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水飞蓟素对乳腺癌细胞系的作用及其机制研究
目的研究水飞蓟素在体外对不同乳腺癌细胞系的作用,并进一步探讨其作用机制.方法MTT实验测定水飞蓟素对乳腺癌细胞系MCF-7和SK-BR-3的半数抑制浓度(IC50);软琼脂克隆形成试验检测加药后两种细胞在软琼脂内的增殖能力.在此基础上,用Her-2抑制剂AG825进行干预,对水飞蓟素的作用机制进行初步探讨.结果水飞蓟素对两种乳腺癌细胞有不同程度的抑制作用,其中对MCF-7细胞的作用较强,IC50≤0.02%,而对SK-BR-3的作用较弱.Her-2抑制剂AG825可增加SK-BR-3细胞对药物的敏感性,抑制了水飞蓟素作用后该细胞在软琼脂中集落的形成.结论水飞蓟素在体外对MCF-7细胞具有明显的抑制作用,而AG825可增强SK-BR-3细胞对药物的敏感性.因此,SK-BR-3细胞中Her-2的高表达可能是该细胞对水飞蓟素敏感性差的原因,而水飞蓟素也可能通过Her-2调节某个或某几个下游分子起作用.
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AG825对乳腺癌细胞的辐射增敏作用
目的:通过体外实验观察酪氨酸蛋白激酶抑制剂AG825对人类表皮生长因子受体2(ERBB-2)高表达乳腺癌细胞的生长抑制作用和辐射增敏作用,并从DNA双链断裂(Double strand break,DSB)损伤修复的角度初步探讨AG825辐射增敏机制.方法:首先通过MTT比色法观察了不同浓度AG825对ERBB-2高表达乳腺癌细胞系MDA-MB-453生长抑制作用.然后将细胞设为空白对照组,单纯放射组,AG825预处理组.通过克隆形成实验观察AG825预处理组和单纯辐射组乳腺癌细胞辐射后生存分数(Survivial fraction,SF)的差异.并且通过单细胞中性凝胶电泳分析了AG825预处理对辐射诱导的DSB的影响.同时用免疫印记法分析AG825预处理后MDA-MB-453细胞在辐射后不同时间DSB修复的关键激酶DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA dependent protein kinase catalytic sub-unit,DNA-PKcs)蛋白的表达情况.结果:MTT比色法显示AG825对MDA-MB-453生长抑制作用随AG825浓度增高而增加.辐射后单纯放射组MDA-MB-453细胞生存分数较空白对照组明显下降.AG825预处理组辐射后生存分数较单纯放射组进一步下降,同时DSB较单纯放射组增加.免疫印记显示单纯放射组DNA-PKcs蛋白表达在辐射后较空白对照组增加,而AG825预处理组DNA-PKcs表达较单纯放射组下降.结论:AG825对ERBB2高表达乳腺癌细胞具有生长抑制作用.并且其对ERBB2高表达乳腺癌细胞具有辐射增敏作用,其辐射增敏机制可能与AG825抑制DNA-PKcs蛋白表达而减少辐射后DSB修复有关.但还需进一步的体内实验来评价AG825辐射增敏作用.
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ErbB2受体抑制剂AG825对ErbB2非过表达乳腺癌细胞增殖的作用及意义
目的:探讨在ErbB2非过表达乳腺癌细胞中是否存在NRGs/ErbB2这种配体作用方式的信号通路活化,进而研究神经调节因子(Neuregulins'NRGs)对ErbB2受体信号转导活化和细胞增殖生长的作用.方法:以ErbB2非过表达乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7为研究对象,台盼蓝拒染法检测细胞生长曲线;免疫细胞化学法和Western blot法检测细胞中NRG的表达.应用ErbB2受体功能抑制剂AG825处理两株细胞,MTT法检测比较两株细胞的增殖抑制作用,求出AG825作用MDA-MB-231细胞48 h的IC_(50).40 μmol/L AG825处理MDA-MB-231细胞48 h,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡.结果:与MCF-7细胞比较,MDA-MB-231细胞具有较强的增殖生长能力.NRG在MDA-MB-231细胞内呈显著表达,MCF-7细胞中无NRG的表达.Western blot实验检测MDA-MB-231细胞可见分子量44 kD的NRG抗体阳性反应条带.应用ErbB2受体功能抑制剂AG825后,MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用明显,AG825作用MDA-MB-231细胞48 h的IC_(50)为56.59 μmol/L.40μmol/LAG825处理MDA-MB-231细胞48 h后,细胞周期阻滞在G_0G_1期(P<0.05);细胞凋亡增加(P<0.01).结论:ErbB2非过表达乳腺癌细胞MDA-MB-231可能通过NRGs自分泌或旁分泌作用方式使ErbB2受体信号转导处于激活状态,这与其高增殖、低凋亡恶性行为有关.
关键词： ErbB2非过表达乳腺癌细胞 AG825 神经调节因子 增殖
