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TLR4/P38/JNK信号通路在海马神经元凋亡中的作用
目的:探讨Toll样受体4(TLR4)/P38/JNK信号通路在海马神经元凋亡中的作用及其机制,为神经退行性疾病(ND)的发病机制与防治研究提供新的实验依据.方法:采用体外培养7d的新生大鼠海马神经元,免疫荧光双标法鉴定海马神经元纯度.用TLR4配体脂多糖(LPS)或TLR4抗体预处理海马神经元,以激活或阻断TLR4的作用.实验1设正常对照组、LPS组及TLR4抗体+LPS组;免疫荧光法检测P-P38,P-JNK的表达.实验2分为6组:正常对照组,LPS组,TLR4抗体+LPS组,SB202190(抑制P38)+LPS组,SP600125(抑制JNK)+ LPS组,PD98059(抑制ERK)+ LPS组;分别用TLR4抗体、P38、JNK及ERK的抑制剂预处理海马神经元后再给以LPS刺激24h,Western blot法检测Bcl-2,Bax,Active-caspase-3的表达变化;流式细胞术检测海马神经元凋亡率.结果:LPS组海马神经元P-P38、P-JNK的表达明显高于正常对照组(P＜0.01),TLR4抗体+LPS组P-P38,P-JNK表达显著低于LPS组(P＜0.01).与正常对照组相比,LPS组海马神经元Bcl-2/Bax表达减少、Active-caspase-3表达增加,海马神经元凋亡率增加(P＜0.01).而TLR4抗体+LPS组、SB202190+ LPS组、SP600125+LPS组Bcl-2/Bax显著高于LPS组、Active caspase-3显著低于LPS组(P＜0.01),海马神经元凋亡率显著低于LPS组(P＜0.05,P＜0.01).PD98059+ LPS组与LPS组海马神经元凋亡率无明显差异.结论:①海马神经元中有TLR4介导的P38/JNK信号通路.②海马神经元TLR4激活后,P-P38、P-JNK表达增加,使Bcl-2/Bax的比例降低和Active-caspase-3表达增加,从而促进海马神经元的凋亡.海马神经元凋亡过程中有TLR4介导的P38/JNK信号通路的参与.
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苦参碱对 HaCaT 细胞 Bcl -2/Bax 和Fas/FasL 的调控
目的：明确苦参碱对 HaCaT 细胞 Bcl-2/ Bax 和 Fas/ FasL 表达的影响。方法：体外培养HaCaT 细胞，选择第二代细胞对数生长期 HaCaT 细胞作为研究对象，将细胞随机分为4组：苦参碱2 mg/ mL、10 mg/ mL 和50 mg/ mL 3组及对照组(加入相同体积的0.9％盐水)，孵育48 h 后，MTT 法测定各浓度下细胞增殖，RT-PCR 检测 Bcl-2/ Bax 和 Fas/ FasL 的表达。结果：与对照组相比，当苦参碱浓度为2 mg/ mL 时，HaCaT 细胞增殖活性无明显变化；Bcl -2、Bax、Fas、FasL 表达也无明显变化( P>0.05)。当苦参碱浓度为10 mg/ mL 时 HaCaT 细胞增殖活性较对照组明显下降(P<0.001)；Bcl-2表达明显下降，Bax 表达上升(P<0.001)；Fas、FasL 表达上升(P<0.05)。当苦参碱浓度为50 mg/ mL 时，MTT法检测 HaCaT 细胞增殖明显抑制(P<0.001)；同时 Bcl-2、 Bax、Fas 和 FasL 的变化与10 mg/ mL 时相似(P>0.05)。结论：苦参碱能够调控上皮细胞致炎因子的表达，抑制细胞的增殖。
