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从食肉性植物奇异猪笼草中分离得萘醌和类黄酮成分及其抗骨质疏松和抗氧化活性的研究
已有研究表明奇异猪笼草(猪笼草科)的甲醇提取物在体外具有显著的抗氧化活性(过氧化氢自由基的清除与减少作用)和抗骨质疏松(前破骨RAW 264.7细胞)活性。作者从奇异猪笼草的枝和叶的三氯甲烷和乙酸乙酯提取物中分离鉴定出13种化合物(1～13)，其中2种为新的萘醌类，即nepenthones F(1)和G(2)，另外11种为已知化合物。作者对分离出的化合物进一步评估其抗氧化和抗破骨的活性，其中化合物10和11显示了强力抗氧化效果；化合物4和12在实验鼠骨髓巨噬细胞中明显地抑制了核因子κB配体(RANκL)诱导的破骨细胞形成的受体激活。
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特发性血小板减少性紫癜的诊断与治疗
特发性血小板减少性紫癜(ITP)是外周血小板破坏增多而引起的常见出血性疾病,与自身免疫有关.其发病机制:一是通过细胞介导的免疫调节形成并持续产生抗血小板的自身抗体;二是通过网状内皮系统加速血小板破坏,也有报道自身抗体作用于骨髓巨噬细胞,使血小板生成受到抑制.
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小鼠骨髓巨噬细胞过继性回输的体内示踪及其在高血压心脏损伤中的应用研究
目的 通过增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)转基因和CD45.1 两种工具小鼠,进行小鼠骨髓巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMM)过继性回输后体内示踪的研究.利用小鼠高血压模型,观察回输BMM对高血压心脏损伤的作用.方法 以EGFP转基因小鼠为供体,分离骨髓细胞,以巨噬细胞集落刺激因子诱导制备骨髓巨噬细胞.尾静脉回输EGFP+BMM到野生型小鼠.受体小鼠分2组:①实验组:每只注射2×106 EGFP+BMM;②对照组:注射等体积磷酸盐缓冲液(PBS).术后1、7 d观察受体小鼠外周血中EGFP+细胞存活和比例;7 d后收取小鼠心、肾、脾和肝脏组织,观察GFP+细胞的表达.以CD45.1小鼠为供体,CD45.2小鼠为受体,同上进行BMM回输,术后7 d检测受体小鼠外周血中CD45.1+细胞的比例.利用血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)灌注建立小鼠高血压模型,同时回输PBS或EGFP+BMM.灌注后7 d,观察EGFP+BMM在心脏的浸润、心脏炎性反应和纤维化.结果 EGFP+BMM回输后1、7 d,外周血中EGFP+细胞比例分别为[1st day:(4.6±0.5)%;7th day:(4.4±0.5)%],对照组外周血中无EGFP+细胞存在.回输第7天,受体小鼠脾脏中有GFP+细胞表达,心、肾、肝中无GFP+细胞表达.CD45.1+BMM回输后第7天,外周血中CD45.1+细胞比例为(4.3%±0.4)%,对照组中无CD45.1+细胞.与对照组相比,AngⅡ灌注促进血压升高、心脏中炎性细胞浸润和胶原沉积.AngⅡ灌注后,回输的EGFP+BMM能浸润到心脏,促进心脏中炎性反应和纤维化,但不影响血压升高.结论 该方法解决了BMM的过继性回输后体内的标记示踪问题,回输BMM可以在受体体内存活,而且证实巨噬细胞回输促进高血压心脏纤维化的发生.
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当归多糖对骨髓巨噬细胞的影响及其与造血调控的关系
目的研究当归多糖(APS)对骨髓巨噬细胞(BMMφ)生物活性的影响及其与造血调控的关系,从而阐明当归的活血机制.方法采用骨髓造血祖细胞和巨噬细胞体外培养,造血生长因子生物活性检测,免疫细胞化学,核酸探针原位杂交等技术.结果经APS诱导的BMMφ的培养上清液可提高髓系造血祖细胞的集落产率;经APS诱导后,BMMφ表达促红细胞生成素(EPO)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)、白细胞介素-6(IL-6)的蛋白水平有不同程度的提高;EPO mRNA和GM-CSF mRNA的表达水平和强度明显提高.结论APS可以直接和(或)间接地刺激造血诱导微环境中的BMMφ,从基因水平和蛋白水平上促进造血调控因子的合成和分泌,进而促进髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)、晚期红系祖细胞(CFU-E)、粒单系造血祖细胞(CFU-GM)的增殖分化.
