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大鼠慢性缺氧性肺动脉高压中肺小动脉血红素氧合酶-1与内皮型一氧化氮合酶的变化
目的:观察慢性缺氧对大鼠肺小动脉血红素氧合酶(HO)-1和内皮型一氧化氮合酶表达的影响.方法:观察正常(10只,正常组)和常压问断缺氧6周大鼠(10只,模型组)的血液循环内皮细胞数、肺小动脉光镜和电镜下的改变,免疫组化法测定肺组织HO-1和内皮型一氧化氮合酶表达的变化.结果:模型组血液循环内皮细胞数较正常组显著增加,血液循环内皮细胞数与右心室收缩压及肺小动脉中膜厚度呈正相关.HO-1在肺小动脉内皮细胞表达显著增多,内皮型一氧化氮合酶表达明显减少.均有显著性差异(P＜0.05～0.01).结论:血液循环内皮细胞数可作为间接反映缺氧性肺动脉高压血管结构重塑的参考指标.缺氧导致肺小动脉HO-1增加和内皮型一氧化氮合酶减少,对肺动脉高压的发生发展可能有一定影响.
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罗格列酮对胰岛素抵抗大鼠主动脉内皮功能的影响及其机制的研究
目的:观察罗格列酮对胰岛素抵抗大鼠主动脉内皮依赖性血管舒张和一氧化氮(NO)含量、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、磷脂酰肌醇-3激酶及蛋白激酶B表达的影响.方法:4～6周龄雄性SD大鼠予高糖高脂喂养8周,建立胰岛素抵抗模型,分为对照组和治疗组,每组各15只,治疗组用罗格列酮[3 mg/(kg·d)]干预8周,另取15只正常大鼠为正常组.实验终止时用葡萄糖输注率评价胰岛素抵抗,观察大鼠离体主动脉对乙酰胆碱依赖性血管舒张反应,Griess重氮化反应法检测主动脉NO含量,逆转录聚合酶链反应方法检测磷脂酰肌醇-3激酶、蛋白激酶B和eNOS mRNA表达,电镜观察主动脉超微结构.结果:对照组葡萄糖输注率、主动脉内皮依赖性舒张功能、NO浓度、磷脂酰肌醇-3激酶、蛋白激酶B、eNOS mRNA表达较正常组均显著降低(P＜0.01),治疗组上述指标均显著升高(P＜0.01).透射电镜检查可见对照组主动脉内皮细胞和内皮下结构的病理改变,治疗组胸主动脉超微结构接近正常.结论:胰岛素抵抗大鼠存在内皮依赖性舒张功能紊乱和主动脉NO浓度、磷脂酰肌醇-3激酶、蛋白激酶B、eNOSmRNA表达下降,用罗格列酮治疗可改善其内皮功能,增强NO产生和磷脂酰肌醇-3激酶、蛋白激酶B、eNOS mRNA表达.
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内皮型一氧化氮合酶基因894 G→T多态性与原发性高血压的关系研究
目的:探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因894G→T多态性与原发性高血压(EH)之间的关系.方法:应用多聚酶链反应限制性片段长度多态性技术对湖北地区汉族103例EH患者(EH组)及74名健康者(正常对照组)的eNOS外显子894位进行基因分型,并采用生化技术测定其血脂水平.结果:①EH组T等位基因频率为0.262及GT、TT基因型频率分别为0.427,0.049显著高于正常对照组的0.128和0.257,有极显著性差异(P＜0.01);②在EH组中GT+TT基因型者的舒张压显著高于GG基因型者有显著性差异(P＜0.05);③收缩压、舒张压、eNOS基因894G→T基因点突变属原发性高血压的独立危险因素.结论:eNOS基因894G→T多态性与中国人原发性高血压的发生相关.
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心血管疾病中氧化应激与一氧化氮合酶脱耦联
血管内皮细胞功能障碍是导致许多心血管疾病的共同病理生理基础,其突出表现为内皮依赖性血管舒张功能障碍,主要由一氧化氮( NO)减少及氧自由基增加所致.内皮型NO合酶(eNOS)脱耦联是导致NO水平下降和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平升高的重要机制,其中ROS水平升高又是造成eNOS脱耦联的主要原因.减少氧化应激、逆转eNOS脱耦联,进而改善血管内皮细胞功能,有可能成为防治心血管疾病的新策略.
