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平喘方对哮喘模型小鼠Rho/Rock信号通路表达的影响
目的：研究平喘方对哮喘模型小鼠Rho/Rock信号通路表达的影响，探讨平喘方治疗哮喘的机理。方法采用随机数字表法将40只BALB/C小鼠随机分为空白对照组、哮喘模型组、地塞米松组和平喘方干预组各10只。给药干预4周后用Western blot法检测各组小鼠肺组织RhoA蛋白、RockI蛋白表达量，RT-PCR法检测小鼠肺组织RhoA mRNA、RockI mRNA表达量。结果哮喘模型组小鼠RhoA蛋白、RockI蛋白、RhoA mRNA、RockI mRNA表达量[分别为（1.05±0.20）、（1.06±0.08）、（6.60±1.09）、（6.53±1.84）]，均高于空白对照组[分别为（0.76±0.08）、（0.84±0.14）、（3.82±1.77）、（3.65±1.46）]，差异有统计学意义（P＜0.01）。地塞米松干预组小鼠RhoA蛋白、RockI蛋白、RhoA mRNA、RockI mRNA表达量[分别为（0.78±0.11）、（0.87±0.32）、（4.19±2.33）、（4.09±1.08）]，低于哮喘模型组（P＜0.01）。平喘方干预组[分别为（0.86±0.12）、（0.93±0.14）、（4.38±2.01）、（4.50±1.13）]低于哮喘模型组，差异有统计学意义（P＜0.05）；平喘方干预组与地塞米松干预组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论平喘方可抑制哮喘小鼠Rho/Rock信号通路表达，效果与地塞米松相近。
关键词： 哮喘 平喘方 Rho/Rock信号通路 -
ROCK抑制剂法舒地尔对百草枯中毒大鼠肺纤维化的干预研究
目的 探讨ROCK抑制剂法舒地尔对百草枯中毒大鼠肺纤维化的影响及可能的机制.方法 将72只SPF级SD雄性大鼠,随机(随机数字法)分为4组,即正常对照组(NS组,n=18)、法舒地尔对照组(FS对照组,n=18)、百草枯染毒组(PQ染毒组,n=18)及法舒地尔干预组(FS干预组,n=18).在第7、14、28天各组随机取6只大鼠,麻醉后处死,留取肺组织标本.碱水解法测定肺组织羟脯氨酸(HYP)含量,实时荧光定量PCR(real time PCR)检测Ⅰ、Ⅲ型胶原、结缔组织生长因子(CTGF)与Rho/ROCK信号通路中ROCK1 mRNA的表达,蛋白印迹法(Western-blot法)测定Ⅰ、Ⅲ型胶原、CTGF与Rho/ROCK信号通路中ROCK1蛋白的表达.光镜下观察各组肺组织病理变化情况.结果 与NS组比较,FS对照组各项观察指标无明显变化,差异均无统计学意义(P＞0.05).与NS组比较,PQ染毒组和FS干预组HYP含量均升高,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、CTGF、ROCK1 mRNA表达量升高,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、CTGF、ROCK1蛋白表达量升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).与同时间点PQ染毒组比较,FS干预组在第7、14、28天,HYP含量均降低,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、CTGF、ROCK1 mRNA表达量显著降低,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、CTGF、ROCK1蛋白表达量显著降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).光学显微镜下可见,PQ染毒组大鼠肺组织在染毒后第28天,肺纤维化程度严重,各个时间点FS干预组大鼠病理损害都较同时间点PQ染毒组有所减轻.结论 ROCK抑制剂法舒地尔通过调控Rho/ROCK信号转导通路,使CTGF表达量下调,抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达,蛋白沉积减少,进而减轻百草枯中毒肺纤维化程度,对急性百草枯中毒所致的肺纤维化有一定的保护作用.
