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RNA干扰YB-1表达对阿霉素诱导性耐药的K562细胞mdr1基因表达的影响
目的 探讨Y-盒结合蛋白1(YB-1)对白血病细胞系K562细胞药物诱导性mdr1基因表达的调控作用.方法 阿霉素间歇性长期作用于K562细胞,剂量逐渐增加,诱导细胞耐药.RT-PCR检测mdr1和YB-1基因表达,流式细胞术检测mdr1基因编码的P-糖蛋白(P-gP)表达,蛋白质印迹法检测YB-1蛋白核易位程度.通过RNA干扰技术使K562细胞中YB-1基因表达沉默,再用阿霉素处理YB-1基因沉默细胞,诱导细胞耐药,用RT-PCR、流式细胞术分别检测mdr1 mRNA和P-gP的表达.结果 经阿霉素作用后K562细胞mdr1基因转录上调,P-gp表达增加,同时YB-1基因转录也增强,且出现明显的核易位.YB-1基因沉默后,mdr1基因诱导性表达明显减少,阿霉素浓度为0.03、0.05μg/ml时mdr1 mRNA表达水平分别较未行shRNA干扰组降低(53.7±0.1)%和(64.3±0.0)%,P-gP表达呈同样趋势.结论 阿霉素诱导K562细胞耐药形成的过程中,YB-1对于mdr1基因的转录活化起一定的作用.
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糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白、Y-盒结合蛋白1和P-糖蛋白在上皮性卵巢癌组织中的表达及其与化疗耐药的关系
目的 探讨上皮性卵巢癌中糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白(GILZ)、Y-盒结合蛋白1(YB-1)和P-糖蛋白(P-gp)的蛋白表达,分析其与卵巢癌化疗耐药的关系.方法 2005年3月至2012年2月在大连医科大学第一、第二附属医院采用免疫组织化学SP法检测85例上皮性卵巢癌,30例卵巢良性肿瘤和12例正常卵巢组织中GILZ、YB-1和PGP的蛋白表达情况,并结合临床病理资料进行综合分析.结果 GILZ、YB-1和P-gp在上皮性卵巢癌中表达阳性率分别为51.8％、48.2％和47.1％,在卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织中均未见表达,差异有统计学意义(P＜0.01).YB-1和P-gp在Ⅲ～Ⅳ期上皮性卵巢癌中的表达高于Ⅰ～Ⅱ上皮性卵巢癌中的表达(P＜0.05).GILZ、YB-1和P-gp三者相关,GILZ与YB-1,r =0.344;P-gp与GILZ,r =0.437;P-gp与YB-1,r=0.570(P均＜0.01).44例GILZ蛋白阳性表达者中18例为化疗耐药,41例GILZ蛋白阴性表达者中6例为化疗耐药,差异有统计学意义(P＜0.05).41例YB-1蛋白阳性表达者中17例为化疗耐药,44例YB-1蛋白阴性表达者中7例为化疗耐药,差异有统计学意义(P＜0.05).40例P-gp蛋白阳性表达者中17例为化疗耐药,45例P-gp蛋白阴性表达者中7例为化疗耐药,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 GILZ、YB-1和P-gp可能参与了卵巢癌的发生、发展过程.3种蛋白在卵巢癌化疗耐药中发挥一定作用,独立或联合检测可能预测化疗的敏感性.
关键词： 卵巢肿瘤 糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白 Y-盒结合蛋白1 P-糖蛋白 化疗耐药 -
Y-盒结合蛋白1对白血病K562细胞多药耐药基因-1表达的调控
目的: 观察多柔比星诱导K562细胞多药耐药基因-1(mdr1)基因表达过程中Y-盒结合蛋白1(YB-1)表达和核易位的变化情况,初步探讨YB-1蛋白对mdr1基因的转录调控.方法: 多柔比星间歇性长期作用于K562细胞,剂量逐渐增加.RT-PCR检测mdr1,YB-1基因表达,流式细胞仪检测mdr1基因编码的P糖蛋白(P-gp)表达,蛋白质印迹检测YB-1蛋白核易位.通过RNA干扰技术使K562细胞中YB-1基因表达沉默,多柔比星处理YB-1基因沉默细胞,RT-PCR、流式细胞仪分别检测mdr1 mRNA和P-gp的表达.结果: 经多柔比星作用后K562细胞mdr1基因转录上调,P-gp表达增加,同时YB-1基因转录也增强,且出现明显的核易位.YB-1基因沉默后,mdr1基因诱导性表达减少.结论: 多柔比星诱导K562细胞mdr1基因表达的过程中,YB-1对于mdr1基因的转录活化起一定的作用.
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YB1和CD44在上皮性卵巢癌中的表达及其与铂类耐药的关系
目的：：检测上皮性卵巢癌中Y-盒结合蛋白1(YB-1)和黏附分子CD44的表达，分析其与卵巢癌化疗耐药的关系。方法：采用免疫组化SP法分别检测YB-1及CD44蛋白在铂类耐药或敏感的上皮性卵巢癌及正常卵巢组织中的表达情况，实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot法分别检测上皮性卵巢癌顺铂敏感与耐药细胞中YB1及CD44 mRNA与蛋白水平，分析两者表达的相关性。结果：YB-1和CD44在上皮性卵巢癌组织中阳性率分别为56.3%和60.9%，耐药组织中表达均明显高于敏感组织，且两者表达呈正相关(r=0.456)；顺铂耐药上皮性卵巢癌细胞株中YB-1和CD44 mRNA及蛋白水平明显高于敏感株(P均<0.05)。结论：YB-1和CD44与上皮性卵巢癌铂类耐药相关，独立或联合检测可能预测化疗的敏感性。
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YB-1基因沉默抑制前列腺癌细胞的增殖和迁移
目的：探讨RNA干扰沉默Y-盒结合蛋白1（YB-1）对前列腺癌细胞株PC-3细胞增殖和侵袭力的影响。方法将YB-1 siRNA（pGenesil-1-YB-1-1、pGenesil-1-YB-1-2质粒）用脂质体转染PC-3细胞（转染组），以逆转录-PCR（RT-PCR）和蛋白质印迹法（Wesretn blotting）分别检测YB-1 mRNA和蛋白的表达，3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）比色法和Transwell小孔实验检测PC-3细胞的增殖和侵袭力。结果与质粒对照组相比，转染组YB-1 mRNA 和蛋白的表达水平明显降低（P＜0．05）。重组质粒pGenesil-1-YB-1-1和pGenesil-1-YB-1-2组mRNA的抑制率分别达36．23％和39．42％，YB-1蛋白的抑制率分别达41．56％和55．33％。与正常对照组相比，转染组细胞增殖明显抑制（ P＜0．05），转染处理的穿膜细胞数明显减少（P＜0．05）。结论 RNA干扰沉默YB-1基因表达降低了前列腺癌细胞的增殖和迁移能力。
