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TLR4/P38/JNK信号通路在海马神经元凋亡中的作用
目的:探讨Toll样受体4(TLR4)/P38/JNK信号通路在海马神经元凋亡中的作用及其机制,为神经退行性疾病(ND)的发病机制与防治研究提供新的实验依据.方法:采用体外培养7d的新生大鼠海马神经元,免疫荧光双标法鉴定海马神经元纯度.用TLR4配体脂多糖(LPS)或TLR4抗体预处理海马神经元,以激活或阻断TLR4的作用.实验1设正常对照组、LPS组及TLR4抗体+LPS组;免疫荧光法检测P-P38,P-JNK的表达.实验2分为6组:正常对照组,LPS组,TLR4抗体+LPS组,SB202190(抑制P38)+LPS组,SP600125(抑制JNK)+ LPS组,PD98059(抑制ERK)+ LPS组;分别用TLR4抗体、P38、JNK及ERK的抑制剂预处理海马神经元后再给以LPS刺激24h,Western blot法检测Bcl-2,Bax,Active-caspase-3的表达变化;流式细胞术检测海马神经元凋亡率.结果:LPS组海马神经元P-P38、P-JNK的表达明显高于正常对照组(P＜0.01),TLR4抗体+LPS组P-P38,P-JNK表达显著低于LPS组(P＜0.01).与正常对照组相比,LPS组海马神经元Bcl-2/Bax表达减少、Active-caspase-3表达增加,海马神经元凋亡率增加(P＜0.01).而TLR4抗体+LPS组、SB202190+ LPS组、SP600125+LPS组Bcl-2/Bax显著高于LPS组、Active caspase-3显著低于LPS组(P＜0.01),海马神经元凋亡率显著低于LPS组(P＜0.05,P＜0.01).PD98059+ LPS组与LPS组海马神经元凋亡率无明显差异.结论:①海马神经元中有TLR4介导的P38/JNK信号通路.②海马神经元TLR4激活后,P-P38、P-JNK表达增加,使Bcl-2/Bax的比例降低和Active-caspase-3表达增加,从而促进海马神经元的凋亡.海马神经元凋亡过程中有TLR4介导的P38/JNK信号通路的参与.
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苦瓜总皂苷对排卵障碍模型大鼠卵巢Caspase-3蛋白表达影响研究
目的:探讨苦瓜总皂苷对卵巢功能是否有有益作用及其可能的作用机制,以促进我国妇科学的发展.方法:选取雌性SD大鼠60只,随机分为正常对照组,模型对照组,苦瓜总皂苷低(10 mg· kg-1·d-1)、中(20 mg· kg-1·d-1)和高剂量(40 mg·kg-1·d-1)治疗组以及阳性药物逍遥丸干预组,大鼠在适应性喂养2周后,除正常对照组,其余5组给予颈背部皮下1.25 mg丙酸睾丸酮一次性注射造模,待大鼠阴道开口后,检测其阴道上皮是否有持续角化来判定排卵障碍模型大鼠是否成功造模成功后给予相应药物治疗,正常对照组和模型对照组只给予对应量生理盐水灌胃;治疗6周后处死大鼠,收集血清和卵巢组织,测定其血清中胆红素、总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA);同时免疫组化、Western以及半定量PCR观察卵巢组织Caspase-3蛋白的表达特点.结果:与正常组相比,模型组总胆红素、直接胆红素以及丙二醛明显升高(P＜0.05),总抗氧化能力明显下降(P＜0.05),苦瓜总皂苷治疗后,相较于模型组,3个治疗组以及逍遥丸干预组总胆红素、直接胆红素以及丙二醛明显下降(P＜0.05),其中中剂量和高剂量组和正常对照组一致;此外苦瓜总皂苷治疗后,卵巢颗粒细胞免疫组化、Western blot以及半定量PCR检测Caspase-3结果表明,模型组卵巢细胞Caspase-3表达量较多,而3个治疗组均可以明显的减少卵巢细胞Caspase-3蛋白表达,且高剂量组效果优于低剂量组,中高剂量组优于逍遥丸治疗组.结论:苦瓜总皂苷能改善排卵障碍模型大鼠卵巢的氧化损伤和细胞凋亡,推测其是通过此途径来改善卵巢功能,同时其效果优于目前临床中常用的逍遥丸.
