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利用板蓝根水提醇沉物生产产朊假丝酵母
目的以板蓝根的水提醇沉物为原料培养产朊假丝酵母.方法将原料液化、糖化处理后,以此水解液为发酵液进行液态发酵,并对该菌在水解液中的生长特性及发酵条件进行研究.结果优化后的培养条件为:水解液还原糖含量2.65%,温度28℃,pH值5.5～6.5,接种量9%,装液量100 mL(500mL三角瓶).在优化培养条件下培养20 h后,产朊假丝酵母的生长达到稳定期,其活菌数达到6.61×108/mL.经检测,干燥后的菌粉中靛玉红达0.45μg/g.结论以板蓝根水提醇沉物为原料生产产朊假丝酵母是可行的.
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产朊假丝酵母尿酸酶药用性分析
尿酸作为嘌呤分解终产物主要通过肾脏排泄,血清尿酸的水平是肾脏功能监测的有效指标.酸酶可专一催化氧化尿酸生成尿囊素、二氧化碳和过氧化氢,从而广泛用于临床检验领域测定血清尿酸.本文初步探讨产朊假丝酵母尿酸酶的特性,为通过分子改造获得理想的药用尿酸酶进行理论性铺垫.
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硫酸铵与pH对酵母高密度发酵生产谷胱甘肽的影响
控制15L发酵罐中还原糖、氨基氮和pH,考察不同发酵模式对Candida utilis SIPI-60336生物合成谷胱甘肽(GSH)的影响.在高密度发酵模式中细胞产量和GSH产量同时达到人值.确定发酵工艺为:在流加葡萄糖的基础上流加硫酸铵并控制pH,通过高密度发酵提高细胞浓度来提高GSH产量.佳发酵条件为:还原糖浓度为10g/L,氨基氮浓度为60mg/100ml,pH 4.5.发酵48h后GSH产量和细胞干重均大幅提高,分别为830rng/L和41.5g/L.
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制备富硒产朊假丝酵母(Candida utilis)的条件优化
利用富硒酵母菌的新陈代谢和菌体繁殖,通过对发酵培养基组成及发酵条件的优化,如对C源、N源、硒浓度、PH、装液量以及发酵时间等因素进行了探讨.在实验室条件下制备出高硒酵母并得到优发酵条件,优化后所得到富硒酵母的生物量、细胞硒含量以及总硒含量比优化前都提高了1倍多.
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带His标签重组产朊假丝酵母尿酸酶的表达、纯化与部分酶学性质研究
目的 研究重组产朊假丝酵母尿酸酶的高效表达条件、分离纯化和部分酶学性质.方法 选择在菌体对数生长末期加入诱导剂,通过摇瓶培养对异丙基-β-D-1-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)和乳糖诱导产酶的效果进行比较;利用50 L发酵罐研究诱导培养时间;通过Ni-琼脂糖凝胶柱亲和层析、Sephacryl S-200 HR层析纯化目的蛋白并研究其适pH值和酸碱稳定性、适温度及热稳定性.结果 摇瓶培养结果显示乳糖诱导效果优于IPTG.发酵罐培养工程菌,在对数生长末期添加乳糖诱导7 h后酶活力和生物量均达到大值,分别为164 U/g菌体和23 g菌体/L发酵液,即每升发酵液含酶活性3 772 U.纯化的尿酸酶比活性为4.5 U/mg,其适pH值为7.5,适温度40℃,酸碱稳定范围在pH值6.0～10.0,温度低于45℃ 时热稳定性较好.结论 以乳糖作为诱导剂培养效果更佳;带有His标签的重组尿酸酶经Ni-琼脂糖凝胶柱亲和层析和Sephacryl S-200HR分子层析后即可获得纯品,纯化流程更为简单;该纯化酶的适反应温度、适pH值、酸碱稳定性和热稳定性的确定为其结构与功能的关系以及未来的实际应用提供了一定的实验依据.