关键词： 百草枯 肺纤维化 法舒地尔 Rho/Rock信号通路 -
Rho激酶抑制剂对大鼠血管内皮的保护作用及eNOS表达的影响
目的 探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔对大鼠血管内皮的保护作用及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响.方法 30只雄性SD大鼠随机分为5组(每组6只),即空白对照组(Control组,腹腔注射0.9％生理盐水),高同型半胱氨酸血症(HHcy)模型组(HHcy组,腹腔注射0.9％生理盐水),低、中、高剂量法舒地尔干预组[L-、M-、H-干预组,分别经腹腔注射法舒地尔l、5、15mg/(kg·d)].HHcy组及法舒地尔干预组均采用1.5％蛋氨酸饮用水持续饲养大鼠4周,构建HHcy血管内皮损伤模型；空白对照组大鼠以饮用水喂养.建模成功后采用酶法检测大鼠血清一氧化氮(NO)含量；分别用免疫组织化学法和Western blotting检测主动脉中eNOS、Rho相关的卷曲蛋白激酶(ROCK2)和Ras基因家族成员A(RhoA)蛋白的表达.结果 与空白对照组比较,HHcy组大鼠血清中NO含量明显下降,主动脉中eNOS蛋白表达也明显下降(P＜0.05).与HHcy组相比,M-干预组和H-干预组大鼠血清NO浓度明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05),而L-干预组则无明显变化(P＞0.05); H-干预组主动脉血管内皮细胞eNOS表达明显高于HHcy组和L-干预组,差异有统计学意义(P＜0.05).与空白对照组相比,HHcy组RhoA和ROCK2表达明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05)；与HHcy组比较,H-干预组RhoA和ROCK2表达明显降低(P＜0.05),而L-干预组和M-干预组则无明显差异(P＞0.05).结论 高剂量法舒地尔可能通过抑制Rho/Rho激酶信号通路,增加NO和eNOS的表达,发挥对大鼠血管内皮的保护作用.
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卡维地洛对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌重塑中Rho/Rock信号通路的影响
目的研究卡维地洛对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌重塑中的作用及对Rho/Rock信号通路的影响。方法24只雄性SD大鼠随机分成3组：空白对照组(对照组)、ISO模型组（模型组）、卡维地洛（Carvedilol Car）组(治疗组)，每组8只。模型组和治疗组皮下多点注射ISO[5 mg/(kg·d)×10 d]建立大鼠心肌纤维化模型，其中治疗组给予Car[10 mg/(kg·d)]灌胃，模型组及对照组每日给予相同体积的生理盐水灌胃。6周后取左室心肌组织进行MASSON染色、免疫组织化学染色，分别检测胶原容积分数(CVF)、心肌组织中转化生长因子-β1（TGF-β1）表达量；RT-PCR法检测心肌组织RhoA和Rho激酶(Rock)mRNA的表达。结果与对照组比较，模型组大鼠CVF增加，TGF-β1表达增高(P＜0.01)，左室组织RhoA和Rho激酶mRNA表达上调(P＜0.01）；与模型组比较，治疗组CVF表达下降（P＜0.01），TGF-β1、RhoA和Rho激酶mRNA表达减少(P＜0.01），但均仍高于对照组（P＜0.01）。结论 ISO诱导心肌纤维化伴有Rho/Rock信号通路激活，卡维地洛能抑制Rho/Rock信号转导通路的活性、抑制TGF-β1表达，减轻心肌纤维化。
关键词： 心肌纤维化 心肌重塑 Rho/Rock信号通路 卡维地洛 -
Fasudil对EAE小鼠脊髓内细胞ROCK-Ⅱ表达的影响
目的 探讨Fasudil对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脊髓内细胞及血管内皮细胞KOCK-Ⅱ表达的影响.方法 雌性C57BL/6小鼠随机分为佐剂组、EAE组和Fasudil干预组.EAE和Fasudil组小鼠用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG<,35-55>)进行免疫,佐剂组小鼠以生理盐水代替MOG<,35-55>作为EAE的对照.Fasudil干预组于免疫后第7d腹腔给予Fasudil(50mg/kg/d),连续14d.佐荆组和EAE组给与等量生理盐水作为对照.免疫后隔天观察各组小鼠临床评分和体重变化.在免疫4周后处死动物,取小鼠脊髓腰膨大处,进行HE和免疫荧光染色,观察各组小鼠脊髓的病理变化与ROCK-Ⅱ的表达情况.结果 Fasudil能够改善EAE的临床症状(P<0.05),减轻炎性细胞浸润(P<0.05),同时减少EAE小鼠脊髓及其血管内皮细胞ROCK-Ⅱ的表达.结论EAE小鼠脊髓及其血管内皮细胞ROCK-Ⅱ的表达明显上调,推测可能与炎性细胞浸润和疾病的发生发展有关.Fasudil可以改善EAE的临床症状,可能与脊髓及其血管内皮细胞KOCK-Ⅱ降低,及由此引起的炎性细胞浸润减少有关.