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内皮型一氧化氮合酶基因多态性与冠心病的关系
内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因被列为冠心病(CHD)的一个候选易感基因.本文对与冠心病关系较为密切的三种eNOS基因多态性:4b/a、T786C和G894T的研究进展作一综述,对进一步认识冠心病的发病机制具有重要意义.
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PI3K/AKt/eNOS信号通路在硫化氢抑制ET-1诱导的心肌肥大中的作用
目的：观察磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）-蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶（AKt）-内皮型一氧化氮合酶（eNOS）信号转导通路在硫化氢（H2S）抑制内皮素-1（endothelin-1，ET-1）诱导心肌肥大过程中的作用。方法体外培养原代心肌细胞，将其随机分为6组，每组4孔，①对照组：加入等体积无血清的DMEM培养基；②肥大（ET-1）组：加入终浓度为10-8 mol/L的ET-1；剩余4组为实验组，各组分别加入不同终浓度的H2S供体-NaHS：③10-15 M NaHS组：加入10-15 mol/L NaHS+10-8 mol/l ET-1；④10-14 M NaHS组：加入10-14 mol/L NaHS+10-8 mol/L ET-1；⑤10-13 M NaHS组：加入10-13 mol/L NaHS+10-8 mol/L ET-1；⑥10-12 M NaHS组：加入10-12 mol/L NaHS+10-8 mol/L ET-1。上述各组药物分别刺激24 h后测定心肌细胞表面积、细胞总蛋白含量、培养液NO含量，RT-PCR检测心肌细胞心房利钠肽（atrial natriuretic peptide，ANP）、脑钠肽（B-type natriuretic peptide，BNP）、磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K）、蛋白激酶B（protein kinase B，PKB/AKt）、eNOS mRNA水平，Western Blot技术检测总AKt和磷酸化AKt蛋白表达含量。结果肥大（ET-1）组的心肌细胞表面积（1933.80±143.06）和细胞总蛋白含量（367.51±25.9）均高于对照组（787.27±107.66，218.55±21.28，P＜0.05），ANP及BNP mRNA的表达量也明显增加（P＜0.05），但PI3K、AKt、eNOS mRNA表达水平，磷酸化AKt程度和NO的释放量（4.60±0.73）低于对照组（8.63±0.30，P＜0.05），各实验组给予不同浓度NaHS刺激后能够浓度依赖性的抑制这种肥大效应（P＜0.05），同时上调了PI3K/AKt/eNOS通路各信号分子的表达量（P＜0.05）。结论H2S对ET-1诱导的心肌肥大有一定的抑制作用，这种作用可能与激活PI3K-AKt-eNOS信号通路有关。
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中国汉族人群eNOS基因G894T多态性与原发性高血压关系的Meta分析
目的 系统评价中国汉族人群内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因G894T多态性与原发性高血压的关系.方法 制定文献纳入标准和排除标准,全面检索中国期刊全文数据库、中文科技期刊数据库、中国生物医学文献数据库、PubMed、Cochrane图书馆等关于eNOS基因G894T多态性与原发性高血压关系的原始文献,采用Rev Man 4.2软件对入选文献进行Meta分析.结果 共纳入13项研究,累计原发性高血压患者2593例,健康对照2620例.纳入文献具有高异质性,采用随机效应模型进行合并分析,合并效应量(GT+TT)/GG基因型频率OR值为1.39,95%CI:1.11～1.73(P＜0.05).经敏感性分析和发表偏倚评估,Meta分析结果 较稳定,无明显发表偏倚.结论 eNOS基因G894T多态性与中国汉族人群原发性高血压易感性相关.
