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黄芪皂苷Ⅰ调控PI3K/Akt/NF-κB通路抑制LPS诱导BV-2细胞激活
目的:探讨黄芪皂苷Ⅰ (ASTⅠ)对脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞激活的作用及其分子机制.方法:不同浓度的AST Ⅰ(25、50、100μ mol/L)预处理BV-2细胞2h后,加入LPS(200ng/mL)诱导20h,收集培养基上清及细胞:CCK-8法检测不同浓度的AST Ⅰ对BV-2细胞活性的影响;分别采用ELISA和Greiss法检测培养上清中肿瘤坏死因子d (TNF-α)和一氧化氮(N0)的含量;qPCR法检测细胞中CDllb,TNF-α,诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和白介素1β(IL-1 β)mRNA水平;Western blot法检测细胞PI3K/A KT/NF-κB信号通路蛋白表达;细胞免疫荧光(ICC)法观察p-NFκB的入核情况.结果:AST I在不影响BV-2细胞存活率的条件下,能显著抑制LPS诱导BV-2细胞TNF-α和NO分泌的增加(P＜0.01).qPCR结果显示,AST I能够显著抑制TNF-α,iNOS及IL-1 β的mRNA生成(P＜0.001,P＜0.001,P＜0.05),但对BV-2细胞CDllb的mRNA水平无显著影响.同时,AST Ⅰ能显著抑制BV-2细胞中LPS诱导上调的iNOS,COX-2蛋白表达.AST Ⅰ能够降低LPS诱导的p-NF-κB的核转位作用,并且能够减少LPS引起的PI3K/Akt/NF-κB/IκB蛋白的磷酸化作用.结论:AST I能够抑制LPS诱导BV-2细胞的大量激活,作用机制可能与其抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路有关.
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HPLC-DAD-ELSD法同时测定芪蛭降糖胶囊中6种成分的含量
目的:建立定量测定芪蛭降糖胶囊中4种黄酮类成分:毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素,2种皂苷类成分:黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ的方法.方法:采用HPLC-DAD-ELSD法,Agilent SB-C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相乙腈-0.1％甲酸水溶液梯度洗脱,柱温30℃,体积流量1.0mL/min,检测波长254nm;ELSD漂移管温度100C,气体流量2.4L/min.结果:毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ在0.4296～1.0024μg(r=0.9993)、0.2214～ 0.5166μg(r=0.9991)、0.6762 ～ 1.5788μg(r=1.0000)、0.2286～0.5334μg(r=1.0000)、3.1374 ～ 7.3206μg(r=0.9990)、0.6375～1.4875μg(r=0.9993)范围内分别与峰面积积分值呈良好的线性关系;芪蛭降糖胶囊中6个成分的平均回收率分别为95.28％、96.18％、98.38％、97.61％、96.20％、100.39％.结论:建立了HPLC-DAD-ELSD法同时测定芪蛭降糖胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ含量的方法.方法准确、灵敏度高、重复性好,可为芪蛭降糖胶囊质量控制提供可靠方法.
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山西恒山地区蒙古传统黄芪和移栽黄芪的质量差异研究
目的 比较生长于山西北部恒山及其周边地区的蒙古传统黄芪和移栽黄芪化学成分差异.方法 采用1H-NMR代谢组学技术结合HPLC-UV-ELSD联用技术分别对两种种植模式黄芪的初级代谢物和次级代谢物进行差异性比较.结果 从核磁图谱中共指认出25个代谢物,其中甲醇水相中主要为氨基酸和有机酸等初级代谢物,氯仿相中主要为脂肪酸类物质;多元统计结果显示二者的初级代谢物差异不大,但8,2'-羟基-7,4'-甲氧基异黄烷只在传统黄芪中检测到.采用HPLC-UV-ELSD联用技术测定不同黄芪样本中6种黄酮和4种皂苷的量,结果显示传统黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷和黄芪皂苷Ⅲ量显著高于移栽黄芪,而移栽黄芪中黄芪皂苷Ⅰ的量显著高于传统黄芪,传统黄芪总黄酮量显著高于移栽黄芪,总皂苷量无显著性差异.结论 恒山地区蒙古传统黄芪和移栽黄芪差异性主要体现在次级代谢物上,说明不同种植方式对黄芪次级代谢物的积累影响较大,为恒山地区发展优质的传统黄芪资源奠定了基础.
