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TrkA基因的表达抑制神经母细胞瘤血管生成的实验研究
目的:探讨TrkA基因通过抑制神经母细胞瘤(NB)血管生成而阻止其生长、转移的可行性.方法:常规培养对照组SY5Y细胞、TrkA基因高表达的实验组细胞(SY5Y-TrkA)和表达载体基因的空载体组细胞(SY5Y-Vec);比较三组细胞的裸鼠皮下致瘤性:通过RT-PCR、免疫组织化学、微血管面积计算检测并比较三种细胞所致的肿瘤瘤体内血管生成情况.结果:SY5Y-Trk A细胞在裸鼠皮下的致瘤性和其所致肿瘤的血管生成能力明显下降.肿瘤终体积:对照组1.736±0.485cm3,空载体组1.803±0.751cm3,实验组0.3945±0.015cm3(P＜0.01);对照组与实验组相比,血管内皮生长因子(VEGF)的表达差别显著(P＜0.01);微血管密度(MVD):对照组27.2l±14.58,空载体组27.76±14.15,实验组4.08±4.72(P＜0.01).结论:TrkA基因能有效抑制神经母细胞瘤的血管生成和肿瘤生长,为应用基因抗血管治疗神经母细胞瘤提供理论依据.
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trkA基因表达在神经母细胞瘤合成及分泌血管内皮生长因子中作用的研究
目的:观察trkA基因在神经母细胞瘤(NB)中表达对NB合成、分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法:采用脂质体转染法建立trkA基因高表达的NB细胞系; RT-PCR、免疫细胞化学及ELISA技术检测转染前后细胞中VEGF量的变化.结果:trkA转染后细胞中的VEGF mRNA及VEGF蛋白表达较亲代SY5Y细胞均明显下降(P均＜0.01);细胞培养上清液中的VEGF含量也明显下降(P＜0.01).结论:trkA基因的高表达有效抑制NB细胞合成、分泌VEGF,为抗血管治疗NB提供新思路.
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TrkA基因修饰、诱导神经干细胞分化为胆碱能神经元
目的 研究外源性TrkA基因修饰C17.2神经干细胞,对神经干细胞定向分化的影响. 方法 采用脂质体法将携带有TrkA基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/TrkA转染C17.2神经干细胞,Western blot观察转染后基因表达情况;将正常生长的C17.2神经干细胞随机分成两组(A组和C组),将重组质粒转染阳性的C17.2神经干细胞随机分成两组(B组和D组),并用100ng/mL神经生长因子(NGF)分别作用于C组及D组,应用间接免疫荧光染色方法,观察各组细胞胆碱乙酰转移酶(ChAT)的表达. 结果 Western blot结果显示转染组TrkA蛋白表达明显高于非转染组,说明外源性TrkA基因导入靶细胞,并实现蛋白表达;间接免疫荧光染色显示,经NGF孵育的转染组细胞(D组)约有26%呈ChAT阳性,而非转染组(C组)约为9%,未经NGF孵育的A、B组未观察到ChAT阳性细胞. 结论 应用外源性TrkA基因修饰神经干细胞,造成TrkA基因过度表达,在NGF作用下,可以诱导更多的神经干细胞向胆碱能神经元分化.
