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牻牛儿基焦磷酸合成酶文献资料
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川西獐牙菜牻牛儿基焦磷酸合成酶基因的克隆及表达分析
目的 从川西獐牙菜Swertia mussotii中克隆牻牛儿基焦磷酸合成酶(SmGPPS)编码基因,并进行生物信息分析及该基因的表达研究.方法 根据川西獐牙菜转录组SmGPPS基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR扩增得到cDNA序列,通过生物信息对该序列进行分析;构建原核表达载体pET-28a-SmGPPS,转入大肠杆菌BL-21 (DE3)中,在37℃、1mmol/L IPTG诱导下进行表达.采用半定量RT-PCR方法检测SmGPPS基因在川西獐牙菜不同组织中的表达强度.结果 SmGPPS cDNA全长1119bp,编码372个氨基酸.并对其蛋白二级、三级结构进行了分析和预测.SmGPPS蛋白与其他植物中GPPS蛋白具有高度的相似性.SDS-PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致.半定量RT-PCR结果表明SmGPPS在叶中表达量高.结论 为进一步研究该基因的功能和利用基因工程手段提高川西獐牙菜中环烯醚萜类化合物产量提供了基础.
