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HPLC梯度洗脱法同时测定固肾生发丸中6种成分的含量
目的:采用高效液相梯度洗脱法建立固肾生发丸中二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚、芝麻素、女贞苷和特女贞苷6种成分的含量测定方法.方法:Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流速:0.9 mL· min-1;流动相A为甲醇-乙腈(2:1),流动相B为0.1％磷酸溶液;检测波长λ1=254 nm(检测二苯乙烯苷),λ2=320 nm(检测大黄素和大黄素甲醚),λ3=290 nm(检测芝麻素),λ4=224 nm(检测女贞苷和特女贞苷).结果:二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚、芝麻素、女贞苷和特女贞苷分别在0.171 8-3.436 0μg(r=0.999 9)、0.013 0-0.260 0μg (r=0.999 3)、0.015 6-0.312 0μg (r=0.999 4)、0.047 4-0.948 0μg(r=0.999 7)、0.018 2-0.364 0μg(r=0.999 7)、0.109 6-2.192 0μg(r=0.999 8)范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为98.28％、96.90％、98.06％、98.40％、97.75％、99.06％,RSD(n=6)分别为0.71％、1.02％、1.30％、0.98％、1.19％、0.81％. 结论:该方法简便、准确、灵敏、重复性好,可作为固肾生发丸的含量控制方法.
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UPLC同时测定补肾强身片中6种化学成分的含量
目的:采用超高效液相色谱法(UPLC)同时测定补肾强身片中原儿茶酸、绿原酸、金丝桃苷、特女贞苷、朝藿定C和淫羊藿苷的含量.方法:以Agilent SB-C18色谱柱(4.6 mm×100 mm,2.7 μm),乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.5 mL· min-1,柱温40℃,检测波长260,325,360,224,270 nm.结果:6个成分的检测范围分别为原儿茶酸0.78～201.00 mg·L-1(r =0.999 9),绿原酸0.79～202.60 mg·L-1(r =0.9997),金丝桃苷0.93～238.39 mg·L-1(r =0.9999),特女贞苷0.66 ～169.62 mg·L-1(r =0.999 9),朝藿定C 0.81 ～206.85 mg·L-1(r =0.999 9),淫羊藿苷0.74 ～ 190.85 mg·L-1(r=0.9999).平均回收率分别为97.6％ (RSD 1.0％),99.6％ (RSD 1.5％),99.7％ (RSD 1.5％),97.2％ (RSD 0.8％),95.5％ (RSD 0.4％),96.3％ (RSD 0.9％).结论:该方法简便可靠,可用于补肾强身片的质量控制.
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市售二至丸水蜜丸和配方颗粒的体外溶出度比较
目的:考察二至丸水蜜丸和配方颗粒中5种药效活性成分的溶出情况,比较这些成分在2种剂型中的体外溶出特点.方法:参照《中国药典》2010年版二部附录XC溶出度测定法,采用第二法桨法,转速75 r·min-1,测试不同溶出介质(水,30％乙醇,0.1 mol·L-1盐酸和pH 4.5,6.8的磷酸盐缓冲液).利用UPLC测定2种剂型中红景天苷、特女贞苷、女贞苷、木犀草素和齐墩果酸5种药效成分的体外溶出度,比较2种制剂的溶出行为.结果:在各个溶出介质中,二至丸2种不同制剂中各活性成分的溶出行为差别很大,配方颗粒中红景天苷、特女贞苷、女贞苷在各个介质里都能快速溶出且溶出量高(＞85％);而水蜜丸中木犀草素和齐墩果酸只能在pH6.8磷酸盐缓冲液中溶出很少的量(＜30％).从差异因子和相似因子分析,2种制剂中相同成分的溶出曲线无相似性.结论:和水蜜丸相比,配方颗粒中活性成分的累积溶出量更高,且在同一种溶出介质中,能溶出更多的药效成分.说明在体外溶出方面,配方颗粒这种新型的中药形式具有更大的优势.建立的溶出度方法可以应用于二至丸制剂的质量控制.