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人参总皂甙对骨髓巨噬细胞的影响及与造血调控的关系
目的:研究人参总皂甙(TSPG)对骨髓巨噬细胞(BMMp)生物学活性的影响及其与造血调控关系.方法:采用骨髓造血祖细胞体外培养,造血生长因子生物活性检测,免疫细胞化学,核酸探针原位杂交等技术.结果:经TSPG诱导制备的BMMψ的培养上清可提高髓系造血祖细胞的集落产率;经TSPG诱导后,BMMqo表达EPO,IL-3,IL-6,GM-CSF的蛋白水平有不同程度提高;EPO mRNA,GM-CSF mRNA的表达水平和强度明显提高.结论:TSPG可以刺激造血诱导微环境中的巨噬细胞,从基因水平和蛋白水平2级层次上促进造血调控因子的合成和分泌,进而促进CFU-Mix,CFU-E,CFU-GM的增殖分化.
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裸鼹鼠骨髓巨噬细胞分离培养方法的建立及其功能的初步研究
目的 建立一种裸鼹鼠骨髓巨噬细胞分离培养的方法,并通过与小鼠骨髓巨噬细胞进行比较研究其吞噬功能.方法 分离裸鼹鼠骨髓细胞,在含60 ng/mL巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)完全培养基的诱导下,体外贴壁培养6～7 d,采用倒置显微镜观察细胞的生长状态.裸鼹鼠骨髓细胞诱导结束后,采用流式细胞术检测贴壁细胞表面抗原CD11b和F4/80的阳性率,鉴定骨髓巨噬细胞的纯度;采用异硫氰酸荧光素(FITC)-dextran根据荧光强度比较裸鼹鼠和ICR小鼠骨髓巨噬细胞的吞噬功能.结果 通过本方法获得的贴壁细胞具有典型的巨噬细胞的形态特征,且细胞表面抗原CD1 1b和F4/80的阳性率均高于80％;裸鼹鼠与ICR小鼠骨髓巨噬细胞的吞噬率分别为99.87％士0.13％和88.79％±0.90％.结论 本文建立的方法是一种简单实用的体外分离培养裸鼹鼠骨髓巨噬细胞的方法,且能够获得高纯度、高活性的巨噬细胞.裸鼹鼠骨髓巨噬细胞的吞噬功能高于小鼠骨髓巨噬细胞.
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雄激素可与骨髓巨噬细胞膜结合引起细胞外钙离子的内流
目的:探讨雄激素作用于骨髓巨噬细胞(BMMs)的途径,研究雄激素与BMMs结合后对其产生的功能性影响. 方法:体外诱导培养BMMs,提取细胞总RNA和蛋白,用RT-PCR和Western印迹方法观察BMMs中雄激素经典受体的表达情况.激光共聚焦显微镜观察T-BSA-FITC结合BMMs的情况.雄激素作用下,用Fura-2方法观察BMMs内钙离子浓度水平及特异性钙离子通道拮抗剂NiCl2对这种作用的影响,并用膜片钳方法观察BMMs膜表面离子电流的变化. 结果:RT-PCR和Western 印迹法都未检测到巨噬细胞中的雄激素受体,而阳性对照组(睾丸组织)的条带显著.用激光共聚焦显微镜观察到BSA-FITC能结合于巨噬细胞的细胞膜上.雄激素作用于BMMs后能迅速引起胞内游离钙离子浓度增加,这种作用可被NiCl2阻断.用膜片钳方法观察到雄激素作用于BMMs后引起胞外的阳离子内流,与Fura-2方法得出的结果一致. 结论:雄激素可能作用于BMMs膜表面的非经典受体,诱发细胞外钙离子快速内流,使细胞内钙离子浓度升高,从而对巨噬细胞产生功能性影响.
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免疫调节肽对T淋巴细胞转化和巨噬细胞分泌的影响
目的 研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对BALB/c鼠脾T淋巴细胞转化和骨髓巨噬细胞(BMMs)分泌的影响.方法 通过MTT法检测不同浓度PGPIPN对小鼠脾T淋巴细胞的转化作用,通过ELISA法检测在PGPIPN刺激下小鼠BMMs活化所释放的肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)的含量.结果 PGPIPN在体外与刀豆蛋白A(ConA)合用可明显促进ConA的丝裂原作用;体内实验表明各种剂量PGPIPN饲养的小鼠,其脾淋巴细胞在适当剂量的ConA的诱导下均具有明显的T淋巴细胞转化的能力;PGPIPN单独作用于BMMs不能刺激TNF-α和IL-6的释放,但与脂多糖(LPS)合用时则可以明显增加细胞因子的释放.结论 PGPIPN具有促进T淋巴细胞转化的作用,与LPS合用可促进BMMs的细胞因子释放的水平,提示PGPIPN可增加T淋巴细胞和巨噬细胞的免疫功能.