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内皮型一氧化氮合酶基因G894T多态性与心肌梗死相关性的Meta分析
目的 采用Meta分析的方法评估内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因G894T多态性与心肌梗死(MI)相关性.方法 按照文献纳入标准制定检索策略后,采用计算机检索PubMed、中国期刊全文数据库和万方数据库中1995年至2012年12月30日间发表的探讨eNOS基因G894T多态性与MI相关性的病例-对照研究,由两名作者独立提取数据及评价方法学质量后,采用RevMan 5.1软件进行Meta分析.结果 终纳入13个病例-对照研究,共计2264例MI患者,2774例健康对照人群.基于随机效应模型的Meta分析结果显示,eNOS G894T多态性能够显著增加MI的患病风险[T vs.G:OR=1.51,95%CI:1.21～1.89;TT vs.GG:OR=1.99,95%CI:1.21～3.26;GT vs.GG:OR=1.34,95%CI:1.07～1.68;(GT+TT) vs.GG:OR=1.47,95%CI:1.14～1.88;TT vs.(GG+GT):OR=1.80,95%CI:1.13～2.86].亚组分析结果表明这一相关性存在于亚洲人群与急性心肌梗死(AMI)之间,而与非亚洲人群无相关性,与混合MI(AMI和陈旧性MI)间可能存在相关性,漏斗图提示有发表偏倚存在.结论 基于当前的证据,eNOS G894T多态性与MI存在相关性,特别是亚洲人群与AMI.但当前证据尚不能确定eNOS G894T多态性是否是MI的独立危险因素,以及eNOS G894T多态性与陈旧性MI、与非亚洲人群AMI的相关性.
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eNOS基因T786-C和4b/a多态性与中国人群冠心病风险相关性的Meta分析
目的 评价内皮型一氧化氮合酶基因T786-C和4b/a多态性与中国人群冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)的相关性.方法 计算机检索PubMed、Embase、CNKI、万方、VIP,搜集内皮型一氧化氮合酶基因多态性与中国人群冠心病相关性的病例-对照研究,检索时间均为建库至2017年10月10日.由两名作者独立提取数据及评价方法学质量后,采用RevMan 5.3软件进行Meta分析.结果 终纳入18个病例-对照研究,共4585例患者,4555例健康对照人群.Meta分析结果显示,内皮型一氧化氮合酶T786-C多态性能够显著增加中国人群冠心病的患病风险(C vs. T:OR=1.67,95%CI:1.45~1.92;CC vs. TT:OR=2.35,95%CI:1.43~3.85;TC vs. TT:OR=1.68,95%CI:1.44~1.97;CC+TC vs. TT:OR=1.73,95%CI:1.49~2.02;CC vs. TC+TT:OR=2.02,95%CI:1.23~3.30);内皮型一氧化氮合酶4b/a多态性能够显著增加中国人群冠心病的患病风险(a vs. b:OR=1.54,95%CI:1.34~1.77;aa vs. bb:OR=3.55,95%CI:2.15~5.86;ab vs. bb:OR=1.32,95%CI:1.12~1.55;aa+ab vs. bb:OR=1.48,95%CI:1.27~1.72;aa vs. ab+bb:OR=3.32,95%CI:2.01~5.49).结论 基于当前证据,内皮型一氧化氮合酶基因T786-C和4b/a 多态性均与中国人群冠心病发病风险增加具有相关性.
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内皮型一氧化氮合酶基因G894T多态性与老年钙化性心瓣膜病的关系
目的 探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因G894T多态性与老年钙化性心瓣膜病(SCVD)的关系.方法 采用基因芯片技术测定老年钙化性心瓣膜病的患者(132例)和无瓣膜钙化的对照患者(108例)的eNOS G894T多态性,并对两组检测结果进行基因频率比较,应用二分类logistic回归分析该基因多态性对瓣膜钙化的影响.结果 SCVD组GT+TT基因型、T等位基因频率均明显高于对照组,差异具有统计学意义(基因型c2=8.486,P=0.004；等位基因c2=9.425,P=0.002)；二分类多自变量logistic回归分析显示,eNOS G894T多态性、总胆固醇水平、低密度脂蛋白水平、空腹血糖水平、体质量指数、收缩压水平以及高血压病史、冠心病病史、高血脂病史均与SCVD独立相关,差异有统计学意义(P＜0.05),为SCVD的危险因素.结论 eNOS G894T可能是SCVD的遗传易感基因.