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LC-TOF/MS快速鉴定女贞子4种环烯醚萜苷类化合物模拟清蒸品的化学成分
目的:通过LC-TOF/MS快速鉴定女贞子4种环烯醚萜苷类化合物(特女贞苷、新女贞苷、橄榄苦苷、女贞苷)模拟清蒸品的化学成分,探讨女贞子蒸制过程中环烯醚萜苷类成分的转化机制.方法:色谱条件为流动相乙腈(A)-0.1％甲酸溶液(B)梯度洗脱(0～5 min,7％～ 12％A;5 ～20 min,12％ ～ 25％ A;20 ～30 min,25％ ～40％ A;30 ～35 min,40％～100％ A),流速0.2 mL·min-1,柱温25℃,进样量3μL,检测波长240 nm;质谱使用Agilent 6230型LC-TOF/MS联用系统,在ESI/MS正离子模式下采集数据.通过对照品定位、质谱数据及文献参照分析4种环烯醚萜苷类化合物模拟清蒸品的化学成分.结果:4种环烯醚萜苷类化合物模拟清蒸品中均检出了橄榄酸;特女贞苷模拟清蒸品中还检出红景天苷和2种特女贞苷异构体;新女贞苷模拟清蒸品中鉴定出了3,4-二羟基苯乙基-β-D-葡萄糖苷;橄榄苦苷和女贞苷模拟清蒸品中分别检出其各自的苷元羟基酪醇和酪醇.结论:女贞子中环烯醚萜苷类成分性质不稳定,加水、加热可使其水解生成次级苷或者苷元,特女贞苷在模拟炮制过程中可转化为其异构体.女贞子酒蒸后补肝肾药效增强与其环烯醚萜苷类成分水解密切相关.
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酒制对女贞子饮片主要化学成分含量的影响
目的:分析酒制对女贞子饮片中主要化学成分含量的影响,为完善女贞子及酒女贞子饮片的质量标准提供实验依据.方法:采用HPLC,流动相乙腈-水梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,检测波长224 nm,柱温35℃,对女贞子及酒女贞子饮片中主要化学成分进行定量分析.结果:与相同企业或同一企业同一批次女贞子饮片比较,酒女贞子饮片中特女贞苷和橄榄苦苷的含量均明显降低,红景天苷、酪醇和羟基酪醇的含量有不同程度的升高;其中红景天苷、酪醇及羟基酪醇的质量分数分别升高了200％,5％,40％以上.结论:酒制后女贞子饮片化学成分含量的变化主要是由于特女贞苷在高温及水蒸气的作用下会水解生成红景天苷,红景天苷进一步水解生成酪醇;橄榄苦苷在高温下不稳定,同样发生水解,生成羟基酪醇;从而导致特女贞苷和橄榄苦苷的含量显著降低,红景天苷、酪醇和羟基酪醇的含量增高.
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基于5种特征性成分综合评价二至丸的质量
目的:建立二至丸中5种特征性成分特女贞苷、红景天苷、酪醇、木犀草素、蟛蜞菊内酯同时检测的含量测定方法, 并据此评价所收集的11批二至丸样品的质量.方法:采用Phenomenex Gemini C18色谱柱 (4.6 mm×250 mm, 5μm), 流动相乙腈 (A) -0.2％甲酸水溶液 (B) 梯度洗脱 (015 min, 10％30％A;1525 min, 30％33％A;2530 min, 33％A) .流速1 mL·min-1, 检测波长225 nm和349 nm, 柱温30℃.结果:5个成分的分离度良好, 红景天苷、酪醇、特女贞苷、木犀草素和蟛蜞菊内酯的线性范围依次为202.5512 153, 84.555 073, 244.3014 657.72, 2.56153.72, 2.32139.2 ng.加样回收率平均值处于95.61％103.47％, RSD均＜2.0％.结论:建立的含量测定方法简便、准确, 重复性好, 可用于市售二至丸样品的含量测定和质量控制.11批样品中5个特征性成分含量差异较大, 特女贞苷含量差异＞60倍, 低值0.15 mg·g-1, 高值10.22 mg·g-1, 其原因可能与原料质量和执行标准等因素有一定关系.