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骨髓巨噬细胞条件培养液对巨核系细胞体外生长的影响
骨髓基质细胞是骨髓造血微环境的重要组成部分,能持续产生IL-3,IL-6,SCF,FL,TGFβ等多种细胞因子调节造血[1,2].骨髓巨噬细胞是组成骨髓基质细胞的重要成分,研究发现体外培养的巨噬细胞单层不支持造血岛生成,但它能分泌SCF,IL-6, EPO等造血因子[3,4],关于巨噬细胞对巨核细胞生成的影响目前尚未见报道.本研究观察骨髓巨噬细胞条件培养液(M-CM)对体外培养条件下成熟巨核细胞和巨核系祖细胞生长的作用,以阐明骨髓巨噬细胞对巨核系细胞生长的影响.
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Endostatin对小鼠巨噬细胞极化的影响及机制研究
目的：观察endostatin对小鼠巨噬细胞极化的影响。方法：Endostatin转染RAW264．7细胞和小鼠骨髓巨噬细胞（ BM－DMs）；RT－PCR、ELISA、HE染色和MTT检测其对RAW264．7细胞的影响；流式细胞术、ELISA、real－time PCR、Western blot和萤光素酶报告基因检测巨噬细胞极化标记物和NF－κB转录活性。结果：表达质粒能使RAW264．7细胞和BMDMs高表达en－dostatin；HE染色和MTT发现endostatin使RAW264．7细胞的形态发生变化并抑制其增殖；流式细胞术、ELISA和real－time PCR发现，endostatin能使RAW264．7细胞和BMDMs高表达NOS2、IL－6和IL－12p40（M1型巨噬细胞标志物），同时使CD206、IL－10和Arg－1（M2型巨噬细胞标志物）表达下降或不变；萤光素酶报告基因发现endostatin使NF－κB的转录活性增加；Western blot发现p－IκBα、p－p65和p－Stat1表达增加，而p－Stat3表达下降。结论：Endostatin可能通过调节NF－κB通路使小鼠巨噬细胞向M1型发生极化。
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特发性血小板减少性紫癜的治疗进展
特发性血小板减少性紫癜是一种自身免疫性疾病,其发病机制:一是通过细胞介导的免疫调节形成并持续产生抗血小板的自身抗体;二是通过网状内皮系统加速破坏血小板,也有报道自身抗体作用于骨髓巨噬细胞,使血小板生成受到抑制.本病多见于女性,成人ITP为慢性疾病,用皮质激素和(或)脾切除等常规治疗完全缓解率可达60%～70%,如经足量皮质激素和(或)脾切除无效者称为难治性ITP(RIRP).本文重点介绍RITP的治疗进展.
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大鼠骨髓巨噬细胞的分离,纯化,培养以及鉴定
目的:为深入研究骨髓巨噬细胞的生物学功能,探索一种简便的骨髓巨噬细胞的分离,纯化和培养的方法.方法:分离获取大鼠骨髓细胞,在60%DMEM培养液,20%马血清,20%(v/v)L929培养上清的诱导条件下进行体外贴壁培养,6～7天时获得纯度较高的贴壁细胞.采用倒置显微镜下观察生活状态、Wright′s染色光镜观察、电子显微镜观察检测贴壁细胞形态学;酸性磷酸酶及非特异性酯酶染色测定细胞内酶的表达;吞噬鸡红细胞及墨汁颗粒实验检测其吞噬功能;免疫细胞化学染色观察细胞表面标志等生物学技术鉴定培养的贴壁细胞性质.结果:获得高纯度的巨噬细胞,且具有良好的吞噬功能,并且具备巨噬细胞的形态特征,特有的水解酶类及特有的表面标志-CD68.结论:本法是一种简易实用的体外分离、纯化、培养骨髓巨噬细胞的方法.
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昆布多糖对大鼠骨髓巨噬细胞生物活性的影响
目的 研究昆布多糖对大鼠骨髓巨噬细胞生物活性的影响.方法 制备并体外培养大鼠骨髓造血干/祖细胞、巨噬细胞;制备昆布多糖作用后的骨髓巨噬细胞条件培养液,测定培养液中造血生长因子促红细胞生成素(EPO)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)表达及活性;测定昆布多糖条件培养液作用后造血祖细胞的集落产率.结果 经昆布多糖诱导的骨髓巨噬细胞培养上清液可显著提高骨髓造血祖细胞的集落产率;经昆布多糖诱导后,骨髓巨噬细胞的EPO、GM-CSF和IL-3的表达增高.结论 昆布多糖可刺激骨髓巨噬细胞造血因子表达增高,从而促进髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)、红系祖细胞(CFU-E)、粒一单系造血祖细胞(CFU-GM)的增殖分化.
