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巨细胞病毒感染对造血功能影响的研究进展
人巨细胞病毒(HCMV)是人群中广泛存在的感染因子,随着免疫力低下人群(器官移植、恶性肿瘤、艾滋病等)的增加,近10年来,HCMV感染引起严重疾病的机制再次成为医学领域的研究热点,HCMV几乎可感染人体所有组织,整个造血系统尤其是造血祖细胞是HCMV的主要潜伏部位.通过抑制细胞免疫、诱导细胞凋亡,逃避吞噬细胞溶酶体的降解而早潜伏性感染,经过转移活化刺激、细胞分化和细胞因子等作用再激活,造血系统经常受累,其中骨髓抑制、血小板减少和免疫功能紊乱较常见.
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补肾解毒活血法对骨髓抑制小鼠造血功能的影响
目的 探讨补肾解毒活血法对骨髓抑制小鼠造血功能的影响.方法 取昆明小鼠60只,随机分成空白对照组、模型组和中药治疗组,每组各20只,模型组和中药治疗组腹腔注射环磷酰胺100 mg/(kg·d),连续3天;造模完成后次日起,中药治疗组给予补肾解毒活血中药浓煎液灌胃,0.36 g/(kg·d),空白对照组与模型组灌服等量生理盐水,连续10天.各组随机抽取10只,于造模前1天及造模后第1、3、5、7、10、14天检测小鼠外周血象;其余10只于造模后第11天,颈椎脱臼处死,检测骨髓造血祖细胞集落形成和骨髓有核细胞(Bone Marrow Nucleated Cell,BMNC)的情况.结果 外周血白细胞,模型组和中药治疗组均在造模后第1天降到低点,与空白对照组相比差异均有显著性意义(P＜0.01);模型组和中药治疗组均在第3天开始回升,中药治疗组在第5天恢复正常且保持稳定,而模型组在第7天出现异常性增高后又逐渐下降至正常.外周血血小板,模型组在模后第5天降到低然后回升至第10天恢复正常,而中药治疗组自第3天即开始回升,第7天时即与空白对照组持平,其低值明显高于模型组(P＜0.01).造模后第11天检测粒细胞-巨噬细胞集落生成单位(CFU-GM)、定向体外红系集落形成单位(CFU-E) 、红细胞爆裂型集落生成单位(BFU-E)和小鼠骨髓有核细胞数(BMNC),模型组和中药治疗组均低于空白对照组(P＜0.05),而中药治疗组高于模型组(P＜0.01).结论 补肾解毒活血法治疗骨髓抑制可通过增加骨髓造血祖细胞数量,从而促进环磷酰胺致骨髓抑制小鼠外周血白细胞、血小板的稳定恢复.
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补肾益髓生血法再障大鼠含药血清对大鼠造血祖细胞增殖分化及其机制的影响
目的：探讨补肾益髓生血法再障大鼠含药血清对大鼠骨髓造血祖细胞增殖分化及其机制的影响。方法：60Co-γ射线联合环磷酰胺建立再障大鼠模型，以正常对照组、模型组、康力龙组、益髓生血组、温肾生血组和滋肾生血组复方中药灌胃大鼠，制备其含药血清培养正常大鼠骨髓细胞，培养体系中含药血清比例为20豫，进行骨髓造血祖细胞集落形成单位（CFU）计数；收集集落细胞，RT-PCR检测红系GA原TA-1 mRNA及粒系PU.1 mRNA表达。结果：与正常对照组相比，模型组骨髓有核细胞显著减少（P<0.01），造血祖细胞红系集落形成单位（CFU-E）、红系爆式集落形成单位（BFU-E）和粒单核系造血祖细胞集落（CFU-GM）数目均明显降低（P<0.01），GATA-1、PU.1 mRNA表达显著降低（P<0.01）；与模型组相比，各个治疗组大鼠骨髓有核细胞升高，造血祖细胞CFU-E、BFU-E和CFU-GM数目显著增加（P<0.01）；滋肾生血组CFU-E、BFU-E明显优于益髓生血组（P约0.01）；滋肾生血组CFU-GM优于益髓生血组、温肾生血组。各治疗组GATA-1、PU.1 mRNA表达明显高于模型组（P<0.01）；滋肾生血组GATA-1 mRNA表达明显高于益髓生血组、温肾生血组（P<0.05）；滋肾生血组PU.1 mRNA表达高于益髓生血组、温肾生血组。结论：补肾益髓生血法可能通过增加GATA-1、PU.1 mRNA表达而促进骨髓造血祖细胞增殖分化，其中滋肾生血法优于益髓生血法和温肾生血法。