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HPLC测定生新发胶囊中特女贞苷的含量
目的：建立测定生新发胶囊中特女贞苷含量的方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为 Agilent TC-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水(35∶65),流速为1.0 mL/min,检测波长为224 nm。结果特女贞苷线性范围为0.15～0.90μg,平均加样回收率为100.35%,RSD＝1.43%。结论本方法准确、可靠、重复性好,能测定生新发胶囊中特女贞苷的含量,可作为生新发胶囊质量控制的含量检测方法。
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不同炮制方法对女贞子化学成分的影响
目的：考察不同炮制方法对女贞子主要化学成分特女贞苷和齐墩果酸含量的影响。方法用同一批次女贞子进行炮制加工，采用反相高效液相色谱法，对女贞子生品、酒制女贞子、醋制女贞子和盐制女贞子中的特女贞苷和齐墩果酸进行含量测定。结果女贞子生品及3种不同炮制品中特女贞苷含量依次为盐制女贞子(1.9975%)＞女贞子生品(1.6007%)＞酒制女贞子(1.1446%)＞醋制女贞子(0.8946%)。女贞子生品及3种不同炮制品中齐墩果酸含量依次为酒制女贞子(1.1202%)＞盐制女贞子(0.9246%)＞醋制女贞子(0.9132%)＞女贞子生品(0.8998%)。结论女贞子不同炮制方法对其特女贞苷和齐墩果酸的含量有一定影响。
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高效液相色谱法同时测定二至丸中4种成分的含量
目的:建立同时测定二至丸中女贞苷、特女贞苷、蟛蜞菊内酯、齐墩果酸含量的高效液相色谱法.方法:采用DIKMA C18色谱柱(4.6 mm× 200 mm,5μm),流动相乙腈-磷酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,进样体积20 μL,柱温30℃,检测波长215 nm.结果:女贞苷、特女贞苷、蟛蜞菊内酯、齐墩果酸的质量浓度与峰面积分别在2.008～80.32(r=0.999 6),5.872 ～234.88(r =0.999 7),0.9 ～36(r=0.9999),13.24～529.6 mg·L-1(r =0.999 6)呈良好线性；平均回收率分别为99.25％,98.70％,96.23％,101.5％,RSD均小于3％.结论:该方法简便、快速、准确,可作为二至丸质量控制的一个有效方法.
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基于UPLC技术的女贞子中主要成分炮制变化规律研究及酒女贞子特色质量标准的探讨
采用UPLC技术建立了女贞子中红ε 苷和特女贞苷的同步测定方法,通过测定二者在不同炮制时间的酒女贞子(炮制12,15,18,21,24 h)中的含量探讨女贞子炮制中主要成分的变化规律,并且采用同一方法探讨建立了酒女贞子的特色质量标准.采用Waters Acquity UPLC@BEH C18色谱柱(2.1 mm×50mm,1.7μm)进行分离,乙腈-0.2％甲酸水为流动相,梯度洗脱,检测波长280 nm,流速0.5 mL* min-,柱温40℃.在上述色谱条件下2成分分离良好,红ε 苷和特女贞苷分别在10.19～ 326,49.53～1 585 ng线性关系良好,平均加样回收率分别为103.4％,101.7％,RSD分别为0.81％,0.79％.不同炮制时间的酒女贞子中红ε 苷的含量随炮制时间延长逐渐升高,而特女贞苷含量则随炮制时间延长逐渐降低.27批次女贞子药材中红ε 苷的质量分数在0.042 5％ ～0.192 4％,特女贞苷在0.829 7％ ～5.218％;25批酒女贞子中前者在0.229 2％ ～1.045 8％,后者在0.743 8％ ～3.645 4％.与女贞子药材相比,酒女贞子中特女贞苷含量和红ε 苷含量的比值明显减小.依据实验结果,该文暂定女贞子药材中特女贞苷不低于0.80％,特女贞苷含量/红ε 苷含量不小于15;而酒女贞子中红ε 苷不低于0.20％,特女贞苷不低于0.70％,二者比值不大于8.该文所建立方法的简便可靠,可用于女贞子样品中红ε 苷和特女贞苷的测定,所建立的标准可区分女贞子和酒女贞子.
