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冬凌草甲素抑制血管生成活性及作用机制
目的:研究冬凌草甲素抑制血管生成的活性及其作用机制.方法:采用体外和体内两种模式,研究冬凌草甲素在血管生成方面的抑制效应.通过体外培养心脏微血管内皮细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的活力,酶联免疫吸附(ELISA)法测定血管内皮生长因子(VEGF)的含量;体内选择斑马鱼(Fli1-GFP)生物模式,观察冬凌草甲素对胚胎期血管生成和成鱼期血管损伤后再生的影响,并采用相对荧光定量PCR法检测VEGF通路上主要相关基因VEGFA,血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)2,VEGFR3的表达量.结果:冬凌草甲素具有抑制血管生成活性的作用,可抑制体外内皮细胞活力,其半抑制浓度(IC50)8.04 mg·L-1,可使细胞血清中VEGF的表达量明显下降;可抑制斑马鱼胚胎期体节间血管生成,且抑制成鱼期血管损伤后再生,可能通过降低体内VEGFA,VEGFR2,VEGFR3基因的表达量从而抑制血管生成.结论:冬凌草甲素可有效抑制血管生成,为其抗肿瘤血管生成治疗提供了重要的科学依据.
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回阳生肌散对糖尿病皮肤溃疡大鼠创面血管生成相关因子的影响
目的 探讨回阳生肌散促进糖尿病皮肤溃疡大鼠创面愈合的可能作用机制.方法 56只SD大鼠随机分为对照组8只、模型组12只、全方组12只、温阳组12只和活血组12只.除对照组外其余各组采用“腹腔注射链脲佐菌素(STZ)-激素干预-皮肤缺损-塑料环埋置”方法制备糖尿病皮肤溃疡动物模型.对照组和模型组给予黄凡士林纱条,全方组给予回阳生肌散全方药纱条,将回阳生肌散方拆方为温阳益气方和活血生肌方,温阳组给予温阳益气方药纱条,活血组给予活血生肌方药纱条.各组每天给药1次,15天后检测创面新生肉芽组织中血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体-2(VEGFR-2)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达水平.结果 模型组肉芽组织中VEGF、VEGFR-2、eNOS表达水平均明显低于对照组(P＜0.01),全方组VEGF表达水平明显高于模型组和活血组(P＜0.01),全方组VEGFR-2、eNOS表达水平明显高于模型组、温阳组和活血组(P＜0.01).结论 回阳生肌散可能通过提高创面肉芽组织中VEGF、VEGFR-2、eNOS的表达水平,促进创面愈合.
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肺动脉高压iPSC-ECs的内皮间质转化和成管缺陷机制
目的 利用遗传性肺动脉高压(HPAH)患者和对照志愿者(CON)来源的诱导多能干细胞,研究其定向分化得到的内皮细胞(iPSC-ECs)表型及功能的差异,阐明骨形成蛋白Ⅱ型受体(BMPRII)突变引起的PAH特征性内皮紊乱病理机制.方法 将CON志愿者和HPAH患者的肺动脉平滑肌细胞诱导得到的 iPSCs分化为Ecs,通过荧光定量PCR分析iPSC-Ecs分化过程中多能性和内皮相关基因的 mRNA表达水平;免疫荧光鉴定iPSC-Ecs表面特征分子;检测参与调控内皮-间充质转分化(EndoMT)过程的相关基因α-SMA、HMGA1、Slug和Snail1表达;比较HPAH和CON来源iPSC-Ecs成管功能,检测血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)的mRNA和蛋白表达.结果 HPAH与CON多能性基因表达趋势基本一致,而Ecs相关基因的表达变化存在差异;HPAH患者来源的iPSC-Ecs的α-SMA和EndoMT过程的相关基因HMGA1、Slug和Snail1表达均高于CON Ecs(P<0.05);与CON相比,HPAH患者来源的iPSC-Ecs成管功能存在缺陷,VEGFR2的mRNA和蛋白水平均较低,VEGF165可使其得到恢复.结论 HPAH来源的iPSC-Ecs存在En-doMT现象和成管功能缺陷,HMGA1、Snail家族转录因子和VEGF通路可能参与对PAH血管重构的调控.