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胃癌及其癌前病变分子信号通路的相关研究
胃癌是常见的消化道肿瘤疾病之一,由于早期症状并不明显,通常在疾病后期症状出现时才被诊断,因此,大多数晚期胃癌患者的预后多为不良. 胃癌的发生是由多种因素引起的,胃黏膜层形态改变一般为基因与环境之间相互作用的结果 ,许多潜在细胞致癌信号通路在解除抑制后,导致细胞恶性增殖,抑制细胞凋亡和增强侵入性,这些复杂的异常信号通路激活可以产生癌前病变并促进胃癌的发展.近年来对于分子信号通路研究的关注愈来愈热,一方面使胃癌疾病发病机制的探索更加深入,另一方面对于胃癌及其癌前病变治疗提供新思路. 本文主要对以下三个涉及胃癌进展的分子通路进行综述总结,以便更多研究者在临床及科研中寻求研究切入点.
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中药调控Rho/ROCK信号通路治疗平滑肌细胞功能异常疾病机制及研究进展
中药调控Rho/ROCK信号通路的研究是近年研究的热点之一,其介导了多种平滑肌细胞功能异常的疾病.单味中药及其提取物和一些中药复方可以通过调节Rho/ROCK信号通路治疗表型转化异常所导致的平滑肌细胞功能异常疾病.中药干预Rho/ROCK信号通路的优势和作用靶点尚未明确,需要归纳与总结.就此查阅近十几年来国内外文献,对Rho/ROCK信号通路与平滑肌细胞的相关性和作为治疗靶点的中药治疗优势等进行综述.
关键词： 中药 Rho/Rock信号通路 平滑肌细胞功能异常 -
Rho/ROCK信号通路与青光眼
青光眼是眼科临床中常见的致盲性眼病之一.目前的治疗方法主要是通过药物或手术降低眼压,对视网膜神经节细胞及其轴突损伤的保护也越来越引起人们的重视.随着对相关卷曲螺旋形成蛋白激酶通路(Rho/ROCK)生物学功能的深入研究,目前发现抑制Rho/ROCK通路可以增加小梁网途径的房水引流,降低眼内压,增加眼部血液供应,促进神经节细胞的存活.本文就Rho/ROCK通路与青光眼关系的研究进展进行综述.
关键词： 青光眼 小梁网 Rho/Rock信号通路 -
Rho/ROCK信号通路在HIV-1 Tat诱导血脑屏障破坏及β淀粉样蛋白沉积中的作用
目的 探讨Rho/ROCK信号传导通路在人类免疫缺陷病毒-1型反式转录激活因子(HIV-1 transactivator of transcription,HIV-1 Tat)诱导血脑屏障破坏及对β淀粉样蛋白(Amyloid-beta,Aβ)沉积中的作用.方法 将培养的人脑微血管内皮细胞(human cerebral microvascular endothelial cells,hCMEC/D3)予以不同浓度的Rho/ROCK信号传导通路抑制剂盐酸法舒地尔(Hydroxyfasudil,HF)刺激细胞,并设立对照组,观察其对细胞活力的影响,分别予以HIV-1 Tat、HF刺激细胞,以蛋白免疫印迹法和实时反转录聚合酶链式反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测hCMEC/D3中紧密连接蛋白Occludin、晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE,转移血液Aβ到脑组织)的蛋白和mRNA表达的变化.结果 HF在30μmol/L(0.17±0.02)以下时对hCMEC/D3活力无明显影响(P＞0.05).HIV-1 Tat能抑制hCMEC/D3的Occludin 蛋白(0.71±0.03、P＜0.001)与mRNA(0.41±0.05、P＜0.05)表达,同时上调RAGE蛋白(0.83 ±0.01、P＜0.001)和mRNA(1.93±0.66、P＜0.05)表达.HF预处理细胞2h后与HIV-1 Tat共培养可以显著增加Occludin蛋白与mRNA的表达(0.93±0.03、P＜0.001;1.04±0.45、P＜0.05),同时可以明显减少RAGE蛋白与mRNA的表达(0.54±0.01、P＜0.001,1.08±0.43、P＜0.05).结论 HIV-1 Tat可使紧密连接蛋白Occludin蛋白和mRNA表达下调导致血脑屏障破坏,诱导Aβ转运受体RAGE的蛋白和mRNA过度表达,从而可能导致Aβ在脑内沉积增加;阻断Rho/ROCK信号传导通路可抑制HIV-1 Tat诱导血脑屏障破坏作用,阻止RAGE蛋白和mRNA的过度表达.