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精元康胶囊对骨髓抑制小鼠造血祖细胞增殖的影响
目的:研究精元康胶囊对骨髓抑制小鼠造血祖细胞增殖的影响的作用机制.方法:雄性昆明种小鼠70只,随机分为正常组、模型组、利可君片组、贞芪扶正胶囊组、精元康胶囊高、中、低剂量组等7组.用环磷酰胺(CTX)建立骨髓抑制的小鼠模型.前3d每日上午ip CTX 100 mg·kg-1(正常组注射等量生理盐水),下午ig不同药物.3d后,仅在下午 ig不同药物.应用体内扩散盒植入的方法进行培养3系造血祖细胞,在奥林巴斯光镜下计数3系造血祖细胞集落数.结果:小鼠在注射CTX造模后,3系集落数与正常组相比均有明显降低(P＜0.05)；精元康胶囊各剂量组均能提升骨髓抑制小鼠3系祖细胞(粒单系造血祖细胞CFU-GM、红系造血祖细胞CFU-E/BFU-E、巨核系造血祖细胞CFU-Meg)集落产率(P＜0.05),而且呈剂量依赖性,其中高剂量组对3系集落的提升作用明显(P＜0 05).对CFU-E产率的影响,利可君片组、精元康胶囊中剂量组、贞芪扶正胶囊组均与精元康胶囊低剂量组有明显差异(P＜0.05),但3组之间没有明显差异.对BFU-E的影响,精元康胶囊高剂量组优于其他药物组,其他各组间无明显差异；从CFU-GM的产率比较可知,利可君片组低于精元康胶囊高剂量组,但优于其他各组.精元康胶囊中剂量组和贞芪扶正胶囊组效果优于精元康胶囊低剂量组(P＜0 05),但两者之间差异不明显.各药物组对CFU-Meg产率的影响,以精元康高剂量组集落产率高,利可君片组次之,与其他各药物组有显著差异(P＜0.05).结论:精元康胶囊可增加3系造血祖细胞集落数,促进造血干细胞的增殖和分化.
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补肾解毒活血法与益气补血法对骨髓抑制小鼠造血功能影响的比较研究
目的:比较补肾解毒活血法与益气补血法对环磷酰胺(CTX)所致骨髓抑制小鼠造血功能的影响及其作用机制的不同特点.方法:昆明种小鼠80只,随机分为4组,正常对照组、模型组、补肾解毒活血组(20.55 g·kg -1·d-1)和益气补血组(17.47 g·kg-1·d-1).采用CTX 100 mg·kg-1 ip,连续3d,制成骨髓抑制小鼠模型.各组于造模完成后次日开始ig连续10d.分别于造模前及造模后1,3,5,7,10,14 d动态检测外周血象；于末次给药次日后进行骨髓有核细胞计数(BMNC)及粒-单核系集落形成单位( CFU-GM)、红系集落形成单位(CFU-E)、和红系爆式集落形成单位(BFU-E)集落计数.结果:补肾解毒活血方和益气补血方均可明显升高模型小鼠的WBC,PLT,BMNC,可促进造血祖细胞(HPC)增殖,CFU-GM,CFU-E,BFU-E集落数均显著高于模型组(P＜0.01)；补肾解毒活血方对血小板的恢复优于益气补血方.结论:补肾解毒活血方和益气补血方均可促进骨髓造血祖细胞集落生成,具有减轻和改善化疗后骨髓抑制的效果,而前者尤可减轻血小板减少、促进其恢复；其作用机制可能在骨髓细胞分化过程或造血微环境等途径上有不同.