关键词： 肺动脉高压 内皮细胞 内皮间质转化 血管内皮细胞生长因子受体2 -
重组减毒沙门氏菌疫苗SL3261-pcDNA3.1+/flk-1(n1-4)抗小鼠大肠癌的生长
目的:研究VEGFR2胞外1-4片段(flk-1(n1-4))抑制肿瘤生长效应.方法:构建DNA疫苗SL3261-pcDNA3.1+/flk1(n1-4),经ig饲服BALB/c小鼠,随机分为3组,疫苗组,载体对照组和NaHCO3对照组.对小鼠进行基因免疫.ELISA检测小鼠血清中VEGF水平及特异性抗flk-1(n1-4)-IgG抗体.流式细胞仪分析免疫小鼠淋巴细胞亚群.DNA疫苗免疫结肠癌荷瘤BALB/c小鼠,测量免疫后荷瘤小鼠肿瘤大小,检测肿瘤微血管密度.结果:免疫小鼠血清中VEGF水平明显降低,并产生高水平的抗flk-1(n1-4)-IgG抗体.免疫后荷瘤小鼠CD4+T、CD8+T值维持较高水平,小鼠结肠腺癌皮下肿瘤生长与载体和NaHCO3对照组相比明显受抑制,疫苗组小鼠肿瘤质量、体积、平均微血管密度与载体和NaHCO3对照组相比明显降低(3.64±1.34 g vs 8.40±0.66 g,8.26±0.44 g;2.62 ±0.54 mm3 vs 6.01±0.14 mm3,5.92±0.25 mm3,2.06±1.02 vs 6.93±2.34,7.34±4.12;P＜0.05).疫苗组小鼠中位生存期较两对照组明显延长.结论:flk-1(n1-4)能够抑制肿瘤血管内皮细胞生长,达到抗大肠癌生长作用.
关键词： 血管内皮细胞生长因子受体2 胞外片段 抗血管生成 结肠癌 -
VEGFR2siRNA腺病毒载体的构建及其对人结肠癌细胞系的影响
目的:构建血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)siRNA腺病毒载体,并研究其对结肠癌细胞系LOVOVEGFR2表达的影响.方法:首先构建含有VEGFR2siRNA的鼠U6载体(mU6-VEGFR2siRNA);利用HindⅢ与Xba Ⅰ双酶切将鼠U6载体启动子和VEGFR2siRNA克隆入无启动子穿梭载体promoterless pShuttle vector,得到pShuttlemU6pro-VEGFR2siRNA;将pShuttle-mU6pro-VEGFR2siRNA与腺病毒骨架质粒(pAdeasy-1)在BJ5183细菌中进行同源重组,得到pAdeasy-mU6pro-VEGFR2siRNA;利用得到的重组腺病毒感染人结肠癌LOVO细胞系,观察VEGFR2 siRNA对结肠癌细胞VEGFR2表达的影响.采用West-blot检测感染前后VEGFR2蛋白表达水平的变化.结果:成功构建血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)siRNA腺病毒载体,该载体显著抑制LOVO细胞中VEGFR2的蛋白表达水平(P＜0.01).结论:构建的Adeasy-mU6pro-VEGFR2siRNA腺病毒能有效地抑制LOVO细胞中VEGFR2表达,从而为肿瘤的基因治疗打下基础,也为肿瘤血管抑制治疗提供了新思路.
