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hFXYD6文献资料
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hFXYD6真核表达载体构建及对人肝癌细胞系SMMC7721细胞的生物学作用的影响
目的 构建人肿瘤相关蛋白FXYD6真核表达载体pcDNA3.1-hFXYD6,研究其对人肝癌细胞系SMMC7721细胞增殖与侵袭的影响.方法 扩增hFXYD6 cDNA,将其插入克隆质粒载体pMD18 T Simple,将限制性内切酶酶切后的目的片段插入以限制性内切酶切后的表达质粒载体pcDNATM3.1/myc-His(-)B中,经聚合酶链反应(PCR)电泳和测序证实后转染至人肝癌细胞系SMMC7721细胞中,同时设pcDNA3.1空载体转染组和pcDNA3.1-hFXYD6载体转染组,比较两组细胞的增殖与侵袭情况.结果 成功构建了pcDNA3.1-hFXYD6真核表达载体.转染真核质粒pcDNA3.1-hFXYD6的SMMC7721细胞,经培养48 h,电泳图显示用hFXYD6单克隆抗体识别的特异性蛋白条带.pcDNA3.1-hFXYD6表达载体组细胞较pcDNA3.1空载体转染组细胞增殖速度明显增快.pcDNA3.1空载体转染组、pcDNA3.1-hFXYD6表达载体组细胞穿透Boyden趋化小室滤膜的细胞数分别为(109.9 ± 7.8)个、(167.6 ± 9.3)个,两组差异有显著统计学意义(P <0.001).结论 成功构建的pcDNA3.1-hFXYD6真核质粒能在肝癌细胞系SMMC7721细胞中表达目的蛋白,hFXYD6可促进肝癌细胞增殖与侵袭,这为研究hFXYD6的具体作用机制奠定了基础.