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地龙活性蛋白对免疫造血功能的影响及其抗肿瘤作用
目的:探索地龙活性蛋白的免疫、造血功能和抗肿瘤作用.方法:给小鼠接种肿瘤细胞后随机分为灌服地龙活性蛋白给药组,同法同等剂量清水对照组,连续服用20d.观察动物的肿瘤发生率、存活率、生存期、生存动态曲线、抑瘤率、巨噬细胞吞噬功能、淋巴细胞转化、B细胞反应、造血祖细胞变化.结果:给药组动物的肿瘤发生率低于对照组(20.0%-33.3%),存活率高于对照组(20.0%-39.0%),生存期明显延长;生存动态曲线明显抬高;抑瘤率为27.0%-48.0%.并提高巨噬细胞吞噬功能,促进淋巴细胞转化,增强B细胞反应;对骨髓造血祖细胞的功能有明显促进.结论:提示地龙活性蛋白可用于肿瘤患者辅助治疗.
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鸡血藤醇提物及其活性成分儿茶素抗辐射作用及机制研究
研究鸡血藤乙醇提取物及其活性成分儿茶素的抗辐射作用,并探讨初步作用机制.采用6Gy60Coy射线一次性全身照射ICR小鼠造成亚急性辐射损伤模型,随机分为正常组、模型组、阳性对照组(氨磷汀,43.6 mg· kg-1,iv)、鸡血藤组(生药10,20,40 g·kg-)、儿茶素组(50,100,200 mg·kg-1),连续ig给药28 d,每日1次.检测给药前ld及给药1,3,7,14,21,28d后小鼠外周血WBC,RBC,PLT计数和HGB含量;观察给药7d后小鼠胸腺及脾脏指数的变化;比色法测定给药7d血清SOD,GSH-Px活性和MDA水平;采用半同体培养基测定给药7d后骨髓造血祖细胞集落形成能力;HE染色观察给药7,14 d股骨骨髓病理学改变;流式细胞术检测给药7d后骨髓细胞的凋亡,Western blot测定骨髓细胞中cleaved caspase-3和Bcl-2的表达,免疫组化法检测股骨骨髓中Bax的表达.结果表明,鸡血藤醇提物和儿茶素均可促进辐射小鼠外周血象的恢复,增加免疫器官胸腺和造血器官脾脏的脏器指数,提高血清抗氧化酶SOD和GSH-Px活性、降低MDA水平,促进骨髓造血祖细胞的增殖分化;增加骨髓腔内细胞数量、减轻立体支架结构损伤,改善造血微环境;抑制骨髓细胞凋亡,使凋亡相关蛋白Bcl-2的表达显著上调,cleaved caspase-3和Bax的表达显著下调.鸡血藤醇提物和儿茶素对亚急性辐射损伤小鼠有明显的保护作用,其机制与促造血、抗氧化、抗凋亡作用有关.
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三七总皂甙对免疫介导性再生障碍性贫血小鼠造血祖细胞的增殖作用
目的:探讨三七总皂甙(PNS)对免疫介导性再生障碍性贫血(再障)小鼠模型血细胞生成的作用.方法:采用免疫介导法进行再障造模,Balb/c小鼠经60Coγ射线亚致死量照射后,自尾静脉输入DBA/2小鼠的淋巴细胞,随机分成4组,即模型组、PNS治疗高、中和低剂量组(每只3.2、1.6、0.8mg/d),并设正常对照组.腹腔注射给药,模型组和正常对照组注射生理盐水.治疗12天后,做血白细胞计数、骨髓病理检查和粒系、红系造血祖细胞(CFU-GM、CFU-E)集落培养.结果:(1)PNS升高白细胞数,与模型组比较,PNS高、中和低剂量组的白细胞数提高率分别为(34.3±2.9)%,(29.2±1.7)%和(14.5±1.6)%(P＜0.01或P＜0.05).(2)改善骨髓抑制,骨髓病理检查模型组出现大片空白区,被大量的脂肪组织代替,而PNS治疗组造血组织结构较完整,造血细胞量丰富.(3)促进造血祖细胞增殖,高、中和低剂量PNS对CFU-GM集落提高率分别为(64.4±2.8)%、(67.3±2.4)%和(21.9±1.8)%(均P＜0.01);CFU-E集落的提高率分别为(31.9±3.6)%、(20.7±2.4)%和(12.8±2.6)%(P＜0.01或P＜0.05).结论:免疫介导性再障小鼠在骨髓抑制、造血功能低下时,PNS通过促进骨髓粒系、红系造血祖细胞的增殖,改善骨髓造血组织增生,从而促进血细胞的生成.