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内皮细胞固有型一氧化氮合酶 4 b/a多态性与终末期慢性肾衰竭的关联性研究
目的对天津地区汉族人内皮细胞固有型一氧化氮合酶基因内含子4的插入/缺失多态性(ecNOS 4 b/a)与终末期慢性肾衰竭 (ESCRF)的关联性进行研究.方法应用PCR-小卫星DNA多态性分析技术,对67例ESCRF患者(观察组)和70例健康人(对照组)的ecNOS 4 b/a基因型分布进行检测.结果 (1) 观察组和对照组的三种基因型bb、ba和aa频率分别为79.1%、19.4%、1.5%、91.4%、8.6% 和0% .(2)两组等位基因分布差异有显著性(χ2=4.617,P＜0.05).观察组比对照组a/(a+b)OR值(95%可信区间)为2.64(1.09, 6.43)(Z=2.14,P＜0.05).(3)有a基因的ESCRF患者平均年龄(47.43±11.63)岁,无a基因的ESCRF患者平均年龄(58.08±13.68)岁,二者比较差异有显著性(t=2.664,P＜0.01).(4) 天津汉族正常人群a基因频率(4.3%)低于日本人(10.1%)(χ2=4.898,P=0.027).结论天津地区汉族健康人群a等位基因频率低于日本人和澳洲白种人;ecNOS 4 b/a多态性与天津地区汉族人ESCRF有关联性,a基因与ESCRF危险性增加呈正相关.
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依普拉芬对去卵巢大鼠骨质疏松骨保护效果及NO调控机制研究
目的 研究人工合成的植物雌激素-依普拉芬对去卵巢大鼠骨密度及生物力学的影响;同时与雌激素对照,探讨其骨保护效果及NO调控作用机制.方法 60只6月龄SD雌性大鼠,随机分成6组:假手术组和手术切除大鼠双侧卵巢组,后者分为阴性对照组、依普拉芬低、中、高剂量组和雌激素对照组, 分别给予基础饲料和不同剂量受试物,12周后进行骨密度、血清NO及NOS浓度测定;免疫组化方法检测股骨NOS表达.结果 与假手术组相比,去卵巢大鼠阴性对照组股骨密度、生物力学指标和血清NO、eNOS浓度以及股骨eNOS表达明显降低,血清iNOS浓度以及股骨iNOS表达增加,依普拉芬组骨密度、生物力学指标血清NO、eNOS浓度以及股骨eNOS表达均高于阴性对照组,与假手术组差异无显著意义.同时低于雌激素组.血清iNOS浓度以及股骨iNOS表达均低于阴性对照组,与假手术组以及雌激素组差异无显著意义.结论 一定浓度的依普拉芬可以通过提高去卵巢大鼠eNOS的表达来提高NO的浓度,促进成骨,增加骨密度,达到防治骨质疏松症的作用.
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Intermedin 对血管紧张素Ⅱ诱导的 NRK-52E细胞纤维化的影响及机制研究
目的：观察 Intermedin（IMD）对血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）诱导的大鼠肾小管上皮细胞系NRK-52E 纤维化的影响，并探讨其机制。方法体外培养的 NRK-52E 细胞，随机分为4组：正常对照组、Ang Ⅱ组（10－6 mol／L）、转染 IMD 质粒＋Ang Ⅱ组、转染空质粒＋Ang Ⅱ组。采用 Fugene HD 转染试剂，将 pIRES2-EGFP 空质粒和 pIRES2-IMD 真核表达质粒分别转染至 NRK-52E 细胞，应用流式细胞仪检测转染效率，转染成功48 h 后用 Ang Ⅱ（10－6 mol／L）干预24 h。用 real-time RT-PCR 检测各组细胞中Ⅰ型胶原（Col Ⅰ）的表达；Western 印迹法检测 Col Ⅰ、E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达；ELISA 法检测细胞培养上清液内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、环磷酸鸟苷（cGMP）的浓度。采用 SPSS 17．0软件包进行统计学处理，以 P ＜0．05为差异有统计学意义。