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宣肺平喘方对哮喘大鼠Rho/Rock信号通路调控作用的实验研究
目的:观察宣肺平喘方对支气管哮喘大鼠气道重建中Rho/Rock信号通路蛋白表达的影响,探讨其作用机制.方法:将SD大鼠随机分为正常组、模型组、宣肺平喘方组和地塞米松组4组,每组10只.除正常组外,其余3组均采用卵蛋白雾化吸入诱发哮喘,宣肺平喘方组和地塞米松组在雾化吸入的同时分别给予宣肺平喘方及地塞米松治疗,共2W.HE染色法观察大鼠肺组织病理学变化,荧光免疫组化法测定大鼠肺支气管壁RhoA蛋白、Rock2蛋白表达.结果:HE染色显示模型组大鼠支气管壁塌陷,周围有大量炎性细胞渗出;宣肺平喘方组及地塞米松组支气管形态完整,炎性细胞渗出较少;荧光免疫组化法检测结果显示RhoA蛋白、Rock2蛋白在大鼠支气管壁和肺泡壁均有表达;模型组Rho A蛋白、Rock 2蛋白表达量明显高于正常组,宣肺平喘方组和地塞米松组与模型组比较RhoA蛋白、Rock2蛋白表达明显下降.结论:宣肺平喘方对哮喘气道重建中Rho/Rock信号通路有良好的调控作用.
关键词： 哮喘 宣肺平喘方 Rho/Rock信号通路 病理学 大鼠 -
异常黑胆质肝癌移植模型大鼠Rho/Rock信号通路相关分子表达研究
目的:探讨异常黑胆质证肝癌移植模型大鼠Rho/Rock信号通路相关分子的蛋白表达,诠释异常黑胆质肿瘤高发的分子生物学基础.方法:采用足底电击、干寒饲料、铁管制动等多种因素刺激21d建立异常黑胆质证大鼠模型,在此基础上通过肝内注射walker-256瘤细胞建立异常黑胆质大鼠肝癌移植模型,观察其肝脏组织形态结构变化,并采用Western Blot法检测大鼠肝脏相关蛋白的表达变化.结果:异黑肿瘤组肝脏组织形成明显癌巢,与对照组相比癌旁组织肝索结构紊乱,癌细胞向肝小叶深部迁移;异常黑胆质成熟剂给药组癌细胞崩解、凋亡,胶原纤维增生,癌旁肝索重构.与对照组相比,肿瘤组Cdc42和Rock2蛋白表达均明显增加(P＜0.05),异黑肿瘤组Cdc42、Rac1、Rock1、Rock2和Myl1蛋白表达明显增加(P＜0.05);与异黑肿瘤组相比,异常黑胆质成熟剂(ASM)给药组Cdc42、Rac1、Rock1、Rock2和Myl1蛋白表达呈剂量依赖性降低(P＜0.05),且与对照组无显著差异.结论:异常黑胆质证肝癌移植模型可能与Rho/Rock信号通路分子通过调控肌动蛋白收缩引起的肿瘤细胞侵袭、转移生物学行为等作用有关,异常黑胆质成熟剂可能通过下调Rho/Rock信号通路分子使损伤的组织形态逆转.