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特女贞苷与红景天苷的大鼠在体胃肠吸收比较
特女贞苷与红景天苷是女贞子炮制前后含量变化较大的2种活性成分.为探讨女贞子炮制增效机制,该实验采用大鼠在体胃肠灌流模型,用HPLC测定给药后不同时间点大鼠胃与小肠灌流流出液中特女贞苷与红景天苷含量并计算吸收速率常数和吸收百分率,结果在特女贞苷的胃肠灌流流出液中均可检出其次级苷红景天苷.特女贞苷与红景天苷在小肠中的吸收速率常数分别为0.055 3,0.1442 h-1,4h累计吸收率分别为24.46％,60.14％,在胃中吸收速率常数分别为5.70,8.26 h-1,4h累计吸收率分别为34.21％,47.23％.实验证明特女贞苷在大鼠胃与小肠内均可被代谢为红景天苷,红景天苷较特女贞苷更利于胃肠吸收.结果提示女贞子炮制后补肝肾药效增强与特女贞苷转化为红景天苷后更利于机体吸收有关.
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特女贞苷对血管内皮细胞氧化损伤的作用研究
目的 研究特女贞苷对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)中p66Shc及凋亡相关蛋白表达水平的作用.方法 采用H2 O2诱导EA.hy926形成氧化应激损伤的血管内皮细胞模型,随机分为空白组、模型组(H2O2)、特女贞苷组(H2O2 +5、50、500 μmol/L特女贞苷)、阴性对照组(H2O2 +5、50、500 μmol/L DMSO)、抗坏血酸组(H2O2 +5、50、500 μmol/L抗坏血酸).检测各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、β3-gal活性;采用Western blot法测定p66Shc、caspaseG活体剪切体、Bax、Bcl-2蛋白含量;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测p66 mRNA含量.结果 与空白组比较,模型组及阴性对照组SOD活性、Bcl-2表达量及Bcl-2/Bax比值下降,MDA含量、β3-gal活性、p66Shc蛋白水平及m RNA含量、capase-3活性剪切体和Bax表达水平升高(均P＜0.05).与模型组比较,特女贞苷组及抗坏血酸组SOD升高,MDA含量(除特女贞苷组浓度500 μm ol/L外)和β-gal活性降低(P＜0.01),抑制p66Shc表达及mRNA水平(P＜0.01);特女贞苷组Bax和capase-3活性剪切体(除浓度500 μmol/L外)表达水平降低,Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值升高(均P＜0.01).与同浓度的抗坏血酸组比较,特女贞苷组对B ax、Bcl-2蛋白水平、Bcl-2/Bax比率、p66 mRNA的调节作用较明显(P＜0.05).结论 特女贞苷可能通过抑制p66Shc削弱血管内皮细胞的氧化损伤及降低凋亡相关蛋白的表达.
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超微粉碎技术对二至丸溶出度的影响
目的 以特女贞苷为溶出指标,对不同粉碎技术制得的二至丸进行溶出度测定,探讨超微粉碎技术对二至丸溶出度的影响. 方法 用普通粉碎机、超微粉碎机粉碎分别制得药材细粉再制备水蜜丸,采用转篮法和HPLC测定特女贞苷的体外溶出情况,并运用威布尔(Weibull)定律对溶出度进行数据分析.结果 二至丸丸A与丸B相比较,两者的特女贞苷溶出参数T50、T60、T70、T80、T90、F1h、F2h均具有显著性差异(P<0.05). 结论 采用超微粉碎技术可以提高二至丸的体外溶出度.