结果与正常对照组相比，Ang Ⅱ组Col Ⅰ的表达显著上调（mRNA 水平 t ＝4．835，P ＝0．008；蛋白质水平 P ＜0．001），E-钙黏蛋白的表达显著下降（t ＝4．284，P ＝0．013）；转染 IMD 质粒后 Col Ⅰ的表达较 Ang Ⅱ组明显下降（mRNA 水平 t ＝3．032，P ＝0．039；蛋白质水平 P ＜0．001），E-钙黏蛋白的表达明显上调（t ＝6．054，P ＝0．004）；而转染空质粒后 Col Ⅰ、E-钙黏蛋白的表达与 Ang Ⅱ无明显差别（Col Ⅰ mRNA 水平 t ＝0．951，P ＝0．395；蛋白质水平 t ＝1．208，P ＝0．294；E-钙黏蛋白蛋白质水平 t ＝1．613，P ＝0．182）。与正常对照组相比， Ang Ⅱ组细胞上清液 eNOS、cGMP 的浓度显著增加（eNOS t ＝20．718，P ＜0．001；cGMP t ＝8．324，P ＝0．001）；与 Ang Ⅱ组相比，IMD 质粒＋Ang Ⅱ组的浓度进一步增加（eNOS t ＝10．682，P ＜0．001；cGMP t ＝18．974，P ＜0．001）；而转染空质粒组＋Ang Ⅱ组 eNOS 及 cGMP 的浓度与 Ang Ⅱ组无明显差别（eNOS t ＝2．039，P ＝0．111；cGMP t ＝1．469，P ＝0．216）。结论IMD 对 Ang Ⅱ诱导的肾小管上皮细胞纤维化有抑制作用，可能通过 eNOS-cGMP 途径阻断 Ang Ⅱ的作用实现的。
关键词： 血管紧张素Ⅱ 纤维化 Intermedin 内皮型一氧化氮合酶 环磷酸鸟苷 -
臭氧氧化预处理在肾缺血再灌注损伤中对内皮型一氧化氮合酶表达的影响
目的 观察臭氧氧化预处理对大鼠急性肾缺血再灌注损伤的保护作用及其对内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响.方法 38只8周龄雄性Wistar大鼠按随机数字表法随机分为4组.(1)假手术组(n＝8):仅切除右肾;(2)缺血再灌注组(n＝10):切除右肾、游离左肾后夹闭左肾动、静脉45 min再开通;(3)臭氧氧化预处理组(n＝10):与缺血再灌注组建模方法一致,但在建模前15 d起每天1次经直肠灌注法吹入氧气和臭氧的混合气体5~5.5 mL;(4)氧气预处理组(n＝10):与臭氧氧化预处理组建模方法一致,但经直肠仅吹入氧气(13 mg/kg).建模后24 h检测各组大鼠血清肌酐、血尿素氮和血清一氧化氮浓度;48 h后采用免疫组织化学法和逆转录PCR法检测各组大鼠肾组织eNOS表达;蛋白质印迹法检测肾组织胞浆eNOS含量.结果 建模后24 h,缺血再灌注组大鼠血清肌酐为(117±20)μmol/L,血尿素氮为(32.8±7.6)mmol/L,血清一氧化氮为(58±12)μmol/L,均高于假手术组,差异有统计学意义(均P<0.05).臭氧氧化预处理组血清肌酐为(63±16)μmol/L,血尿素氮为(17.4±5.2)mmol/L,低于缺血再灌注组和氧气预处理组,差异有统计学意义(均P<0.05);血清一氧化氮为(84±14)μmol/L,均高于缺血再灌注组和氧气预处理组,差异有统计学意义(均P<0.05).臭氧氧化预处理组肾组织学Paller评分(41±6)低于缺血再灌注组(62±9),eNOS灰度值(163±15)高于缺血再灌注组(126±18),差异有统计学意义(均P<0.05).假手术组大鼠肾组织内有微量eNOS mRNA表达,缺血再灌注组、臭氧氧化预处理组和氧气预处理组eNOS mRNA表达增强,均高于假手术组(均P<0.05),臭氧氧化预处理组eNOS mRNA表达高于缺血再灌注组和氧气预处理组(均P<0.05).假手术组无明显eNOS蛋白表达,缺血再灌注组、臭氧氧化预处理组和氧气预处理组eNOS蛋白表达增强,均高于假手术组(均P<0.05),臭氧氧化预处理组eNOS蛋白表达高于缺血再灌注组和氧气预处理组(均P<0.05).结论 臭氧氧化预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤有保护作用,作用机制可能与其诱导eNOS合成增多、一氧化氮产生增多有关.