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促红细胞生成素对腹膜间皮细胞凋亡的保护作用
目的:观察重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rHuEPO)对腹膜间皮细胞(PMCs)的抗凋亡作用及其机制.方法:体外分离小鼠PMCs并给予rHuEPO干预,观察起对JAK2,STAT5,ERK1/2和P38磷酸化的影响.体内试验采用5000U/kg的rHuEPO顸处理后再予以4.25%的腹透液腹腔内注射后4小时,取小鼠脏层腹膜组织检测活性凋亡蛋白酶-3表达.结果:小鼠PMCs上表达EPO受体mRNA和蛋白,5 U/mL的rHuEPO可诱导PMCs的JAK2,STAT5和ERK1/2磷酸化上调.rHuEPO预处理1小时后再予腹透液处理的PMCs较单独予腹透液处理的PMCs,凋亡蛋白酶-3活化降低,DNA碎裂减少.rHuEPO干预可提高ERK1/2磷酸化水平而抑制腹透液诱导的P38磷酸化.特异性的ERK活化抑制剂PD98059可完全阻断rHuEPO的保护作用.通过检测凋亡蛋白酶-3证实rHuEPO可在小鼠体内降低腹透液引起的PMCs凋亡水平.结论:本研究为rHuEPO在腹透临床治疗中的临床应用开辟了新途径,rHuEPO可通过ERK1/2依赖途径减少PMCs的凋亡发挥保护性作用.rHuEPO及其衍生物可能成为维护腹膜完整性的新治疗手段.
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槲皮素对人宫颈癌HeLa细胞增殖的影响
目的 研究槲皮素对人宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响,同时探讨槲皮素对抗宫颈癌的可能作用机制.方法 四唑盐比色法(MTT法)检测不同浓度及不同时间槲皮素对HeLa细胞增殖的影响;流式细胞仪分析槲皮素对HeLa细胞凋亡的影响;Western blotting法检测癌细胞caspase-3蛋白水平的变化.结果 槲皮素作用于HeLa细胞后,细胞增殖水平明显下降(P<0.05),且在一定浓度范围内呈时间、浓度依赖性(r=0.720,P<0.01;r=0.385,P<0.05);不同浓度槲皮素处理HeLa细胞后能诱导其凋亡,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);随着槲皮素浓度的增加,caspase-3蛋白水平明显上调(P<0.05).结论 槲皮素可显著抑制人宫颈癌HeLa 细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能是通过激活caspase-3蛋白表达实现的.
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黄芩苷抑制 ox-LDL 诱导内皮细胞凋亡的作用
目的：观察黄芩苷预处理对细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响，探讨其保护内皮细胞的机制。方法取雄性 Wistar 大鼠胸主动脉提取内皮细胞，分成正常对照组、ox-LDL 刺激组和黄芩苷处理组，正常对照组用10％FBS 的 ECM 培养液培养，另外两组分别向培养液中滴加不同浓度的 ox-LDL 和黄芩苷（10、25、50μg ／mL），培养24 h 后测定细胞凋亡率以及凋亡蛋白酶相关蛋白（Caspase-3、Bcl-2、Bax）mRNA 的表达量。后用 ox-LDL ＋黄芩苷（50μg ／mL）处理细胞，培养24 h 后测定上述指标。结果黄芩苷刺激可明显抑制内皮细胞凋亡（P ＜0．01）；与同浓度 ox-LDL 刺激组和正常对照组相比，黄芩苷刺激后 Bcl-2 mRNA 表达量明显升高（P ＜0．01）；Bax、Caspase-3的表达量以及 Bax／Bcl-2比值较正常对照组升高；与同浓度 ox-LDL 刺激组相比，ox-LDL ＋黄芩苷刺激组细胞凋亡率降低（P ＜0．01）。黄芩苷刺激后 Bcl-2 mRNA 的表达量升高（P ＜0．01），而 Caspase-3、Bax mRNA 的表达量降低（P ＜0．01），Bax／Bcl-2比值降低（P ＜0．01）。结论黄芩苷预防内皮细胞损伤的作用可能是通过增强 Bcl-2表达，减少 Caspase-3、Bax 的活化并降低 Bax／Bcl-2的比值实现的。
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衰老雄性大鼠睾丸组织抗氧化酶与血清睾酮水平、凋亡蛋白酶-3基因表达的研究
目的:探讨衰老雄性大鼠睾丸组织抗氧化酶水平对血清睾酮(T)水平、睾丸间质细胞凋亡蛋白酶-3(caspase-3)基因表达的关系.方法:SD大鼠(20只)随机均分为对照(C)组和D-半乳糖(D)组,用分光光度计检测睾丸组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量,放免法检测血清中T水平以及免疫组化检测睾丸间质细胞caspase-3基因表达情况.结果:①SOD活性:D组[(116.0±18.1)NU/mgprot]显著低于C组[(156.0±31.0)NU/mgprot](P＜0.01);②GSH-Px水平:D组[(29.8±3.8)U/mgprot]显著低于C组[(35.3±4.5)0U/mgprot](P＜0.05);③血清T:D组[(0.7±0.3)ng/mL]显著低于C组[(2.6±0.7)ng/mL](P＜0.01);④caspase-3表达:D组[(11.3±1.8)%]明显高于C组[(9.1±1.3)%](P＜0.01).结论:衰老大鼠睾丸组织抗氧化酶活性下降与血清T水平和睾丸间质细胞caspase-3基因表达增强有关.