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坎地沙坦对卵巢癌Caov-3细胞迁移和侵袭能力的影响
目的:观察血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂坎地沙坦(candesartan)对卵巢癌Caov-3细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,及其与Ras同源基因(Ras homolog gene,Rho) /Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(Rho-associated coiledcoil forming protein kinase,ROCK)通路相关蛋白表达的关系.方法:体外培养人卵巢癌Caov-3细胞.采用不同浓度(0.1、1、10和100μmol/L)的坎地沙坦处理Caov-3细胞,CCK-8法检测Caov-3细胞的存活率,FCM法检测Caov-3细胞的凋亡率.坎地沙坦(100 μmol/L)处理Caov-3细胞24 h后,采用划痕愈合实验和Transwell小室侵袭实验分别检测Caov-3细胞的迁移及侵袭能力.蛋白质印迹法检测坎地沙坦(0.1、1、10和100μmol/L)处理24 h后,Caov-3细胞内RhoA、RhoC及ROCK1蛋白表达水平的改变,以及ROCK1蛋白下游底物肌球蛋白轻链磷酸酶(myosin light chain phosphatase,MLCP)的功能亚基MYPT1 (myosine phosphatae targeting subunit 1)磷酸化水平的改变.结果:坎地沙坦具有抑制Caov-3细胞增殖的作用(P＜0.05),但对Caov-3细胞的凋亡无明显影响(P＞0.05).坎地沙坦(100 μmol/L)处理细胞24 h后能明显抑制细胞的迁移及侵袭能力(P值均＜0.05);可显著下调Caov-3细胞中RhoA、RhoC及ROCK1蛋白的表达水平(P值均＜0.05),以及MYPT1蛋白的磷酸化水平(P＜0.01).结论:坎地沙坦对人卵巢癌Caov-3细胞的增殖、迁移和侵袭能力具有抑制作用,这种抑制作用可能与其下调Rho/ROCK通路中RhoA、RhoC及ROCK1蛋白的表达及其下游MYPT1蛋白的磷酸化水平相关.
关键词： 卵巢肿瘤 血管紧张素受体拮抗剂 Rho/Rock信号通路 细胞运动 -
姜黄素对口腔鳞癌细胞中细胞骨架及Rho/ROCK信号通路的影响
目的:探讨姜黄素对口腔鳞癌细胞系HN13细胞骨架的影响及其相关的分子机制.方法:用考马斯亮蓝染色分析法检测不同浓度姜黄素(0、10、20、40lμmol/L)作用24h的细胞,观察姜黄素对鳞癌细胞骨架的影响.用免疫组织化学法半定量检测不同浓度姜黄素(0、10、20、40 μmol/L)作用24h后细胞内F-actin含量的变化.用Western印迹法检测不同浓度姜黄素(0、10、20、40 μmol/L)作用24 h后ROCK2及p-ROCK2蛋白的表达.结果:在低浓度姜黄素(10 μmol/L)作用24 h后细胞骨架结构收缩、染色变淡、稀疏、变细,排列方式发生变化,但尚存一部分应力纤维；随着姜黄素浓度的增加(20 μmol/L),细胞骨架变化更加明显,表现为细胞骨架含量明显减少,放射状应力纤维几乎完全消失;当姜黄素浓度为40 μmol/L时,细胞骨架轮廓已不清晰,染色更淡,减少更加明显,并有断裂,多数细胞变形明显.不同浓度姜黄素干预细胞24 h后,细胞F-actin含量减少,各组间差异有统计学意义(P＜0.01).Western印迹法检测结果显示不同浓度姜黄素(0、10、20、40 μmol/L)作用24h后细胞内ROCK2及p-ROCK2蛋白的表达显著下调.结论:姜黄素可诱导鳞癌细胞骨架改变,其作用机制与抑制Rho/ROCK信号通路的效应分子ROCK2及p-ROCK2活化有关.