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防己黄芪汤HPLC-UV/ELSD指纹图谱研究
目的 建立防己黄芪汤(FHD) HPLC-UV/ELSD指纹图谱分析方法,归属和指认复方中主要特征峰.方法 采用HPLC法,色谱柱为Venusil MP C18 (250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液(梯度洗脱),紫外检测器:检测波长为254 nm,蒸发光散射检测器:漂移管温度为110℃,空气体积流量为3 L/min;进样量10 μL;体积流量为1 mL/min.运用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2008版)》对10批FHD指纹图谱进行相似度计算,并对共有峰进行药材归属及成分指认.结果 建立了FHD指纹图谱;10批FHD指纹图谱相似度良好;在FHD HPLC-UV指纹图谱中标定了20个共有峰,其中3、6～8号峰来自防己,1、2、4、5、9、12、13、16、20号峰来自黄芪,10、11、13、14、15、17～19号峰来自甘草.在FHD HPLC-ELSD指纹图谱中标定了16个共有峰,其中1'～3'号峰来自防己,4'、7'、9'、11'、13'、15'、16'号峰来自黄芪,5'～8'、10'、12'、14'号峰来自甘草.通过进样对照品、复方以及在复方中加对照品的方式指认出复方中9个成分,分别为9/4'号峰(毛蕊异黄酮葡萄糖苷)、11/6'号峰(甘草苷)、13/7'号峰(芒柄花苷)、15号峰(甘草素)、16/9,号峰(毛蕊异黄酮)、20/15'号峰(芒柄花素),11'号峰(黄芪甲苷)、13'号峰(黄芪皂苷Ⅱ)、16'号峰(黄芪皂苷Ⅰ).结论 首次建立了FHD HPLC-UV/ELSD指纹图谱分析方法,该法操作简单、准确,精密度、重复性好,可用于表征FHD中化学成分信息,为FHD质量控制提供了可靠的科学依据.
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黄芪饮片中黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪甲苷的含量测定分析
目的:探讨黄芪饮片中黄芪皂苷Ⅰ 、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪甲苷的含量测定方法和结果.方法:本次医学研究对黄芪饮片中黄芪皂苷Ⅰ 、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪甲苷的含量进行了测定 ,并对各类成分对于黄芪饮片药效峰面积的影响进行了分析.结果:黄芪饮片药物治疗效果的发挥 ,会直接受到黄芪皂苷Ⅰ 、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪甲苷等含量的影响.结论:对黄芪饮片中黄芪皂苷Ⅰ 、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪甲苷的含量进行分析 ,有助于提高药物治疗效果.
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HPLC法同时测定固本益肠胶囊中5种成分
目的 建立HPLC法同时测定固本益肠胶囊(党参、黄芪、延胡索等)中5种成分的含有量.方法 该药物甲醇提取液的分析采用Kromasil C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.1％甲酸,梯度洗脱;体积流量0.5 mL/min;检测波长218、531 nm;柱温30℃.结果 芍药内酯苷、芍药苷、黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅰ分别在16.7～200.2、20.0～240.2、5.3 ～64.1、10.0～120.1、12.7～152.2μμg/mL范围内线性关系良好(r＞0.999 0),平均加样回收率分别为96.9％、100.3％、97.1％、95.9％、95.4％,RSD分别为2.52％、2.85％、3.92％、3.54％、3.29％.结论 该方法简便准确,重复性好,可用于固本益肠胶囊的质量控制.
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HPCE同时测定黄芪饮片中3种指标成分的含量
目的 建立高效毛细管电泳法(HPCE)同时测定黄芪饮片中黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量的方法.方法 40 mmol/L硼砂-20 mmol/L硼酸-10％甲醇(pH=8.7)为电泳介质,未涂渍标准熔融石英毛细管(75 μm i.d.×64.5cm,有效长度56 cm)为分离通道,分离电压为20 kV,检测波长为206 nm,毛细管温度为25℃.压力进样为5 kPa×6 s.结果 3种指标成分的浓度与峰面积的线性关系良好(r＞0.9900);加样回收率为91.20％～104.40％.结论 该方法简单、准确,重复性较好,可用于黄芪饮片的质量评价和控制.
