该制剂全面的质量控制奠定基础。
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芒柄花黄素对人胃癌细胞株MKN-45增殖、凋亡的影响及其机制
目的 观察芒柄花黄素对人胃癌MKN-45细胞株增殖、凋亡的影响,并探讨其可能作用机制.方法 取对数生长期人胃癌MKN-45细胞分为A、B、C、对照组,A、B、C组分别加入20、40、80 μg/mL芒柄花黄素培养,对照组加入不含芒柄花黄素的完全培养基.采用MTT法观察给药24、48、72 h各组细胞增殖情况,计算细胞增殖抑制率.采用DAPI染色法评价其对MKN-45细胞形态学的影响.采用Western blotting法检测给约48 h时各组细胞磷酸化IκB(p-IκB)及NF-κB p65.结果 随芒柄花黄素浓度升高,细胞增殖抑制率升高,且随干预时间增加,细胞增殖抑制率升高(P均＜0.05).给药72 h时A、B、C、对照组的凋亡率分别为25.62％±2.57％、48.27％±3.18％、72.51％±4.35％、1.07％±0.54％,A、B、C组与对照组相比,P均＜0.05.给药48 h时A、B、C组细胞p-IκB、NF-κB p65蛋白相对表达量均高于对照组,且随芒柄花黄素浓度升高,细胞p-IκB及NF-κB p65蛋白相对表达量增加,P均＜0.05.结论 芒柄花黄素可抑制人胃癌MKN-45细胞株的增殖、促进细胞凋亡,其机制可能为芒柄花黄素激活NF-κB信号通路.
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芒柄花黄素对人鼻咽癌细胞株HONE1凋亡的诱导作用及其机制探讨
目的 观察芒柄花黄素对人鼻咽癌细胞株HONE1细胞凋亡的诱导作用,并探讨其相关机制.方法 用含不同浓度(0、5、10、20、40、80、160μmol/L)芒柄花黄素的培养基分别培养人鼻咽癌细胞株HONE124、48、72 h,采用MTT法观察芒柄花黄素对HONE1细胞活性的影响.采用Hoechst33258荧光染色从形态学上观察芒柄花黄素处理的HONE1细胞凋亡情况.用Western blotting检测不同浓度(0、5、10、20、40μmol/L)芒柄花黄素处理的HONE1细胞的p-Akt、Akt、BAX和Bcl-2蛋白.结果 Hoechst33258荧光染色结果显示,芒柄花黄素处理较未处理的人鼻咽癌细胞株HONE1凋亡细胞数明显增加.0、5、10、20、40μmol/L芒柄花黄素处理48 h后HONE1细胞p-Akt/Akt值分别为0.311±0.035、0.169±0.029、0.116±0.038、0.143±0.012、0.082±0.015,5、10、20、40μmol/L与0μmol/L比较,P均＜0.05.0、5、10、20、40μmol/L芒柄花黄素处理48 h后HONE1细胞BAX/Bcl-2值分别为1.445±0.167、1.678±0.257、2.637±0.619、3.292±0.339、4.285±0.899,10、20、40μmol/L与0μmol/L比较,P均＜0.05.结论 芒柄花黄素可诱导人鼻咽癌细胞株HONE1细胞凋亡,这可能是通过下调p-Akt/Akt、上调BAX/Bcl-2实现的.
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芒柄花黄素对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨
目的 观察芒柄花黄素对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制.方法 将结直肠癌细胞HCT116随机分为两组,观察组分别以25、50、100μmol/L芒柄花黄素处理,对照组以等量二甲基亚砜处理;用MTT法检测细胞增殖情况(A490),Hoechst荧光染色法计数凋亡细胞,qRT-PCR法检测细胞中的HOC转录反义RNA(HOTAIR),Western blot法检测细胞中的Bax和Bcl-2.结果 与对照组比较,观察组随着芒柄花黄素浓度增加及处理时间延长HCT116细胞A490值降低(P均<0.05);观察组以25、50、100μmol/L芒柄花黄素处理48 h后HCT116细胞凋亡数分别为(3.20±0.84)、(20.20±1.92)、(31.00±2.92)个/HP,均高于对照组的(1.6±1.14)个/HP(P均<0.01);与对照组比较,观察组细胞HOTAIR、Bcl-2表达量降低,而Bax表达量增加,P均<0.05.结论 芒柄花黄素可能通过抑制HOTAIR调节Bax和Bcl-2的表达,从而抑制结直肠癌细胞的生长并诱导细胞凋亡.
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芒柄花黄素在多种恶性肿瘤中抗癌作用的研究进展
芒柄花黄素是富含于天然植物红色车轴草和传统中药黄芪的一类植物雌激素,它具有降血压、调节炎症反应和脂类代谢等药理学作用.研究显示,芒柄花黄素对乳腺癌、女性生殖系恶性肿瘤、泌尿系肿瘤等也具有抗癌效应,其机制与芒柄花黄素在多种恶性肿瘤中具有抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡、抑制细胞侵袭转移等作用效应有关.