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特女贞苷含量对贞芪扶正颗粒质量评价的意义
目的：通过检测不同厂家不同批次贞芪扶正颗粒中特女贞苷的含量，以确定该成分在贞芪扶正颗粒质量评价中的可行性。方法：测定所收集到的123批次贞芪扶正颗粒样品中特女贞苷成分的含量，并对所得结果进行统计分析。结果：送检的123批次样品中，经测定，特女贞苷的含量为0～71.2 mg／袋。由此可见，不同厂家、批次的特女贞苷含量差异较大。结论：有必要增加特女贞苷含量测定，从而更加有效全面控制贞芪扶正颗粒的质量。
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胶束毛细管电泳测定女贞子饮片中6种指标成分的含量
目的 建立胶束电动毛细管色谱二极管阵列检测法(MEKC-DAD)同时测定女贞子饮片中红景天苷、酪醇、女贞苷、特女贞苷、齐墩果酸和熊果酸含量的方法.方法 60 mmol·L-1硼砂-10 mmol·L-1十二烷基硫酸钠(SDS)-30 mmol·L-羟丙基-β-环糊精-10％的甲醇(pH 9.03)为电泳介质,未涂渍标准熔融石英毛细管(75 μm×64.5 cm,有效长度56 cm)为分离通道,分离电压为20 kV,检测波长为210 nm,毛细管温度为25℃,压力进样为5 kPa×6 s.结果 6种指标成分的浓度与峰面积的线性关系良好(r＞0.95);加样回收率为94.57％～ 102.07％(RSD ＜5％);用此法测定了女贞子饮片中6种指标成分的含量,结果满意.结论 该方法准确、可靠,重复性较好,可用于女贞子饮片内在质量的评价和控制.
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基于酚类成分特征图谱的女贞子质量表征研究
目的：建立基于酚类成分特征图谱的女贞子质量表征及关联分析方法，以精确全面地评价女贞子饮片质量。方法采用所建立的反相高效液相色谱（HPLC-PDA）法表征女贞子药材的特征图谱质量，基于特征图谱中特征峰的数量及所属化学类型对14批女贞子饮片进行质的表征。基于特征图谱中特征指标性成分红景天苷、酪醇、特女贞苷、槲皮素的含量及环烯醚萜类（以特女贞苷表征）、黄酮类（以槲皮素表征）的含量对14批女贞子饮片进行量的表征，并基于基准饮片将14批女贞子饮片质与量的表征结果分别进行关联性分析。结果以批号S10为基准，女贞子饮片特征图谱中含有酚类特征共有峰11个，其中苯乙醇苷类成分特征峰2个、环烯醚萜类成分特征峰5个、黄酮类成分特征峰4个，14批饮片色谱图中均含有此11个特征峰。样品S14、S12、S5、S8、S9、S6、S11中特征指标性成分含量总体较高，样品S14、S12、S5、S8、S9与基准样品S10关联性高，综合评价得出样品S5、S8、S9、S12、S14质量优良度居前。结论基于特征图谱的质与量及其关联性的系统表征所建立的基于药物体系的女贞子特征图谱质量表征关联分析评价模式，关注了女贞子质量整体关联性与应用有效性，能够有效精准评价其质量。
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麦贞花颗粒有效成分的含量测定
目的 建立麦贞花颗粒中麦冬皂苷D和特女贞苷的含量测定方法.方法 采用HPLC法测定制剂中麦冬皂苷D和特女贞苷含量.结果 麦冬皂苷D在进样量1.234 ～12.336 μg内呈良好的线性关系,r = 0.999 6,平均回收率为96.92%,RSD为2.98%;特女贞苷在质量浓度40.64～325.12 μg/mL范围内呈良好的线性关系,r = 0.999 5,平均回收率为98.58%,RSD为2.74%.结论 所建立的含量测定方法 可靠,操作简便,重现性良好,可用于该制剂的质量控制.