关键词： Rho/Rock信号通路 姜黄素 鳞癌 细胞骨架 -
高氧致SD大鼠年龄相关的肺损伤及可能机制
目的·观察新生鼠和幼鼠高氧肺损伤的异同,并初步探索Rho/Rock信号通路在年龄相关高氧肺损伤中的作用.方法·将新生SD大鼠(新生鼠)与3周龄SD大鼠(幼鼠)分为新生鼠空气组、新生鼠高氧组、幼鼠空气组、幼鼠高氧组,建立动物模型直至第14日,统计生存率、体质量变化,取SD大鼠肺组织行病理学检查、损伤程度评分、羟脯氨酸含量测定、SOD与MDA检测,以及ROCK1、p-MYPT1、MYPT1表达的检测.结果·①新生鼠高氧组较新生鼠空气组、幼鼠空气组、幼鼠高氧组生存率明显降低,幼鼠空气组与高氧组生存率无明显差异;新生鼠高氧组较空气组、幼鼠高氧组较空气组体质量增长缓慢,且新生鼠高氧组较幼鼠高氧组体质量增长更为缓慢.②新生鼠高氧组、幼鼠高氧组出现肺组织损伤及纤维化改变,且新生鼠较幼鼠更为严重.③新生鼠高氧组较空气组、幼鼠高氧组较空气组MDA含量升高,SOD活力降低;与幼鼠高氧组相比,新生鼠高氧组SOD活力基础值较低且高氧后降低更为明显.④新生鼠高氧组较空气组、幼鼠高氧组较空气组肺组织ROCK1蛋白表达有上升趋势,p-MYPT1蛋白表达增强,且新生鼠高氧组较幼鼠高氧组p-MYPT1蛋白表达增强更为明显.结论·高氧肺损伤具有年龄依赖性,新生鼠对高氧耐受力明显弱于幼鼠,与其自身抗氧化能力弱有关;Rho/Rock信号通路活化程度的不同可能在年龄相关高氧肺损伤中发挥重要作用.
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Rock抑制剂法舒地尔改善高氧致新生大鼠肺纤维化的作用机制
目的 探讨Rho激酶(Rock)抑制剂法舒地尔(FAS)改善高氧致新生大鼠肺纤维化的作用机制.方法 将24只SD新生大鼠,按随机数字表法分为空气组(正常对照组)、FAS空气组、高氧组和FAS高氧组,分别建立动物模型.在造模的第21日取各组新生大鼠行肺组织辐射状肺泡计数(RAC),Western blotting检测肺组织转化生长因子β1 (TGF-β1)蛋白及Rho/Rock信号通路中Rock1和磷酸化肌球蛋白轻链磷酸酶靶亚单位1 (p-MYPT1)蛋白的表达.结果 与空气组比较,高氧组RAC值明显下降(P＜0.05);FAS高氧组RAC值较高氧组上升,但差异无统计学意义(P＞0.05).高氧组肺组织TGF-β1蛋白的表达较空气组显著升高(P＜0.05),而FAS高氧组肺组织TGF-β1蛋白较高氧组明显降低(P＜0.05).与空气组比较,高氧组肺组织Rock1蛋白表达有上升趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05),而p-MYPT1蛋白表达明显升高(P＜0.05);FAS高氧组肺组织Rock1蛋白表达较高氧组下降,但差异无统计学意义(P＞0.05),而p-MYPT1蛋白表达明显降低(P＜0.05).结论 FAS可通过减少TGF-β1的表达,一定程度改善高氧致新生大鼠肺纤维化,其调控机制可能与抑制Rho/Rock信号通路的活化有关.