关键词： 腺病毒载体 血管内皮细胞生长因子受体2 LoVo细胞系 结肠癌 -
聚乙烯亚胺介导siRNA分子体内外基因沉默VEGFR2表达
应用阳离子聚合物聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)包裹靶向小鼠VEGFR2基因的siRNA分子,以研究其体外基因沉默作用及不同给药途径的肿瘤生长抑制作用.采用共聚焦显微镜观察荧光染料CY3标记的siRNA分子的细胞内定位,RT-PCR和Western blotting检测VEGFR2 mRNA和蛋白表达水平基因沉默效果,建立裸鼠皮下肿瘤模型比较经瘤内和尾静脉给予siVEGFR2/PEI抑制肿瘤生长的作用.共聚焦显微镜观察证实PEI能成功转染siRNA分子进入细胞质,siVEGFR2/PEI转染的MS1细胞中VEGFR2 mRNA和蛋白表达水平明显下降,沉默效率分别为28.2%和23.6%.瘤内给与siVEGFR2/PEI组裸鼠肿瘤体积[(189.429±17.562)mm~3]明显小于空白组[(365.844±20.713)mm~3]和PEI静脉给药组[(315.507±20.491)mm3~].结果表明,PEI能有效介导siRNA分子转染进入细胞质并能特异性沉默靶基因的表达.未经组织靶向性修饰的PEI不具有肿瘤靶向作用,瘤内注射的抗肿瘤效应优于静脉给药途径,这为进一步研究PEI介导的siRNA分子体内基因沉默效应的机制和优化该给药系统临床治疗肿瘤应用奠定了基础.
关键词： 聚乙烯亚胺 siRNA 血管内皮细胞生长因子受体2 基因沉默 -
肺纤方提取物对肺间质纤维化大鼠肺微血管VEGF、VEGFR2、PAI-1、VCAM-1mRNA表达的影响
目的 通过观察肺纤方提取物干预体外培养肺微血管的血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR 2)、纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)、 血管细胞黏附因子1(VCAM-1)基因表达的影响,探讨肺纤方干预肺纤维化微血管生成的机制.方法 从肺纤维化模型大鼠分离培养肺微血管内皮细胞,将其等量分为模型组,氯沙坦组,泼尼松组,肺纤方大、中、小剂量组.模型组加入含20%胎牛血清的DMEM培养基,氯沙坦组加入含20%胎牛血清及10 mg/L 氯沙坦的DMEM培养基,泼尼松组加入含20%胎牛血清及5 mg/L 泼尼松的DMEM培养基,肺纤方大、中、小剂量组分别加入含20%胎牛血清及100、60、20 mg/L肺纤方提取物的DMEM培养基,分别作用24 h.双链嵌合荧光染料SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR法检测VEGF、VEGFR 2、PAI-1与 VCAM-1的mRNA转录水平.结果 与模型组比较,肺纤方大、中、小剂量组VEGF基因表达水平均显著降低,而VEGFR2无显著差异;肺纤方大剂量组PAI-1 mRNA表达显著降低;肺纤方大、中剂量组VCAM-1 mRNA表达显著降低(P<0.05).结论 肺纤方可通过抑制肺微血管VEGF、PAI-1及 VCAM-1的表达改善血凝及纤溶,抑制血管形成而发挥抗肺纤维化作用.
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当归补血汤在流体剪切应力环境中对内皮细胞功能的影响
目的 观察当归补血汤在流体剪切应力(FSS)环境中对人内皮细胞功能的影响.方法 将细胞置于平行平板流动小室,加载稳定层流FSS(0,0.12,1.2,2.4 Pa)6 h后,将不同FSS环境中的细胞随机分为5组:对照组加入无血清培养液灌流;辛伐他汀组加入含0.1μmol/L辛伐他汀培养液灌流;3个中药组分别加入含3 g/L的当归补血汤(当归、黄芪比为1:1、1:3、1:5)培养液灌流.以上各组经FSS加载12 h后,收集细胞及灌流液,检测细胞增殖力、一氧化氮(NO)含量,细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)mRNA及蛋白的表达.结果对照组FSS为1.2、2.4 Pa时,内皮细胞表达eNOS、VEGFR2的水平较其在0、0.12 Pa时升高(P<0.05);与对照组相比,当归补血汤在FSS为0、0.12 Pa时能上调细胞eNOS、VEGFR2表达并增强其增殖和分泌NO功能(P<0.05).且当归补血汤(当归、黄芪比为1:3、1:5)在FSS为1.2、2.4 Pa时可上调细胞eNOS、VEGFR2表达并增强其增殖和分泌NO功能(P<0.05).结论 FSS环境是影响当归补血汤对内皮细胞作用效果的重要因素之一.