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芒柄花黄素对小鼠体内SOD、MDA、GSH-Px和BUN的影响
目的 验证芒柄花黄素对小鼠体内超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性和血尿素氮(BUN)的含量的影响.方法 将小鼠分为低、中、高剂量组及对照四个组,将芒柄花黄素按不同浓度腹腔注射到小鼠体内,连续给药7d后进行小鼠游泳实验,小鼠在水中游泳10min后将其捞起,颈椎离断致死后立即抽取血清样本制作肝脏匀浆,检测血清样本中的BUN和肝脏中的SOD、MDA、GSH-Px等指标.结果 芒柄花黄素在浓度为32mg/kg时,能有效的降低小鼠体内MDA活性,并且提高小鼠体内SOD、GSH-Px的活性,还能降低小鼠体内血清BUN的含量(P均<0.05).结论 芒柄花黄素通过增强抗氧化酶活性、减少氧自由基生成、调节能量代谢等方面对小鼠起到明显的抗疲劳作用.
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芒柄花黄素对膀胱癌细胞凋亡作用及对β-catenin通路的影响
目的 研究芒柄花黄素对膀胱癌细胞的凋亡作用及对β-catenin通路的影响.方法 选择不同浓度(20、40、80 μmol/L)的芒柄花黄素作用膀胱癌T24、EJ细胞,同时设对照组(芒柄花黄素浓度为0μmol/L),采用CCK8法检测两种细胞被各浓度药物处理0、24、48和72 h后的细胞增殖情况,采用流式细胞术检测两种细胞被各浓度药物处理48 h的细胞凋亡率,Hoechst 33258荧光染色法检测T24细胞被各浓度药物处理48 h后的细胞凋亡情况,RT-PCR检测T24细胞被各浓度药物处理48 h后β-catenin mRNA表达水平.结果 CCK8实验显示芒柄花黄素明显抑制膀胱癌T24、EJ细胞增殖,呈剂量和时间依赖性(P＜0.05),并且药物对T24细胞的抑制增殖效果比EJ细胞高(P＜0.05);流式细胞术显示T24细胞的对照组及20、40、80 μmol/L芒柄花黄素组48 h后凋亡率分别为(1.75±0.71)％、(5.21±1.02)％、(17.78±1.67)％、(30.48±2.51)％,而EJ细胞凋亡率分别为(1.95±1.21)％、(4.84±1.35)％、(14.87 ±2.59)％、(21.84±2.64)％,与对照组比较,两种细胞的40、80 μmol/L芒柄花黄素组凋亡率显著增高(P＜0.05),并且芒柄花黄素对T24细胞的凋亡影响比对EJ细胞更明显(P＜0.05);Hoechst33258染色显示T24细胞随药物浓度的升高,凋亡明显增多;RT-PCR结果显示T24细胞中β-catenin的mRNA表达水平随着药物浓度升高而降低(P＜0.05).结论 芒柄花黄素能抑制膀胱癌T24细胞和EJ细胞增殖、诱导其凋亡,其机制可能与抑制β-catenin通路有关.
关键词： 芒柄花黄素 膀胱癌 凋亡 β-catenin信号通路 -
芒柄花黄素对HEC-1A荷瘤裸鼠的抗肿瘤作用
目的：研究芒柄花黄素对子宫内膜癌细胞株HEC-1 A荷瘤裸鼠的抗肿瘤活性及作用机制。方法体内建立BALB/c裸鼠HEC-1A荷瘤动物模型，分别经他莫昔芬（40 mg/kg）及芒柄花黄素（20、40、80 mg/kg）干预21 d后，观察实体瘤重量变化以及采用免疫组化检测实体瘤组织中ERα阳性表达量，Western blot法检测实体瘤内源性FOXA1及GATA-3蛋白的表达。结果与模型对照组比较，20、40、80 mg/kg不同剂量的芒柄花黄素有效抑制HEC-1 A荷瘤裸鼠实体瘤的生长（ P＜0.01），减少瘤体组织中ERα阳性表达（ P＜0.01）。此外，明显下调瘤体组织中FOXA1及GATA-3蛋白的表达（P＜0.01）。结论芒柄花黄素能有效抑制HEC-1A肿瘤细胞增殖，其机制与其调节内源性FOXA1、GATA-3蛋白表达而减少雌激素受体水平，从而改善体内的内分泌微环境有关。
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芒柄花黄素在体外对内皮细胞细胞周期的影响
目的 观察芒柄花黄素在体外对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及周期的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同芒柄花黄素对 HUVEC增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测cyclin D1蛋白表达水平.结果 芒柄花黄素呈剂量依赖性促进HUVEC增殖.且药物作用后,S期细胞比例增加,cyclin D1蛋白表达升高.结论 芒柄花黄素对人脐静脉内皮细胞有明显的促进增殖作用,可通过上调cyclin D1蛋白表达增加S期细胞比率.
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芒柄花黄素抑制前列腺癌PC-3细胞增殖及其机制
目的:探讨芒柄花黄素对人前列腺癌PC-3细胞增殖的作用,并初步研究其作用的机制.方法:体外培养人前列腺癌PC-3细胞,以剂量20,40,80 μM的芒柄花黄素干预细胞48h.采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,Real-time PCR检测cyclin D1和CDK4表达.结果:芒柄花黄素抑制PC-3细胞增殖,随剂量增加,细胞增殖的抑制作用增强.芒柄花黄素阻滞PC-3细胞于G1期,并呈剂量依赖关系,80μM的芒柄花黄素干预细胞48h,G0/G1期细胞所占比例为(73.70±0.45)％,高于对照组(41.00±0.61)％,差异有统计学意义(P＜0.05).芒柄花黄素诱导PC-3细胞cyclin D1以及CDK4表达下调.结论:芒柄花黄素抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖,其机制可能是其下调细胞周期相关蛋白cyclin D1和CDK4表达.
