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水产品中无色孔雀石绿的悬液芯片检测方法研究
目的 建立水产品中无色孔雀石绿(LMG)的悬液芯片检测法.方法 向聚苯乙烯微球中加入14μg/100μl的LMG抗原,利用碳二亚胺法使抗原与微球偶联构成捕获抗原.加入含LMG的样品,使用1∶800倍稀释的LMG单克隆抗体及藻红蛋白标记的二抗,37℃孵育1h后在悬液芯片仪上检测平均荧光强度值并计算样品中LMG的含量.结果 在10～100ng/ml的线性范围内,所得体系的回归方程为△F=2 035.6c+22.4,r=0.999 8.方法的检出限为0.125 ng/ml,加标回收率在88.7％～93.6％之间,RSD为3.2％～7.6％.结论 该方法的灵敏度高,特异性好,可作为一种高通量检测的新技术用于水产品中无色孔雀石绿残留的分析.
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基于悬液芯片系统的新城疫病毒强、弱毒高通量检测方法的建立
目的:利用悬液芯片系统建立一种高通量检测新城疫病毒强、弱毒的方法并将该方法的灵敏度与传统的酶联免疫反应(ELISA)进行比较.方法:将F48E9和LaSota单克隆抗体通过共价偶联的方式连接到聚苯乙烯微球的表面构成捕获抗体,利用捕获抗体、检测物、生物素化的多抗及链霉亲和素化的藻红蛋白建立双抗夹心的免疫检测模式.检测物作为抗原与捕获抗体结合后与生物素化的新城疫多抗进行反应,反应完成后,用链霉亲和素标记的荧光探针对反应产物进行标记得到悬液芯片系统的检测物.结果:微球包被实验结果表明,包被100 μL微球所需F48E9和LaSota单克隆抗体的佳量分别是14.85 μg和17.65 μg;新城疫病毒多抗的佳稀释倍数为400倍；悬液芯片检测方法检测NDV强毒的灵敏度为1∶160,弱毒的灵敏度为1∶320;抗体特异性实验表明,该方法所使用的两种捕获抗体的体异性良好.该方法与传统的ELISA在相同灵敏度的前提下,其在检测时间、检测步骤及高通量方面优于ELISA.结论:基于悬液芯片系统的新城疫强、弱毒高通量检测方法的建立对于该病毒的快速诊断具有重要的意义.
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一种高通量免疫检测抗生素残留方法的建立
目的 将表面具有羧基的聚苯乙烯微球运用于悬液芯片系统中,建立一种高通量检测牛奶中卡那霉素和氯霉素残留的方法.方法 将合成的卡那霉素和氯霉素全抗原包被在聚苯乙烯微球表面构成捕获抗原,并对整个包被过程进行优化.利用捕获抗原、单克隆抗体及检测物构建间接竞争免疫检测体系,并用荧光标记的二抗作为荧光探针标记与捕获抗原结合的单克隆抗体得到悬液芯片系统的检测物.由于不同型号的微球被悬液芯片系统的激光激发后所呈现的侧向散射荧光(side scatter,SSC)和前向散射荧光(forward scatter,FSC)不同,所以悬液芯片系统能够将不同的微球进行区分以达到分辨不同检测物的目的,悬液芯片系统上的另外一套检测系统能够对每个微球表面荧光探针的荧光强度进行检测以实现定量分析,双检测系统同时工作实现了高通量检测的目的.结果 微球的包被优化实验结果表明,包被100μL微球需要卡那霉素和氯霉素全抗原的佳量分别是12μg和17μg.单克隆抗体的佳稀释倍数分别是800倍和1600倍；在牛奶基质中,该方法对卡那霉素和氯霉素的检测限分别是0.79ng/mL和52.01 ng/mL,半数抑制浓度(IC50)分别为36.65ng/mL和626.03ng/mL,检测范围分别为9～900ng/mL和90～900ng/mL;抗体特异性实验表明两种单克隆抗体的特异性良好.该方法在牛奶基质中的标准添加回收率为80％～110％,满足检测方法建立的要求.结论 利用基于微球技术的悬液芯片系统建立了一种高通量检测牛奶中抗生素残留的方法,该研究为下一步更多种抗生素残留的同步检测提供了数据依据.
