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肌内皮缝隙连接对失血性休克大鼠血管收缩反应的影响
目的 研究肌内皮缝隙连接(MEGJ)对失血性休克大鼠内皮依赖性和非依赖性血管收缩反应的影响.方法 56只SD大鼠按随机数字表法分为去甲肾上腺素(NE)组和杨梅黄酮组;NE组分为正常对照以及休克0、0.5、1和2 h 5个亚组;杨梅黄酮组分为正常对照以及休克0、0.5、1、2、3和4 h 7个亚组.各组取其肠系膜上动脉(SMA)制成血管环,分别测量在18α-甘草次酸(18α-GA)作用前后血管环对NE和杨梅黄酮反应性的变化.结果 SMA血管环对NE的反应性表现为:休克0 h和0.5 h组明显高于正常对照组和其他休克时间点组,休克1 h和2 h组明显低于正常对照组和休克0 h和0.5 h组;18α-GA对NE诱导的SMA血管环收缩反应性无明显影响.SMA血管环对杨梅黄酮的反应主要表现为:休克0、0.5、1和2 h组明显高于正常对照组,于休克2 h达高点;休克3 h和4 h组明显低于正常对照组,运用18α-GA阻断MEGJ后,各组血管环的收缩反应性较18α-GA作用前明显下降,其中以休克1、2和3 h组下降幅度明显大于其他组.结论 失血性休克后早期,内皮依赖和非依赖性的血管收缩反应均有不同程度代偿性增加,休克1 h和2 h表现为非内皮依赖性血管收缩反应下降,休克3 h和4 h表现为内皮依赖性血管收缩反应明显降低;MEGJ在休克后内皮依赖性血管收缩反应的变化中起重要调节作用.
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血管生成素-2经肌内皮缝隙连接调节血管低反应性
目的 观察肌内皮缝隙连接(MEGJ)对血管生成素-2(Ang2)调节缺氧大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)低反应性的介导作用,并明确参与的缝隙连接蛋白(Cx)亚型.方法 建立血管内皮细胞(VECs)和VSMCs双面共培养模型,检测异硫氰酸荧光素-牛血清白蛋白(FITC-BSA)透过率反映VSMCs收缩反应性,观察鬼笔环肽荧光反映MEGJ形成,观察磺酰罗丹明B细胞培养试剂染料转运反映MEGJ通讯功能.结果 (1)在双面共培养模型,缺氧4h后VECs和VSMCs中iNOS表达显著增高,且VSMCs中的显著强于VECs中(3.6倍,P=0.003),此增高的VSMCs中iNOS表达可被Ang2 siRNA抑制约60％ (P =0.003).(2) MEGJ抑制剂18α-GA、Cx43 siRNA(50 nmol/L)和促血管生成素受体2(Tie2) siRNA(50 nmol/L)可降低外源性Ang2作用下缺氧VSMCs的iNOS表达(P值分别为0.001,0.001和0.001),改善VSMCs收缩反应性(P值分别为0.004,0.009和0.001).(3)Cx43 siRNA和Tie2 siRNA可抑制缺氧及Ang2处理后上调的MEGJ形成(P值分别为0.005和0.005),并抑制上调的MEGJ通讯增强(P值分别为0.003和0.004).结论 MEGJ介导Ang2对缺氧VSMCs低反应性的调节,Cx43是参与的蛋白亚型.
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缝隙连接及其与血管舒缩功能调节的关系
缝隙连接是存在于相邻细胞间的膜通道结构,它的基本组成单位是连接蛋白.缝隙连接不仅在细胞间起机械连接作用,它还可以通过电偶联和化学偶联两种方式介导细胞间电和化学信号的传递,当机体受到外部或内部刺激后,缝隙连接可以通过改变连接蛋白的表达使机体适应这种变化.连接蛋白的磷酸化状态与缝隙连接形成密切相关,MAPK,PKC,c-Src,PKA和CK1等激酶可以磷酸化连接蛋白,并调节缝隙连接的功能.血管内皮细胞(VEC)与平滑肌细胞(VSMC)间的缝隙连接被称为肌内皮缝隙连接(MEGJ),它可以穿过内弹力层使VEC和VSMC进行直接的电和化学信号交流,VEC通过MEGJ实现其调节血管张力的功能.缝隙连接交流参与了失血性休克后血管低反应性的调节.
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MEGJ调节缺氧后血管平滑肌细胞低反应性的cAMP-PKA机制
目的 观察肌内皮缝隙连接(MEGJ)参与血管生成素-2(Ang2)调节缺氧血管平滑肌细胞(VSMCs)中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)高表达和血管低反应性的机制,探讨其是否与cAMP-PKA途径有关.方法 采用大鼠血管内皮细胞(VECs)和VSMCs双面共培养模型,分别采用western blotting、phalloidin荧光法和染料Sulforhodamine B转运技术,观察缝隙连接蛋白43(CX43)亚型表达、MEGJ形成及通讯功能,同时检测VSMCs中iNOS表达,并利用FITC-BSA荧光透过率反映VSMCs收缩反应性.结果 在双面共培养模型中,PKA抑制剂H-89可削弱外源性Ang2作用下缺氧VSMCs的iNOS表达和VSMC收缩反应性(P<0.05);缺氧后VECs中cAMP浓度,以及PKA活性显著增高(P<0.05),其增高可被Ang2进一步增强,而被Tie2的SiRNA削弱(P<0.05).在双面共培养系统上腔(VECs面)给予cAMP和PKA抑制剂,均可显著抑制外源性Ang2作用下缺氧后增高的MEGJ中Cx43蛋白表达、MEGJ形成和通讯功能(P<0.05).结论 缺氧使VSMCs中iNOS表达增高和收缩性降低,是通过cAMP-PKA信号途径上调Cx43蛋白表达、MEGJ形成和通讯功能而实现的.