关键词： 当归补血汤 剪切应力 内皮细胞 内皮型一氧化氮合酶 血管内皮细胞生长因子受体2 -
直肠癌新辅助化疗前后血清VEGF与VEGFR-2的变化及临床意义
目的 探讨直肠癌患者新辅助化疗前后血清血管内皮生长因子(VEGF)及血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2)水平的变化及临床意义.方法 应用ELISA法检测45例直肠癌患者(化疗组)新辅助化疗前后血清VEGF与VEGFR-2的表达水平,并与45例正常健康人(对照组)作比较.结果 化疗组新辅助化疗前血清VEGF、VEGFR-2水平均明显高于对照组(P均＜0.01).新辅助化疗8周后,完全缓解及部分缓解组VEGF、VEGFR-2表达水平均较化疗前明显降低(P均＜0.05),降低程度明显高于稳定组(P均＜0.01);稳定组化疗后VEGFR、VEGF-2较化疗前显著降低(P均＜0.05);进展组化疗后VEGF、VEGFR-2水平均较化疗前显著升高(P均＜0.05).化疗前VEGFR水平与VEGF-2表达呈正相关关系(P＜0.01).结论 直肠癌患者血清中VEGFR、VEGF-2均高表达.测定直肠癌患者新辅助化疗前后血清VEGFR、VEGF-2水平的变化有助于临床判断化疗效果及肿瘤进程.
关键词： 直肠癌 新辅助化疗 血清血管内皮生长因子 血管内皮细胞生长因子受体2 -
血管内皮细胞生长因子受体2基因短发夹RNA介导基因沉默对白血病的抑制
背景:血管内皮细胞生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)在血管内皮细胞生长因子的信号转导中有主导效应,并在某些疾病包括白血病的病理性血管生成中起关键作用.另外,白血病细胞分泌的血管内皮细胞生长因子还诱导自身表达VEGFR2,从而维持自身存活、增殖.目的:观察表达VEGFR2短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)的慢病毒载体Lenti6/shVEGFR2在全身性NOD/SCID白血病模型鼠中的作用.设计:随机、平行对照、开放性实验.单位:中山大学附属第二医院儿科,中山大学生物工程研究中心.材料:实验于2004-05/2006-01在中山大学附属第二医院医学研究中心、中山大学生物工程研究中心完成.分别以HL60,EA·hy926细胞株作为实验用白血病细胞、人血管内皮细胞的来源.Block-iT Lentiviral RNAi Expression System(Invitrogen);human VEGFR2 Mcb(PE标记,R&D).CD31组化试剂盒(武汉博士德公司),CD33-PE流式细胞荧光标记抗体(BD公司).方法:①制备并筛选VEGFR2基因的有效siRNA,并据此设计shRNA寡核苷酸链.②构建pU6/shVEGFR2入门克隆.瞬时转染细胞,构建表达克隆Lenti6/shVEGFR2,与ViraPowerTM Packaging Mix共转染到293FTTM细胞中,产生携带表达克隆的慢病毒载体.③pU6/shVEGFR2入门克隆转染和Lenti6/shVEGFR2转导HL60细胞,MTT法测定HL60细胞抑制率.④建立HL60白血病模型后观察注入人血管内皮细胞后小鼠骨髓微血管的分布.⑤将NOD/SCID小鼠20只随机分为4组,每组5只:白血病模型鼠组,白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒组,白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒和内皮细胞组及白血病模型鼠静脉注射内皮细胞组.