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一氧化氮合酶及血红素氧化酶在颈动脉粥样硬化斑块中的表达
目的 探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和血红素氧化酶-1(HO-1)在动脉粥样硬化过程中表达的变化及相互关系.方法 选取10例经颈动脉内膜剥脱术取下的粥样硬化斑块标本,以10例正常颈内动脉为对照,用免疫组化方法检测eNOS、iNOS及HO-1在两组颈动脉内的表达,应用统计学的方法对结果进行分析.结果 (1)eNOS在粥样硬化斑块中表达较正常颈动脉表达明显减弱(P<0.001);(2)iNOS在正常颈动脉中没有表达,但在粥样硬化斑块中的平滑肌细胞以及泡沫细胞中有明显表达;(3)HO-1仅在正常颈动脉内皮细胞中表达,而在粥样硬化斑块中,HO-1不仅在内皮细胞中表达,而且在平滑肌细胞以及泡沫细胞中也有较高表达,与正常组相比其表达明显增高(P<0.001);(4)统计分析显示:eNOS阳性表达与iNOS阳性表达呈负相关(r=-0.680,P<0.001),iNOS阳性表达与HO-1阳性表达呈正相关(r=0.898,P<0.001),eNOS阳性表达与HO-1阳性表达呈负相关(r=-0.713,P<0.001).结论 随着动脉粥样硬化的形成,eNOS产生减少而iNOS和HO-1产生增多,一氧化氮合酶及血红素氧化酶在动脉粥样硬化中显示互补及代偿性调节的作用.
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褪黑素对胰岛素抵抗大鼠肾皮质内皮素、内皮型一氧化氮合酶平衡的影响
目的 研究褪黑素对胰岛素抵抗(IR)大鼠肾皮质内皮素1(ET-1)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响.方法 高糖饲料喂养SD大鼠6周复制IR大鼠模型.成模后用药组(MEL组)予褪黑素10mg·kg-1·d-1灌胃,用药6周.未用药IR大鼠模型为对照(IR组).免疫组化、RT-PCR方法 检测肾皮质ET-1、eNOS蛋白和mRNA表达的改变.结果 与IR组相比,褪黑素组大鼠动脉血压(ABP)、血清TG、游离脂肪酸(FFA)、丙二醛(MDA)、胰岛素(Ins)和HOMA-IR降低(P＜0.01),血清HDL-c、超氧化物歧化酶(SOD)升高(P＜0.01).HE染色MEL组大鼠肾皮质病变明显减轻.MEL组ET-1蛋白及mRNA明显低于IR组、eNOS蛋白及mRNA明显高于IR组,差别均有显著意义(P＜0.05).结论 在IR早期应用褪黑素(10mg·kg-1·d-1)治疗可以减轻IR大鼠肾皮质ET-1与eNOS平衡的异常,对肾皮质血管内皮功能具有一定保护作用.
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Rho激酶抑制剂对大鼠血管内皮的保护作用及eNOS表达的影响
目的 探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔对大鼠血管内皮的保护作用及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响.方法 30只雄性SD大鼠随机分为5组(每组6只),即空白对照组(Control组,腹腔注射0.9％生理盐水),高同型半胱氨酸血症(HHcy)模型组(HHcy组,腹腔注射0.9％生理盐水),低、中、高剂量法舒地尔干预组[L-、M-、H-干预组,分别经腹腔注射法舒地尔l、5、15mg/(kg·d)].HHcy组及法舒地尔干预组均采用1.5％蛋氨酸饮用水持续饲养大鼠4周,构建HHcy血管内皮损伤模型；空白对照组大鼠以饮用水喂养.建模成功后采用酶法检测大鼠血清一氧化氮(NO)含量；分别用免疫组织化学法和Western blotting检测主动脉中eNOS、Rho相关的卷曲蛋白激酶(ROCK2)和Ras基因家族成员A(RhoA)蛋白的表达.结果 与空白对照组比较,HHcy组大鼠血清中NO含量明显下降,主动脉中eNOS蛋白表达也明显下降(P＜0.05).与HHcy组相比,M-干预组和H-干预组大鼠血清NO浓度明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05),而L-干预组则无明显变化(P＞0.05); H-干预组主动脉血管内皮细胞eNOS表达明显高于HHcy组和L-干预组,差异有统计学意义(P＜0.05).与空白对照组相比,HHcy组RhoA和ROCK2表达明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05)；与HHcy组比较,H-干预组RhoA和ROCK2表达明显降低(P＜0.05),而L-干预组和M-干预组则无明显差异(P＞0.05).结论 高剂量法舒地尔可能通过抑制Rho/Rho激酶信号通路,增加NO和eNOS的表达,发挥对大鼠血管内皮的保护作用.
