首页 > 文献资料
-
胆碱能抗炎通路介导石杉碱甲A对脓毒症相关性脑病的保护作用
目的 观察胆碱酯酶抑制剂石杉碱甲A(HupA)对脓毒症大鼠脑皮质胆碱乙酰转移酶(ChAT)及毒蕈碱型乙酰胆碱受体M1 (CHRM1)表达的影响,探讨胆碱能抗炎通路是否介导了HupA对脓毒症相关性脑病(SAE)的保护作用.方法 8周龄雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为对照组、脓毒症模型组和HupA干预组,每组18只.采用腹腔注射脂多糖(LPS)10 mg/kg(1 mL)诱导大鼠脓毒症模型,对照组给予等量生理盐水.HupA干预组于术前30 min腹腔注射HupA 0.04 mg/kg(1 mL),对照组及模型组给予等量生理盐水.观察大鼠一般情况;每组分别于术后3、12、24 h处死6只大鼠取大脑皮质组织,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α (TNF-α)和白细胞介素-1β (IL-1 β)等炎性介质水平;采用天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)和神经元核抗原(NeuN)免疫双标染色实验观察神经元细胞凋亡情况;采用实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)及免疫荧光法检测ChAT和CHRM1的mRNA表达和阳性细胞.结果 模型组大鼠给药后3h即出现精神萎靡、毛发竖立及静止懒动等脓毒症症状,12h表现为明显;并伴随大脑皮质TNF-α和IL-1β过表达,神经元凋亡细胞明显增多,ChAT和CHRM1阳性表达明显减少,ChAT和CHRM1的mRNA表达均明显降低,与对照组比较差异均有统计学意义[12h的TNF-α(ng/L):84.97±31.84比40.31±10.37,12h的IL-1 β(ng/L):1 095.98±127.09比622.62±117.25,12h的ChAT mRNA (2-△△Ct):1.34(0.67,1.86)比1.92(1.12,2.87),12h的CHRM1 mRNA(2-△△Ct):0.65±0.12比1.16±0.42,均P＜ 0.05].HupA干预后可明显缓解大鼠脓毒症症状;抑制大脑皮质TNF-α和IL-1β过表达及神经元细胞凋亡,同时可明显上调ChAT和CHRM1阳性表达及mRNA表达,与模型组比较差异均有统计学意义[12 h的TNF-α(ng/L):48.38±12.62比84.97±31.84,12h的IL-1 β (ng/L):718.13±163.33比1095.98±127.09,12h的ChAT mRNA (2-△△Ct):18.04(17.22,19.23)比1.34(0.67,1.86),12h的CHRM1 mRNA (2-△△Ct):1.46±0.69比0.65±0.12,均P＜0.05];24 h上述症状和数值基本恢复.结论 大脑皮质胆碱能神经功能异常及炎症反应均参与了SAE的发病过程;HupA可通过恢复胆碱能神经功能及胆碱能抗炎通路对SAE起到一定的保护作用.