检测各组小鼠的骨髓细胞CD33表达变化、骨髓微血管密度变化及外周血细胞涂片、肝、脾的肿瘤浸润情况,以了解Lenti6/shVEGFR2重组慢病毒对小鼠白血病的作用.主要观察指标:①VEGFR2 siRNA鉴定结果.②pU6/shVEGFR2入门克隆转染HL60后对其VEGFR2表达的影响.③pU6/shVEGFR2入门克隆转染、Lenti6/shVEGFR2表达克隆转导HL60细胞后细胞抑制率比较.④慢病毒介导的shRNA对HL60模型鼠VEGFNEGFR2旁分泌和自分泌的影响.结果:①pU6/shVEGFR2入门克隆转染HL60后对其VEGFR2表达的影响:VEGFR2 siRNAc抑制HL60细胞效率高,利用其构建的pU6/shVEGFR2入门克隆并转染HL60,抑制细胞效率达84.9%;显著抑制HL60细胞VEGFR2基因mRNA和蛋白的表达.②pU6/shVEGFR2入门克隆转染、Lenti6/shVEGFR2表达克隆转导HL60细胞后细胞抑制率比较:pU6/shVEGFR2入门克隆转染、Lenti6/shVEGFR2表达克隆转导HL60细胞后48 h细胞抑制率相近,48 h后入门克隆转染组细胞抑制率明显下降(P＜0.01);而表达克隆转导组细胞抑制率变化缓慢,在96 h达高峰,120 h稍降,变化无显著差异.③慢病毒介导的shRNA对HL60模型鼠VEGF/VEGFR2旁分泌和自分泌的影响:白血病模型组、白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒组、白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒和内皮细胞组小鼠骨髓流式细胞仪HL60检测结果分别为(25.8%±4.9)%,(14.3%±5.1)%,(8.4±2.6)%,三组比较,差异有显著性意义(P＜0.05);白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒和内皮细胞组微血管密度明显小于白血病模型鼠静脉注射内皮细胞组.白血病模型鼠静脉注射重组慢病毒和内皮细胞组与其他组相比HL60细胞数低.结论:①pLenti6/shVEGFR2表达克隆转导HL60细胞后持续高水平抑制细胞.重组慢病毒Lenti6/shVEGFR2具有抑制白血病小鼠骨髓血管生成的作用.②VEGFR2 siRNA可阻断白血病HL60细胞VEGF/VEGFR2自分泌的内环路,在体外、动物体内均得到验证.③VEGF/VEGFR2自分泌链和旁分泌链的联合阻断加强了抗白血病效果.
关键词： 血管内皮细胞生长因子受体2 shRNA 慢病毒 白血病 基因治疗 -
携抗VEGFR2抗体PLGA靶向超声造影剂的制备及体外寻靶实验
目的 制备携抗血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)抗体聚乳酸羟基乙酸(PLGA)靶向超声造影剂,并考察其体外寻靶能力与超声显像性能.方法 通过改进的双乳化溶剂挥发法制备高分子材料PLGA纳米粒子,利用扫描电子显微镜对其一般特性进行表征,并进一步用碳二亚胺法将造影剂与抗VEGFR2抗体耦联制备靶向超声造影剂,使用激光共聚焦扫描显微镜对其体外寻靶能力进行初步评估,使用高频超声诊断仪观察体外显像效果.结果 PLGA超声造影剂粒子呈规则球形、大小均一、分散性好;在体外寻靶实验中,携抗VEGFR2抗体PLGA靶向造影剂能够较多并牢固的聚集到血管肉瘤内皮细胞(SVR)表面;体外超声成像实验中,携抗VEGFR2抗体PLGA靶向超声造影剂呈点状细密高回声,后方回声无衰减.结论 本研究成功制备携抗VEGFR2抗体PLGA靶向超声造影剂,能够在体外与VEGFR2高表达的血管肉瘤内皮细胞特异性靶向结合,且体外超声显像效果良好.
