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退火方法文献资料
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NaCl浓度和茎环内的碱基结构对shRNA退火影响的研究
目的 优化DNA寡核苷酸单链退火条件,提高单链DNA寡核苷酸退火效率.加速shRNA表达载体构建速度.方法 将茎环内部碱基结构不同DNA寡核廿酸链在不同浓度(50、100、150、200mmol/L)NaCl退火缓冲液中进行退火,通过琼脂糖凝胶电泳观察DNA寡核苷酸链在退火前后电泳速度的变化,利用GeneTools分析软件对电泳图像进行分析比较退火效率.结果 当退火缓冲液中NaCl浓度为200mmol/L时,DNA寡核苷酸单链退火效率明显提高,茎环内部碱基互补的DNA寡核苷酸单链退火效率46.00%±3.33%.茎环内部碱基不互补DNA寡核廿酸单链退火效率97.00%±1.49%.结论 NaCl浓度和茎环内的碱基设计是影响shRNA退火主要因素,优化shRNA的退火条件,提高退火效率,可以加速载体构建.
