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籽鹅不同等级卵泡生殖相关激素受体基因的表达
目的:检测籽鹅不同等级卵泡不同生殖相关激素受体mRNA的表达.方法:选用1只8月龄产蛋期籽鹅,处死后分离各级别卵泡(F1、F2、F3、F4、F5、SYF、LWF),采用实时荧光定量PCR方法检测促卵泡激素受体(FSHR)、促黄体生成素受体(LHR)、雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)、生长激素受体(GHR)和胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)6种生殖相关激素受体mRNA的表达量变化.结果:SYF和LWF中LHR、GHR和IFGBP-1 mRNA表达量较低,而F1-F5级卵泡中表达量较高;SYF和LWF中ERβmRNA表达量较高,而等级卵泡中表达量较低.结论:本实验研究了不同等级卵泡FSHR、LHR、ERα、ERβ、GHR和IGFBP-1 mRNA的变化规律,为研究禽类产蛋机制提供基础数据.
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籽鹅Clock基因mRNA在繁殖周期下丘脑中的表达水平
目的 探讨籽鹅Clock基因mRNA在繁殖周期下丘脑中的表达水平.方法 选取休产期(1月份)、产蛋前期(3月份)、产蛋高峰期(4月份)、产蛋后期(6月份)的雌性籽鹅各6只,取其下丘脑组织样品用于抽提总RNA,克隆Clock基因,并进行实时荧光定量PCR分析.结果 克隆得到了籽鹅Clock基因的部分CDS区序列,与鸭和鸡的对应核苷酸序列相似性分别为99％和96％.Clock基因在不同时期的雌性籽鹅下丘脑中均有表达,其mRNA表达水平从休产期到产蛋高峰期呈持续增长趋势,但产蛋末期开始下降.其中产蛋高峰期的表达水平显著高于产蛋末期(P＜0.05),但与休产期和产蛋前期的表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 籽鹅下丘脑中Clock基因mRNA的表达水平与当地日照时间长短密切相关,随着日照时间的延长,其表达量逐步提高,且在产蛋高峰期时达到峰值.本研究为阐述Clock基因调控鹅繁殖节律的分子机制提供了实验依据.
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籽鹅卵泡颗粒细胞α-烯醇化酶基因RNA干扰表达质粒的构建及鉴定
目的 构建籽鹅卵泡颗粒细胞α-烯醇化酶(α-enolase,ENO1)基因RNA干扰表达质粒,并进行鉴定.方法 利用RNAi Designer等网络在线RNA干扰设计软件设计3条可能会干扰籽鹅卵泡颗粒细胞ENO1基因表达的插入DNA序列:shRNA-ENO1-350、shRNA-ENO 1-892、shRNA-ENO 1-591,将体外合成的3条干扰序列分别与线性化的pGPU6／GFP／Neo载体连接,构建ENO1RNA干扰表达质粒,在Lipofectamine 2000的介导下转染原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞,转染48 h后,荧光倒置显微镜下观察GFP的表达;实时荧光定量PCR和Western blot法检测转染细胞中ENO1基因mRNA的水平及蛋白的表达水平.结果 pGPU6／GFP/Neo-shDNA重组质粒经单酶切及测序证实构建正确;转染后48 h,转染重组质粒的颗粒细胞在荧光倒置显微镜下可见较强的绿色荧光,转染效率可达60％;与培养液组、转染试剂组和无关序列干扰组(shNC)相比,shRNA-ENO1-350组颗粒细胞中ENO1基因mRNA水平和蛋白表达水平均显著降低(P＜0.01),其他各组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 成功构建了籽鹅卵泡颗粒细胞ENO1基因RNA干扰表达质粒,在原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞中,其表达量显著下降,为后续有关ENO1功能的研究奠定了基础.
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不同生长期籽鹅消化道5-羟色胺的表达
目的:观察不同生长期籽鹅消化道内的5-羟色胺(5-HT)免疫活性细胞.方法:采用SP免疫组织化学方法,对不同生长期(1、 10、 30、 60、 90d)籽鹅消化道5-HT免疫活性细胞的分布密度与形态进行研究.结果:随着日龄的增长,籽鹅消化道5-HT细胞的数量逐渐增多.5-HT细胞在1日龄就已见于肠道各段,但分布数量较少,到90日龄达到高峰,在十二指肠和直肠分布密度大,幽门部少.结论:生长期籽鹅消化道5-HT细胞的分布、形态是与其功能相适应的.