关键词： 聚乳酸羟基乙酸 纳米粒子 靶向超声造影剂 血管内皮细胞生长因子受体2 -
VEGFA/VEGFR2作用于血管内皮细胞途径及其抑制剂研究进展
肿瘤血管生成受多种因素的影响,而且贯穿恶性肿瘤发生的全过程.血管内皮细胞生长因子受体2(Vascular endothelial growth factor receptor 2;VEGFR2)活化诱导的信号作用于血管内皮细胞是血管生成的主要控制者.通过查阅国外相关文献数据库本文归纳总结了VEGFR2信号作用于血管内皮细胞的途径主要包括影响内皮细胞的增殖、存活、迁移及血管通透性4种形式及其相应抑制剂,这些抑制剂已在美国食品药品监督管理局批准上市或处在临床研究中,如阿柏西普(VEGF-Trap)、贝伐单抗(Bevacizumab)、阿昔替尼(AG-013736)、瓦他拉尼碱(vatalanib)、卡博替尼(Cabozantinib)、Foretinib,XL64和布立尼布(Brivanib).通过研究VEGFR2信号作用于血管内皮细胞的途径,有望对进一步研究其抑制剂发挥重要作用.
关键词： 血管内皮细胞 血管内皮细胞生长因子 血管内皮细胞生长因子受体2 血管生成 抑制剂 -
VEGFR-2(KDR)抗体与妇科恶性肿瘤
血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是一种具有较高特异性的血管生成因子,VEGF通过与血管内皮细胞生长因子受体家族(vascular endothelial growth factor receptor family,VEGFRs)相互作用,促进血管内皮细胞和淋巴内皮细胞的增殖和分化、调节血管通透性,从而在生理性和病理性血管形成过程中发挥调节作用.近年来,以VEGF及其受体为靶点的抗肿瘤治疗受到越来越多的关注,妇产科常见三大恶性肿瘤:卵巢癌、子宫内膜癌及宫颈癌的发展与VEGF、VEGFR2的表达也存在相关性,本文重点介绍以VEGFR2为靶点的抗肿瘤治疗在卵巢癌、子宫内膜癌及宫颈癌中的研究进展.
关键词： 卵巢癌 宫颈癌 子宫内膜癌 血管内皮细胞生长因子受体2 -
CTLA-4及VEGFR2在乳腺癌中的表达与病理分级的相关性
目的 研究细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4及血管内皮细胞生长因子受体2在乳腺癌中的表达与乳腺癌病理分级的相关性.方法 使用免疫组化法检测37例乳腺癌患者癌旁组织以及癌组织中细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4及血管内皮细胞生长因子受体2的表达,并分析其表达水平与乳腺癌病理分级的相关性.结果 细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4在癌间质的T淋巴细胞和乳腺癌细胞中都有表达,在乳腺癌细胞中的表达水平显著高于在癌旁组织,且其表达水平与癌组织级别呈正比.血管内皮细胞生长因子受体2主要在癌旁组织导管的上皮细胞及乳腺癌细胞的胞膜及胞浆中表达,且在乳腺癌的各级别间表达程度随肿瘤的恶性程度的增加而升高.结论 细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4及血管内皮细胞生长因子受体2表达与乳腺癌的病理分级呈正相关性.
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EGFR、PDGFRA和VEGFR2在结肠癌中的表达及变异分析
目的：探讨受体酪氨酸激酶表皮生长因子受体（EGFR），血小板源性生长因子受体α多肽（PDGFRA）和血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR2）在30例结肠癌中的过表达及基因突变情况。方法收集该院确诊为结肠癌的30例组织标本，免疫组织化学检测组织标本中EGFR，PDGFRA和VEGFR2表达情况，PCR- SSCP检测标本中（外显子18-21）和（外显子12、14和18）的基因突变情况。结果收集该院确诊为结肠癌的30例组织标本，免疫组织化学显示EGFR的阳性表达率为43.3%（13/30），但是热点区域（外显子18-21）未检测到激活突变。而在17例患者（56.7%）中检测到外显子20的密码子787（Q787Q）的一处无义碱基替换（CAG>CAA）。在所有恶性细胞中阳性表达，热点区域也未发现激活突变，但是9例标本中的12号外显子的密码子567发生CCA>CCG无义突变；4例标本中的18号外显子的密码子824发生GTC>GTT无义突变。在2例标本中还发现，14号内含子有两处碱基改变IVS14+3G>A和IVS14+49G>A，4例标本中的18号内含子存在IVS18-50insA改变。有22例（73.3%）中VEGFR2阳性表达，且VEGFR2表达与肿瘤未转移呈正相关（=0.038）。结论结肠癌中虽然EGFR和PDGFRA过表达，但是未检测到激活突变，而VEGR2也在结肠癌中过表达，其表达与肿瘤未发生转移有关。本研究结果为未来结肠癌治疗提供可能的方向。