关键词： 三七总皂甙 再生障碍性贫血动物模型 造血祖细胞 增殖 -
人参多糖和当归多糖诱导人内皮细胞表达造血生长因子的实验研究
目的:研究和论证人参和当归促进血细胞生成及"补气生血"的现代生物学机理.方法:采用造血生长因子生物活性检测与免疫细胞化学等技术,研究经人参多糖(GPS)和当归多糖(APS)诱导的人脐静脉内皮细胞株(Ecv304)上清液(HEcCM)中造血生长因子的活性及粒单系集落刺激因子(GM-CSF)、IL-3和IL-6在内皮细胞的表达.结果:GPS和APS体外诱导制备的HEcCM能显著促进粒单系造血祖细胞(CFU-GM)和多向性造血祖细胞(CFU-Mix)的增殖;同时,GPS和APS能不同程度地促进内皮细胞GM-CSF、IL-3和IL-6蛋白表达.结论:GPS和APS能上调造血微环境中的内皮细胞分泌造血生长因子来调节血细胞的生成.
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人参二醇、三醇皂苷对人骨髓造血祖细胞增殖作用的研究
目的:探讨人参二醇皂苷(panaxadiol saponin,PDS)和三醇皂苷(panaxtrol saponin,PTS)对骨髓造血祖细胞增殖的作用.方法:从人参总皂苷进一步分离纯化出PDS和PTS,用体外造血祖细胞集落形成技术,观察PDS、PTS对小鼠骨髓红系祖细胞(CFU-E、BFU-E)、粒-单系祖细胞(CFU-GM)和多向祖细胞(CFU-Mix)的刺激增殖作用.结果:不同浓度的PDS(2.5～200μg/ml)可促进造血祖细胞增殖;CFU-E,BFU-E,CFU-GM和CFU-Mix集落产率均显著高于对照组(P＜0.05),提高率(%)分别达54.9±6.3、 48.8±5.1、27.6±4.2和48.9±3.9.而PTS在同样浓度时,CFU-E、BFU-E产率均显著低于对照组(P＜0.05);终浓度为200μg/ml时,CFU-E、BFU-E集落产率为零.在CFU-GM培养中,12.5μg/ml浓度的PTS使集落产率提高(29.7±2.2)%(P＜0.05);而100μg/ml和200μg/ml的PTS却出现对CFU-GM的抑制作用,抑制率分别为(48.6±3.9)%和100%.结论:PDS是总皂苷内促进造血的有效成分,而PTS对红系祖细胞具有抑制作用,对粒-单系祖细胞的作用呈剂量依赖关系.
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益髓生血颗粒对辐射损伤小鼠造血祖细胞增殖功能的影响
目的 研究益髓生血颗粒治疗地中海贫血的可能作用机制.方法 72只小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组和益髓生血颗粒高、中、低剂量组,每组1 2只.除正常对照组外,其余各组采用60Co-γ射线3.5Gy全身一次性照射,造成小鼠骨髓造血抑制模型.益髓生血颗粒高、中、低剂量组分别给予益髓生血颗粒10.0g/kg,5.0 g/kg,2.5 g/kg,灌胃给药后2d进行造模,之后再连续给药7d;阳性对照组造模后皮下注射重组人粒细胞刺激因子注射液30μg/kg,每天1次,连续7d;正常对照组、模型对照组给予等量蒸馏水灌胃.在造模后3、7d进行骨髓造血祖细胞集落培养,计数红系集落生成单位(CFU-E)、红系爆式集落生成单位(BFU-E)、混合集落生成单位(CFU-Mix)、粒单系集落生成单位(CFU-GM)、巨核系集落生成单位(CFU-Meg),造模后7d进行CD34+细胞检测. 结果 与正常对照组比较,模型对照组于造模后3、7d各集落生产单位明显降低(P＜0.01).与模型对照组比较,阳性对照组和益髓生血各剂量组在3、7d均促进CFU-GM、CFU-E增殖(P＜0.05或P＜0.01);益髓生血颗粒高、中剂量组在3d时提高CFU-Meg方面优于阳性对照组和益髓生血颗粒低剂量组(P＜0.05);益髓生血颗粒高、中剂量组7d时在提高CFU-E方面优于阳性对照组和益髓生血颗粒低剂量组(P＜0.05).模型对照组CD34+细胞数较正常对照组明显下降(P＜0.01),阳性对照组和益髓生血颗粒低剂量组CD34+细胞数较模型对照组显著上升(P＜0.05).结论 益髓生血颗粒能促进小鼠骨髓造血祖细胞增殖,促进骨髓有效造血,并且以高、中剂量作用显著.