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内皮型一氧化氮合酶在大鼠末端病中的表达
目的:观察末端病大鼠跟腱末端区内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的分布,探讨eNOS与血管新生的关系及其在末端病中对机体的保护作用.方法:将8只Wistar大鼠随机分为对照组和造模组,采用电刺激跳跃法造模,4周后处死动物,取其双后足跟腱及部分跟骨,制成观察标本,采用Image Pro Plus 5.0图像分析系统测定标本镜下视野照片的阳性信号积分光密度值(IOD).结果:对照组主要在腱围处有eNOS的大量表达;造模组大鼠跟腱、纤维软骨、钙化软骨、跟骨、骨髓腔、腱骨关节面及腱围等部位eNOS表达明显,腱围及骨髓腔处表达多.两组间不同部位IOD值均有显著差异.结果提示:eNOS可能参与了末端病组织血管的新生,组织结构功能适应及抑制细胞凋亡等代偿性反应.
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miRNA-24对血管内皮细胞eNOS表达/活性及其代谢产物NO生成的影响
目的 探讨微小RNA(miRNA)-24对血管内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达、活性调节的分子机制及其代谢产物的影响.方法 构建miRNA-24高表达质粒,并转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC).MTT法检测细胞的增殖情况,划痕实验检测细胞的迁移能力,RT-PCR和Western印迹法检测细胞eNOS mRNA和蛋白的表达情况,ELISA法检测eNOS的表达活性,硝酸还原法测定细胞培养上清液中NO的含量.结果 与对照组相比,转染miRNA-24后细胞增殖能力下降54.32%、迁移能力下降48.62%;转染miRNA-24后eNOS mRNA降低43.92%,蛋白表达量减少42.71%;转染miRNA-24后eNOS的酶活性降低73.20%,同时NO的合成与释放减少55.29%.结论 miRNA-24高表达抑制eNOS的表达及酶活性;miRNA-24抑制代谢产物NO的合成与释放,这可能成为心血管疾病防治的分子靶点.
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内皮型一氧化氮合酶基因缺失小鼠的脑细胞色素P450-1B1蛋白表达及其意义
目的 研究内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因敲除小鼠脑内细胞色素P450-1B1(CYP1B1)蛋白的表达变化及其意义.方法 按照体重将小鼠分为4组:野生型组(n=4)、eNOS基因敲除组(n=4)、实验组(2种小鼠各4只)和对照组(2种小鼠各4只).实验组腹腔注射2,3′,4,5′-tetramethoxystilbene(TMS,CYP1B1抑制剂)300μg·kg-1,对照组腹腔注射等剂量溶剂二甲基亚砜30μL,每天1次,连续1周.以免疫荧光染色和免疫印迹法测定小鼠的CYP1B1与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)p17表达.结果 野生型组和基因敲除组小鼠的前脑皮质区CYP1 B1免疫荧光阳性细胞数分别是(106±21)个/200×视野、(249±17)个/200×视野;这2组在纹状体区阳性细胞数分别是(85±16)个/200×、(211±23)个/200×视野,2组比较差异均有统计学意义(均P<0.001).野生型组和基因敲除组小鼠的脑CYP1 B1蛋白表达灰度值分别是0.45±0.04,1.15±0.15,2组比较差异均有统计学意义(均P<0.001).TMS干预后,实验组中野生型小鼠和eNOS基因敲除小鼠脑Caspase-3 p17蛋白灰度值分别是1.24±0.21,2.21±0.17,均显著高于对照组中的野生型小鼠和eNOS基因敲除小鼠,Caspase-3 p17蛋白灰度值分别是0.23±0.03,0.76±0.08,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.001).结论 eNOS基因敲除小鼠脑内CYP1B1蛋白表达升高并且起到抗凋亡作用,但其作用机制目前尚不明确.
关键词： 内皮型一氧化氮合酶 细胞色素P450-1B1 基因敲除