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VEGF、VEGFR2在慢性砷中毒大鼠生精小管中的表达及其意义
目的 研究血管内皮生长因子(VEGF)及其受体2(VEGFR2)在慢性砷中毒大鼠生精小管中的表达,探讨其与男性不育的关系及致男性不育的机制.方法 健康清洁雄性SD大鼠40只,体重160～200 g,随机分为高(60.0 mg/L)、中(12.0 mg/L)、低(2.4 mg/L)剂量染毒组和对照组(蒸馏水),采用经口自由饮水方式染毒,连续染毒6个月.染毒结束后,采用免疫组织化学法测定VEGF、VEGFR2的表达,末端标记法(TUNEL)测定大鼠睾丸生精上皮凋亡细胞灰度值,并观察精子形态,测定精子活力.结果 免疫组织化学法结果显示,与对照组比较,各染毒组VEGF、VEGFR2表达水平较低(P <0.05).TUNEL法结果显示,各染毒组大鼠生精上皮凋亡细胞灰度值较对照组低(P <0.05);随着砷染毒剂量的增加,大鼠睾丸生精上皮凋亡细胞灰度值呈降低趋势.与对照组比较,各染毒组正常精子数量减少,畸形精子比例逐渐升高,精子活力下降(P <0.05).结论 慢性砷中毒可影响大鼠睾丸中VEGF、VEGFR2的表达,引起生精上皮细胞凋亡,导致男性不育.
关键词： 血管内皮生长因子 血管内皮细胞生长因子受体2 砷中毒 生精小管 -
慢病毒介导的血管内皮生长因子受体2小干扰RNA对鼠白血病的抑制
目的:拟建立慢病毒载体携带的血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)基因短发夹RNA(Lenti6/shVEGFR,),研究其对鼠白血病的抑制作用.方法:用慢病毒载体系统构建Lenti6/shVEGFR2.检测pU6/shVEGFR2入门克隆转染、Lenti6/shVEGFR2表达克隆转导HL60细胞后的作用.流式细胞仪分析检测Lenti6/shVEGFR2对HL60鼠模型白血病的抑制效果.结果:pU6/shVEGFR2转染、Lenti6/shVEGFR2转导HL60细胞后48 h细胞抑制率相近,之后pU6/shVEGFR2组细胞抑制率明显下降,而Lenti6/shVEGFR2组变化无显著差异.在异种移植白血病鼠模型中Lenti6/shVEGFR2感染显著抑制白血病细胞生长(P＜0.05).结论:慢病毒介导的VEGFR2 RNA干扰有可能成为治疗白血病的有效方法.
关键词： 慢病毒 白血病 小干扰RNA 血管内皮细胞生长因子受体2 -
诱导正常血管内皮细胞具备肿瘤血管特性的研究
[目的]探讨用肿瘤细胞培养上清液诱导的人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)是否具备肿瘤血管内皮细胞的特性,旨在寻找一种简便的方法,解决肿瘤血管内皮细胞不易获得的难题.[方法]HUVEC用含不同浓度人肝癌细胞株HepG2培养上清的条件培养液培养,3-(4,5-二甲基噻唑)-5-(3-羧甲酯基)-2-(4-磺苯基)-2氢-四唑盐法(MTS)检测其增殖率,免疫细胞化学法结合图像定量分析测量血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)的变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肿瘤内皮标记物1和8(TEM1、TEM8)的mRNA表达.[结果]含体积分数10%、20%、40%HepG2培养上清的条件培养液培养,HUVEC增殖率分别为71%、89%、109%.HUVEC用含体积分数50%HepG2培养上清液的条件培养液培养后,VEGFR2平均光密度值明显高于对照组(P＜0.05),且TEM1及TEM8呈阳性表达,而对照组不表达.[结论]HepG2上清液促进HUVEC增殖,增殖后的HUVEC具备肿瘤血管内皮细胞的特性.