关键词： 高氧 肺纤维化 法舒地尔 转化生长因子β1 Rho/Rock信号通路 -
Rho/Rock 信号通路在大鼠呼吸机相关性肺损伤中的作用
目的：评价 Rho/Rock 信号通路在大鼠呼吸机相关性肺损伤(ventilator-induced lung injury,VILI)中的作用。方法选择健康雄性 SD 大鼠96只,12~15周龄,体重300~350 g,采用随机数字表法将大鼠随机分为四组：空白对照组(C 组)、Rho 激酶抑制药法舒地尔组(F 组)、高潮气量组(H 组)和高潮气量+Rho 激酶抑制药法舒地尔组(HF 组),每组24只。C 组和 F 组不行机械通气,H 组和 HF 组行高潮气量40 ml/kg 机械通气4 h。F 组和 HF 组在机械通气前1 h 给予腹腔注射法舒地尔10 mg/kg。分别于通气前(T0)、通气后4 h(T1)、8 h(T2)和24 h(T3)每组随机取6只大鼠,采集血样,测定血清 TNF-α、IL-6及 IL-10浓度；采血结束后处死大鼠,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),采用考马斯亮兰法检测 BALF 总蛋白；测定肺组织湿/干重比(W/D)；光镜下行肺组织病理学损伤评分；采用分光光度法检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性；采用 Western blot 和 RT-PCR法分别检测肺组织 RhoA、Rock2蛋白含量和 mRNA 表达水平。结果与 C 组比较,T1~T3时 H组和 HF 组大鼠血清 TNF-α、IL-6及 IL-10浓度、BALF 总蛋白含量、肺组织 W/D、病理学损伤评分、MPO 活性、RhoA、Rock2蛋白含量和 mRNA 表达水平明显升高(P <0.05)；与 H 组比较,T1~T3时 HF 组大鼠血清 TNF-α、IL-6浓度、BALF 总蛋白含量、肺组织 W/D、病理学损伤评分、MPO 活性、RhoA、Rock2蛋白含量和 mRNA 表达水平明显下降,血清 IL-10浓度明显升高(P <0.05)。结论 Rho激酶抑制药法舒地尔可减轻大鼠呼吸机相关性肺损伤,其机制可能与其抑制 Rho/Rock 信号通路,降低肺组织内炎性反应有关。
关键词： Rho/Rock信号通路 呼吸机相关性肺损伤 机械通气 -
人脑星形细胞瘤进展过程中Rho/ROCK信号通路的可能作用
目的 探讨不同病理学级别人脑星形细胞瘤中Rho/ROCK信号通路可能扮演的角色.方法 应用免疫组化法检测60例不同病理级别人脑星形细胞瘤组织中RhoA、RhoB、ROCK-1及ROCK-2蛋白表达,评估Rho/ROCK信号通路中RhoA、RhoB、ROCK-1及ROCK-2蛋白表达与星形细胞瘤的病理分级及临床特征的关系.结果 (1)RhoA蛋白在瘤旁脑组织表达的阳性率为0,在低级别和高级别星形细胞瘤中表达的阳性率分别为20%和80%,高表达率分别为10.0%和66.7%;高级别组的阳性率和高表达率均高于瘤旁脑组织和低级别组(P<0.05);RhoA表达的强弱在一定程度上反映了人脑星形细胞瘤的恶性程度;(2)RhoA蛋白表达在>40岁组的阳性率和高表达率均显著高于<40岁组,两者差别均有统计学意义(P<0.05);(3)RhoA在右大脑半球组的高表达率显著高于左大脑半球组,差别有统计学意义(P<0.05);(4)RhoA蛋白表达的阳性率和高表达率与性别及肿瘤长径无关(P>0.05);(5)RhoB、ROCK-1及ROCK-2蛋白均为阴性表达.结论 Rho/ROCK信号通路在人脑星形细胞瘤中的作用可能与RhoA/ROCK1,2及RhoB/ROCK1,2通路关系不大;RhoA在了解星形细胞瘤的发生、进展和寻找治疗新靶点方面有一定参考价值.
关键词： Rho/Rock信号通路 星形细胞瘤 -
RhoGDI1在TNF-α诱导内皮细胞损伤中的作用研究
目的:阐明Rho特异鸟苷酸解离抑制因子1(RhoGDI1)和Rho/ROCK信号通路在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导内皮细胞损伤中的作用机制.方法:采用siRNA技术干扰人脐静脉内皮细胞RhoGDI1表达,实验分为正常对照组,10μg·L-1 TNF-α处理组和RhoGDI1干扰组.MTT法检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测RhoGDI1、RhoA、ROCK表达及活化.结果:TNF-α处理和RhoGDI1干扰均显著降低内皮细胞存活率,提高内皮细胞的凋亡.TNF-α处理后RhoGDI1表达显著下降,TNF-α处理和RhoGDI1干扰均可显著提高RhoA表达以及ROCK活化.结论:TNF-α可能通过抑制RhoGDI1促进Rho/ROCK信号通路的活化,终引起内皮细胞凋亡.