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C-KIT基因突变对血液祖细胞免疫表型及增殖的影响
目的 探讨不同C-KIT突变影响核心结合因子相关性急性髓系白血病(CBF-AML)发生的分子机制.方法 用流式细胞术鉴定稳定转染KIT野生型和突变型的EML细胞表面KIT的表达,比较各细胞系的免疫表型;WST-1法检测各细胞系在IL-3或Epo存在下的增殖状况,Western blot法检测Epo受体的表达.结果 外源人KIT在各类稳定转染的EML细胞系表面表达,Del417-419 insY和D816V C-KIT突变均引起B220+细胞亚群减少以及Sca-1+细胞亚群增多,但后者作用更显著,二者未影响CD34、Gr-1、Mac-1和Ter119阳性细胞百分率;De1417-419 insY突变体可以和IL-3、Epo协同促进细胞增殖,而D816V突变体只与IL-3有协同作用,经检测EML-D816V细胞不表达Epo受体.结论 不同C-KIT突变可以不同程度改变造血祖细胞免疫表型,协同其他造血因子促进细胞增殖,这提示其与CBF-AML的发生和临床预后的相关性.
关键词： C-KIT基因突变 核心结合因子相关性急性髓系白血病 造血祖细胞 免疫表型 增殖 -
人参皂甙诱导骨髓巨噬细胞表达造血生长因子的研究
目的探讨人参皂甙对巨噬细胞表达造血生长因子的影响. 方法采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学与核酸原位杂交等技术,研究人参总皂甙(TSPG)对大鼠骨髓巨噬细胞(rBMMφ)和人单核细胞株(THP-1)表达造血生长因子的影响. 结果经TSPG(10～50mg/L)诱导制备的rBMMφ和THP-1的培养上清液可显著提高大鼠和人的CFU-Mix、CFU-GM和CFU-E的集落产率;经TSPG诱导后rBMMφ和THP-1表达EPO、GM-CSF、IL-3、IL-6的蛋白水平有不同程度提高;经TSPG诱导后rBMMφ和THP-1表达EPO、GM-CSF和IL-3的mRNA水平和强度显著提高. 结论 TSPG可通过直接和/或间接途径刺激造血诱导微环境的巨噬细胞,从蛋白水平和基因转录水平两级层次上促进造血调控因子(如EPO、GM-CSF、IL-3和IL-6等)的合成和分泌,进而促进造血干/祖细胞的增殖分化,这或许是人参调节血细胞生成的可能途径之一.
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小鼠下颌下腺条件培养上清对造血祖细胞增殖的影响
目的研究下颌下腺与血细胞发生的关系,探讨下颌下腺对造血功能的调节作用. 方法采用造血祖细胞体外培养及造血生长因子(HGF)活性检测法. 结果正常雄性和雌性小鼠下颌下腺组织培养上清(SGCM)对粒单系祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(BFU-E、CFU-E)和巨核系祖细胞(CFU-Meg)的增殖有明显促进作用;正常雄性小鼠SGCM对CFU-E和CFU-Meg的刺激活性明显高于正常雌性小鼠SGCM.贫血模型雌、雄小鼠的SGCM能提高BFU-E、CFU-E的产率;雌性贫血模型小鼠的SGCM亦能提高CFU-Meg的产率.IL-3能促进SGCM对BFU-E、CFU-E的增殖. 结论小鼠下颌下腺可能通过分泌造血生长因子样物质促进造血祖细胞增生,从而发挥造血调控功能.
关键词： 下颌下腺组织培养上清 造血祖细胞 造血生长因子 血细胞发生 小鼠 -
Notch信号在造血祖细胞扩增中作用的研究进展
造血祖细胞扩增具有十分重要的临床价值,传统的方法扩增往往导致造血祖细胞的分化.Notch受体和配体在造血系统中广泛存在,活化的Notch信号可抑制造血祖细胞的分化而促进其扩增,提示可以通过Notch信号途径实现对造血祖细胞的扩增.本文就Notch信号通路、Notch信号与造血祖细胞维持、Notch信号与造血祖细胞扩增,Notch信号维持造血祖细胞未分化状况的分子机制,进行了综述.