关键词： 内皮细胞 血管内皮细胞生长因子受体2 肿瘤内皮标记物 -
新 VEGFR2靶向抑制剂筛选及其抗肿瘤生物学活性检测
目的：从8种新合成血管内皮细胞生长因子受体2（vascular endothelial growth factor receptor 2， VEGFR2）靶向抑制剂中筛选有效抑制VEGFR2的药物，并检测其抗肿瘤效果。方法8种VEGFR2靶向抑制剂（标记为1～8号）各配成6种浓度分别作用于人脐静脉血管内皮细胞（ human umbilical vein endothelial cells，HUVEC）和舌癌细胞株（Tca8113）细胞，同时设置5-氟尿嘧啶（5-FU）为阳性对照组，无药物组为空白对照组。用噻唑蓝（ MTT）法检测细胞生长情况，免疫细胞化学法检测饱和浓度VEGFR2抑制剂组和空白对照组细胞VEGFR2表达，以验证抑制剂对VEGFR2的作用效应。结果与空白对照组相比，阳性对照组能显著抑制这两种细胞的生长增殖（ P＜0.05），不同浓度各VEGFR2靶向抑制剂组对这两种细胞生长增殖的差异均无统计学意义（ P＞0.05）。免疫细胞化学结果显示，空白对照组Tca8113细胞和HUVEC细胞膜上VEGFR2高表达；与空白对照组相比，饱和浓度不同抑制剂组的Tca8113细胞中只有6号试剂组可以显著下调细胞膜上VEGFR2表达（ P＝0.000），而HUVEC各组VEGFR2表达差异均无统计学意义（ P＞0.05）。结论这些VEGFR2靶向抑制剂对人脐静脉血管内皮细胞和舌癌细胞生长增殖无抑制作用，其中只有6号抑制剂能显著下调舌癌细胞VEGFR2表达，可以作为进一步研究的候选药物。
关键词： 血管内皮细胞生长因子受体2 靶向抑制剂 抗肿瘤生物学活性 -
田蓟苷对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织的保护作用研究
目的:研究田蓟苷(TIL)对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织的保护作用.方法:120只雄性SD大鼠随机分为假手术组(0.9%氯化钠溶液)、模型组(0.9%氯化钠溶液)、尼莫地平组(32 mg/kg)和TIL低、中、高剂量组(4、8、16 mg/kg),每组20只.灌胃相应药物,每天1次,连续7 d,末次给药15 min后,以改良线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型.进行大鼠神经功能缺损评分;计算大鼠脑梗死体积百分比;采用苏木精-伊红染色法观察大鼠脑组织病理形态学;检测大鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、乳酸脱氢酶(LDH)活性和丙二醛(MDA)含量;采用Western blot法检测大鼠脑组织中降钙素基因相关肽(CGRP)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)蛋白表达.结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分显著升高(P＜0.01);脑组织梗死体积百分比显著升高(P＜0.01);脑组织神经细胞明显缩小变形,细胞间质水肿明显;脑组织中SOD、CAT活性均显著减弱, LDH活性显著增强,MDA含量显著增加,CGRP、VEGFR2蛋白表达均显著增强(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,尼莫地平组和TIL中、高剂量组大鼠神经功能缺损评分均显著降低(P＜0.05或P＜0.01);脑组织梗死体积百分比均显著降低(P＜0.05或P＜0.01);脑组织上述病理改变均明显减轻;脑组织中SOD、CAT活性均显著增强,LDH活性均显著减弱,MDA含量均显著减少, CGRP、VEGFR2蛋白表达均显著增强(P＜0.05或P＜0.01).结论:TIL对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织具有一定保护作用,其机制可能与上调CGRP和VEGFR2表达有关.
关键词： 田蓟苷 脑缺血再灌注损伤 降钙素基因相关肽 血管内皮细胞生长因子受体2 保护作用