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二至丸处方提取物化学成分的研究
目的 对二至丸处方提取物的醋酸乙酯萃取部位和水饱和正丁醇萃取部位进行化学成分研究.方法 采用柱色谱法进行分离和纯化,经过波谱分析进行结构鉴定.结果 从二至丸处方提取物的醋酸乙酯和水饱和正丁醉部位共分离得到11个单体化合物,分别鉴定为齐墩果酸(1)、熊果酸(2)、木犀草素(3)、芹菜素(4),槲皮素(5)、特女贞苷(6)、蟛蜞菊内酯(7)、去甲蟛蜞菊内酯(8)、甘露醇(9)、女贞苷G13(10)和木犀榄苷二甲酯(oleoside dimethyl ester,11).结论 化合物1～11均为首次从该复方中得到.
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桂花种子环烯醚萜苷的提取工艺与抗血栓活性研究
目的 优选桂花4大品种种子中2种主要环烯醚萜苷类成分(特女贞苷和女贞苷G13)的提取工艺并对桂花种子进行抗血栓活性评价.方法 采用L9(34)正交设计,从乙醇体积分数、料液比和提取时间3个方面考察超声、回流、微波不同提取方法对桂花种子中2种成分的提取效果.以提取率、成分质量及总峰面积为指标进行综合加权分析,确定佳的提取方法和提取工艺.建立斑马鱼抗血栓模型评价桂花种子的抗血栓活性.结果 3种提取方法中,微波提取效果好,佳提取工艺为乙醇体积分数55％、料液比1∶10、提取时间15 min.HPLC分析表明桂花4大品种种子的化学成分组成基本一致.斑马鱼抗血栓活性结果显示,桂花种子提取物的血栓抑制作用不明显,在高浓度剂量下易导致心包水肿.结论 考察了桂花4大品种种子中2种环烯醚萜苷的提取工艺,同时初步研究了银桂品种种子水提物的抗血栓活性,为桂花子这种废弃资源的二次开发和利用提供了参考.
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基于UPLC-Q/TOF-MS的中药水蜜丸制剂二至丸多成分稳定性研究
目的 在遵循人用药品注册技术要求国际协调会(International Conference on Harmonization of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use,ICH)制剂稳定性指导原则的指导下,在采用超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-Q/TOF-MS)联用技术对中药传统水蜜丸制剂二至丸进行多成分定性定量研究的基础上,进行二至丸长期稳定性和加速稳定性研究,并考察了制剂影响因素对制剂稳定性的影响.方法 采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1mm,1.7 μm),流动相为0.1％甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱,体积流量0.2 mL/min,采用电喷雾电离源(ESI),正、负离子模式扫描.在遵循ICH制剂稳定性指导原则的指导下,进行了18个月的长期稳定性试验[温度(25±2)℃,相对湿度(RH)(60±5)％],加速稳定性试验[温度(40±2)℃,RH (75±5)％]和制剂影响因素试验(包装材料类型和密封条件).结果 采用以上方法共鉴定出二至丸中20个化学成分(红景天苷、蟛蜞菊内酯、10-羟基木犀榄苷二甲酯、木犀榄苷-11甲酯、马钱苷酸、松果菊苷、女贞苦苷、橄榄苦苷酸、毛蕊花苷/异毛蕊花苷、女贞苷、特女贞苷、ligustroflavone、特女贞苷异构体、阿富汗丁香苷F、异女贞苷、女贞酸、橄榄苦苷、女贞苷-G13、青藤碱、3-O-顺式-对-香豆酰委陵菜酸),并对其进行定量及归一化半定量研究.在长期稳定性研究中,20个成分均保持稳定;然而在加速稳定性试验条件下,11种成分(10-羟基木犀榄苷二甲酯、松果菊苷、女贞苦苷、橄榄苦苷酸、毛蕊花苷、女贞苷、特女贞苷、ligustroflavone、女贞酸、女贞苷-G13、青藤碱)的量明显下降.制剂影响因素试验结果显示采用钠钙玻璃包装材料替代现有市售聚酯包装,在密封或敞口条件下,制剂中各成分稳定性均显著提高.在采用相同包材时密封条件对制剂稳定性也存在显著性影响.结论 通过较为系统的中药传统口服制剂类型水蜜丸的制剂稳定性研究,为中药制剂质量控制水平和临床用药安全提供技术支持.