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骨髓增生异常综合征患者源成骨细胞表达多种细胞因子并体外维持造血祖细胞存活
为了解骨髓增生异常综合征(MDS)患者成骨细胞的生物学特性,并探讨其对体外造血的支持能力,利用骨髓间充质干细胞多向分化潜能将其诱导分化为成骨细胞,在体外和造血细胞构建二维培养体系,研究其体外支持造血祖细胞生存的作用;同时采用RT-PCR的方法在mRNA水平上分析由骨髓间充质干细胞诱导分化的成骨细胞细胞因子的表达并与人成骨细胞系hFOB1.19比较.结果发现,来源于MDS患者的成骨细胞在无外源性细胞因子的条件下能够短期维持GM-CFC造血祖细胞的存活.经过RT-PCR证实,人成骨细胞系hFOB1.19表达SCF、IL-6、SDF-1α、G-CSF、GM-CSF等细胞因子,来源于MDS患者和正常人的成骨细胞也能表达上述细胞因子,但却不表达GM-CSF.结论:与正常人相比,MDS患者源的成骨细胞同样能够维持GM-CFC的存活,这可能和成骨细胞表达多种重要的造血相关的细胞因子有关.
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磁力搅拌悬浮培养大规模扩增脐血造血祖细胞
为了利用磁力搅拌悬浮培养装置大规模体外扩增脐血造血祖细胞,从脐血分离单个核细胞,以无血清培养基stemspan添加干细胞因子、FLT-3配基及血小板生成素为培养体系进行培养.先研究磁场(25和50 mT)对静态扩增培养的造血祖细胞生长和集落形成能力的影响,再研究磁力搅拌悬浮大规模培养对造血细胞总数扩增、造血集落形成和表面分子标志表达变化.结果表明,在0,25和50 mT磁场组和磁转子组,细胞总数扩增倍数和造血集落形成数在各组间均无明显区别(p＞0.05).经过7天的扩增培养,磁力搅拌悬浮大规模培养细胞总数扩增倍数为2.8 S0.45,高于静态培养细胞总数扩增倍数(2.1±0.48)(p＜0.01);磁力搅拌悬浮培养组形成的红系集落数(1983.5.±582.6)、粒-巨噬细胞集落数(186.4±62.7)明显高于静态培养形成的相应的造血集落数(分别为1396.2±425.7和136.5±40.8)(p均＜0.05).磁力搅拌悬浮扩增后造血干细胞(CD34+、CD34+/CD38-或CD133+)比例分别为(0.9.±0.34)%、(0.7±0.21)%和(1.1±0.35)%,低于静态培养的干细胞比例[分别为(1.4±0.35)%、(1.2±0.34)%和(1.6±0.68%)](p均＜0.05);但是,归巢相关分子CD184和CD62L高于静态扩增培养.结论:磁力搅拌悬浮装置可能有利于脐血造血祖细胞规模扩增,本研究结果还有待于动物实验及临床移植试验进一步验证.