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Rho/Rho激酶在哮喘小鼠气道的表达及其对气道重塑的影响
目的 研究Rho/Rho激酶(ROCK)信号通路在哮喘小鼠气道中的表达及其对气道重塑的作用.方法 清洁级BALB/c雄性小鼠39只,随机分为对照组、哮喘组、Y-27632干预组、地塞米松干预组,每组10只(其中对照组9只).建立哮喘小鼠模型,并应用ROCKⅡ特异性拮抗剂Y-27632进行干预,光镜观察肺组织结构,Image-pro plus图像分析软件测量支气管壁厚度(Wat)和平滑肌厚度(Wam),免疫组化法测定肺组织ROCKⅡ蛋白含量,RT-PCR法测定RhoA、ROCKⅡ mRNA含量.结果 ⑴哮喘组小鼠RhoA、ROCKⅡ表达明显增高,应用ROCKⅡ特异性拮抗剂Y-27632能够下调RhoA、ROCKⅡ的表达.⑵ Y-27632干预组小鼠Wat和Wam均明显低于哮喘组小鼠.结论 哮喘小鼠肺组织RhoA及ROCKⅡ表达增多,ROCKⅡ受体拮抗剂Y-27632能够下调RhoA、ROCKⅡ的表达,明显抑制哮喘小鼠Wat和Wam.
关键词： Rho/Rock信号通路 哮喘 Y-27632 气道重塑 -
大黄素对脂多糖诱导的内皮细胞损伤Rho/ROCK信号通路的影响
目的：探讨大黄素对脂多糖（LPS）诱导损伤的人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）骨架及通透性影响的作用机制。方法：HUECs分为五组：正常对照组、内皮炎症损伤模型组（0.2μg/mL LPS）、大黄素干预组（10μmol/L大黄素+0.2μg/mL LPS）、抑制剂对照组（0.2μg/mL LPS+50μmol/L Y27632）、西药对照组（10-5 mol/L缬沙坦+0.2μg/mL LPS）。首先，以内皮细胞生物学功能PCR基因芯片技术筛选可能的基因改变。结合基因芯片结果和文献中各基因功能，拟定观察Rho/ROCK通路相关的和可能涉及调节细胞骨架的基因，如纤连蛋白（FN）、整合素A5（ITGA5）、Ras同源基因家族成员（RhoA）、肌球蛋白轻链磷酸酶（MLCP）、磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸肌醇3-激酶（PI3K）、黏着斑激酶（FAK）、血管内皮生长因子（VEGF）、血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）的mRNA表达水平，进行实时荧光定量PCR验证，同时以Western blotting对ITGA5、RhoA、4，5-二磷酸磷脂酰肌醇（PIP2）和磷酸化的肌球蛋白轻链（PMLC）进行蛋白水平的研究。结果：①LPS组Rho/ROCK通路相关基因（FN、ITGA5、RhoA、MLCP、PI3K、FAK、VEGF、VEGFR2）表达显著升高，ITGA5、RhoA、PIP2、PMLC的蛋白表达亦升高，与正常对照组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。②与LPS组比较，Y27632组、缬沙坦组的FN、ITGA5、RhoA、PI3K、FAK、VEGF、VEGFR2基因表达下降，MLCP表达上升，差异均有统计学意义（P＜0.05）；ITGA5、PIP2的蛋白表达下降；缬沙坦组PMLC表达降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。③与LPS组比较，大黄素组FN、PI3K、FAK表达降低，MLCP表达上升，差异均有统计学意义（P＜0.05）；PIP2蛋白表达下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：LPS可激活Rho/ROCK信号通路，成功构建HUVECs内皮损伤模型；Y27632和缬沙坦可阻断Rho/ROCK通路，对细胞骨架有较强的保护作用；大黄素可轻度抑制Rho/ROCK通路，同时可能通过调节PI3K、MLCP表达而影响其他通路（如AKT和/或FAK-PI3K信号通路）从而发挥对内皮细胞损伤的干预作用。
关键词： 大黄素 脂多糖 内皮细胞损伤 Rho/Rock信号通路