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市售不同产地黄芪HPLC-DAD-ELSD指纹图谱及同时测定3种成分含量的方法研究
目的 采用高效液相色谱法、二极管阵列检测器和蒸发光散射检测器联用技术(HPLC-DAD-ELSD)建立45批不同产地黄芪药材的指纹图谱,并在指纹图谱条件下,同时测定3种黄酮类及皂苷类成分的质量分数.方法 采用Phenomenex kinetex@XBC18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.02％甲酸水(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,进样量为10μL,检测波长为230 nm.蒸发光散射检测器条件:漂移管温度为60℃,载气流速为2.5 L/min.结果 建立了45批不同产地黄芪药材的HPLC-DAD-ELSD串联指纹图谱,并确立了HPLC-DAD指纹图谱的22个共有峰,指认了其中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷和毛蕊异黄酮;HPLC-ELSD指纹图谱确立了22个共有峰,指认了其中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮和黄芪皂苷Ⅰ.毛蕊异黄酮葡萄糖苷在126.350～750.812μg/mL、毛蕊异黄酮在162.500～975.000μg/mL、黄芪皂苷Ⅰ在84.230～505.350μg/mL线性关系良好,r>0.9990,平均加样回收率分别为100.5％、103.2％、98.2％.结论 建立的方法简单、准确、可靠,为评价和控制不同产地的黄芪药材质量提供了一定的科学依据.
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HPLC法同时测定参芪扶正注射液中6种成分的含量
目的：建立同时测定参芪扶正注射液中黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和党参炔苷、芒柄花素含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Ultimate XB-C18，检测器为蒸发光散射检测器，流动相为乙腈-0.5％甲酸（梯度洗脱），流速为1.2 ml/min，柱温为30℃，进样量为10μl。结果：黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、党参炔苷和芒柄花素检测进样量线性范围分别为0.62～5.67μg（r＝0.9996）、0.78～6.31μg（r＝0.9996）、0.36～3.48μg（r＝0.9997）、0.81～6.72μg（r＝0.9995）、0.82～7.03μg（r＝0.9998）、0.58～6.62μg（r＝0.9997）；定量限分别为1.21、0.15、0.12、0.03、0.12、0.17μg/ml；检测限分别为0.35、0.35、0.04、0.01、0.03、0.04μg/ml；精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜2％；加样回收率分别为95.1％～101.1％（RSD＝2.0％，n＝9）、95.2％～100.7％（RSD＝1.9％，n＝9）、95.8％～100.2％（RSD＝1.4％，n＝9）、96.2％～100.6％（RSD＝1.7％，n＝9）、96.6％～101.2％（RSD＝1.4％，n＝9）、95.9％～99.5％（RSD＝1.2％，n＝9）。结论：该方法操作简便、结果准确，可用于同时测定参芪扶正注射液中黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、党参炔苷和芒柄花素的含量。
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黄芪皂苷Ⅰ对Th1免疫反应的调节效应及机制研究
目的 研究黄芪皂苷Ⅰ的免疫调节作用以及作用的分子机理.方法 构建丝裂原诱导脾淋巴细胞增殖细胞模型,测定黄芪皂苷Ⅰ对ConA诱导T淋巴细胞增殖和LPS诱导B淋巴细胞增殖反应,构建anti-CD3 mAb抗体诱导T淋巴细胞增殖,RT-PCR检测黄芪皂苷Ⅰ对IL-2、IFN-γ和T-bet mRNA基因表达.结果 黄芪皂苷Ⅰ在30nM显著促进ConA刺激T淋巴细胞增殖,差异有显著性意义(P＜0.05);黄芪皂苷Ⅰ体外用药能够显著上调IFN-γ,T-bet的mRNA表达,而对IL-2表达水平无明显影响.结论 黄芪皂苷Ⅰ可能特异性激活转录因子T-bet的转录,促进T淋巴细胞增殖和细胞因子的产生.
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HPLC-ELSD法同时测定参芪颗粒中6个成分的含量
目的:建立HPLC-ELSD法同时测定参芪颗粒中党参炔苷、芒柄花素、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪甲苷(黄芪皂苷Ⅳ)的含量测定方法.方法:采用Agilent C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.5％(v/v)醋酸水溶液为流动相,进行梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,柱温35℃;使用蒸发光散射检测器,载气气压为2.76×105 Pa,漂移管温度为70℃.结果:在34 min内,参芪颗粒中6个成分(党参炔苷、芒柄花素、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪甲苷)完全分离,峰面积的对数与进样量的对数呈良好的线性关系(r=0.999 5～0.999 9);平均回收率分别为96.7％、99.5％、99.5％、98.7％、99.6％、97.4％.3批样品中党参炔苷、芒柄花素、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪甲苷含量分别在0.10～0.13、0.008 6～0.012 l、0.014～0.018、0.056～0.060、0.002 3～0.004 1、0.055～0.066 mg·g-1.结论:该方法经方法学验证可用于参芪颗粒的质量控制.