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造血干细胞研究发展历史引发的思考
本文简要地回顾了世界干细胞研究数十年的历史经过.它的原始研究是为了解决二次大战末在日本两次核爆炸中所见的致死性造血损伤,这也说明世界干细胞研究为什么从造血干细胞开始,而且人们长期不关心非造血干细胞在体内是否存在.20世纪50-60年代一些聪明设计的动物实验有力地暗示造血干细胞在体内的存在,动物研究又证实正常骨髓可以修复已严重破坏的骨髓,于是人们开始相信骨髓移植就是造血干细胞移植.培养造血祖细胞集落的陆续发现证明造血祖细胞的存在.直至上世纪90年代,有了NOD-SCID或羊胎等体内检测造血干细胞的可靠方法之后,才划清了造血干细胞和祖细胞的界限.本文列举了许多实例,说明实验血液学和临床血液学发展的互动性,以及其它生物学和技术的进步,尤其是免疫学和分子生物学的进步,极大地推动了干细胞基础研究和临床干细胞移植的发展.比如HLA、单克隆抗体、DNA分子克隆、基因重组工程技术以及近年发展的生物信息学、基因组学、蛋白质组学、干涉RNA、干细胞工程技术等,使干细胞基础和临床研究进入了21世纪的新时代.免疫治疗、间充质干细胞和干细胞工程的发展,结合用于造血干细胞移植,使细胞治疗多元化成为本世纪发展的新动向.本文着重地介绍了干细胞研究的每一步发展都同时出现认识上的误区,以及给干细胞研究带来了挫折.一个误区的澄清常常历时20甚至40多年之久.例如造血干细胞与祖细胞的区分;造血干细胞体外扩增研究在世界各国注定的失败;移植脐血缺乏的是造血干细胞,还是祖细胞;多数白血病是否起病于造血干细胞;以造血干细胞是否是基因治疗中佳的外源基因载体;又如干细胞工程能否克隆实质脏器等等.在成体组织内存在成体干细胞是21世纪划时代的伟大发现,却也带来了误区和风波.本文重点分析了在成体干细胞发现的同时为什么会出现横向分化、去分化等缺乏科学根据的假说,以及部分同行视线混乱的根源与教训.文章指出误区的发生是由于缺乏实践和认识的片面性造成的,科学实践是检验和纠正认识片面性的唯一途径.整个干细胞研究的发展历史正是一个不断纠正认识误区的过程,也是必由之路.
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成体稳态造血的维持——造血干细胞还是造血祖细胞?
造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC) 一直被认为处于造血级联的顶端,通过维持自身的自我更新并逐级向下分化成熟,为机体源源不断地提供各种成熟的血细胞.基于HSC移植后分化成熟的变化规律为主要技术方法的研究表明,HSC维持着整个造血系统的稳定,并且在分化发育过程中存在多种不同的模型.然而,从根本上来讲这些研究结果反映的是HSC应对外界压力的应激反应,与正常稳态情况下HSC对于整个造血系统的维持作用并不相同.而新的一系列利用不同的实验模型对造血祖细胞(hematopoietic progenitor cell,HPC)在造血稳态维持中的作用进行了研究,发现HPC才是造血稳态维持的“主力军”.本文将对目前存在争议的关于HSC和HPC在稳态造血系统维持中作用的新研究进展作一评述.
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1,4-苯醌对IFN-γ不同基因型髓系祖细胞集落生长影响的研究
本研究旨在初步探讨IFN-γ不同基因型(AA,AT和TT)髓系祖细胞在1,4-苯醌(1,4-BQ)作用下造血损伤的影响是否存在差异.采用PCR对36例足月分娩脐带血(cord blood,CB)标本干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)基因+874位点单核苷酸多态性(SNP)进行检测筛选,依据筛选结果将标本分为3组(AA组,AT组,TT组),使用完全甲基纤维素培养基(METHOCULTTM GF H4434)培养单个核细胞(mononuclear cells,MNC),用不同浓度的1,4-苯醌(1,4-Benzoquinone,1,4-BQ)处理,进行集落形成单位(colony forming unit,CFU)检测.结果表明,收集的36份CB中IFN-γ+874AA,AT和TT基因型分布频率分别为5.56%,88.89%,5.56%.在不同浓度1,4-BQ(0,5,10,20μmol/L)作用下IFN-γ+874A/T不同基因型(AA、AT、TT)组内比较集落生长能力,结果显示差异有统计学意义,P值分别为:PAA=O.033,PAT=0.009,PTT=0.001,均小于0.05.1,4-BQ浓度≥5 μmol/L时,表现出细胞毒性,而且随着1,4-BQ浓度的增大,集落计数就越少,且形态也越小.同一浓度1,4-BQ作用下,IFN-γ+874A/T不同基因型(AA、AT、TT)各组集落生长能力未表现出明显差异.AT组内标本3和TT组内标本2较其它标本集落计数明显少.结论:1,4-BQ对IFN-γ+874AA、AT、TT不同基因型髓系祖细胞生长均有毒性作用且呈浓度依赖性,但在同一浓度1,4-BQ作用下,IFN-γ+874A/T不同基因型(AA、AT、TT)髓系祖细胞集落生长情况未表现出明显的不同.
