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CD133+U87人脑胶质瘤干细胞放射敏感性和DNA双链断裂损伤修复的实验研究
目的 探讨CD133+ U87人脑胶质瘤干细胞放射敏感性及DNA双链断裂损伤修复的情况.方法 选择人脑胶质瘤U87细胞系,采用免疫流式分选技术分选出CD133+、CD133-细胞；采用克隆形成实验研究细胞的放射敏感性；采用中性单细胞凝胶电泳实验检测4GyX射线垂直照射后不同时间点的DNA双链断裂；采用间接免疫荧光技术检测不同时间点磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)荧光灶、Rad51(一种同源重组修复蛋白)荧光灶的表达.结果 假照射条件下,CD133+细胞克隆的形成率明显高于CD133-细胞(t=3.66,P＜0.01)；CD133+细胞经4 Gy照射后的克隆形成率无明显变化(t=0.71,P＞0.05),而CD133-细胞经4 Gy照射后的克隆形成率下降(t=2.91,P＜0.05).4 Gy照射后0.5 h,CD133+、CD133-细胞间尾力矩差异无统计学意义(t=1.44,P＞0.05),照射后6、24 h,CD133+细胞尾力距下降程度大于CD133-细胞(t=5.31和8.09,P＜0.01)；照射后0.5、6h,CD133+、CD133-细胞间γ-H2AX灶的表达率差异均无统计学意义(t=0.12和0.99,P＞0.05),照射后24 h,CD133+细胞的γ-H2AX灶的表达率下降程度大于CD133-细胞(t=4.99,P＜0.01)；照射后0.5 h,CD133+、CD133-细胞间Rad51灶的表达率差异无统计学意义(t=1.12,P＞0.05),照射后6、24 h,CD133-细胞的Rad51灶的表达率与CD133+细胞相比明显下降(t=22.88和12.43,P＜0.01),而CD133+细胞无明显变化.结论 CD133+U87人脑胶质瘤干细胞具有放射抵抗性,可能与其照射后DNA双链的断裂修复能力较高有关.
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Ku70对同源重组修复蛋白Rad51的调节作用
目的 研究非同源末端连接(NHEJ)蛋白Ku70对同源重组(HR)修复蛋白Rad51的调节作用,初步探讨HR与NHEJ间协同作用的机制.方法 采用Western blot法观察特异性增高和降低Ku70蛋白水平后Rad51蛋白表达水平的变化情况.结果 靶向Ku70基因小干扰RNA(siRNA)单纯转染组Rad51蛋白的表达水平较空白对照组明显下降；Ku70高表达载体PGCsi3.0-hKu70转染肿瘤细胞后,随着Ku70表达水平的升高,Rad51水平也随之升高.结论 Ku70可能对Rad51有正调控作用,NHEJ可能通过Ku70对Rad51的调节来实现其与HR的协同作用.
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DNA损伤同源重组修复相关蛋白在软组织平滑肌肉瘤中的表达及其预后意义
[目的]探讨DNA损伤同源重组修复相关蛋白在软组织平滑肌肉瘤(leiomyosarco-ma,LMS)中的表达及其预后意义.[方法]采用免疫组化SP法检测61例LMS中RAD51重组酶(RAD51)、RAD52同源性DNA修复蛋白(RAD52) 、ATM丝氨酸/苏氨酸(ATM)及ATR丝氨酸/苏氨酸(ATR)的表达.[结果]61例LMS患者的1年、5年和10年生存率分别为87％、46％和19％;中位生存期(overall survival,OS)为44.7个月,中位无病生存期(disease-free sur-vival,DFS)为30.3个月,中位无进展生存期(progress-free survival,PFS)为17.0个月.LMS中RA D51、RAD52、ATM及ATR的阳性表达率分别为45.9％ (28/61)、62.3％(38/61)、16.4％(10/61)和60.7％(37/61).Kaplan-Meier分析显示RAD51,RAD52,ATM和ATR是影响LMS患者OS的重要因素(P＜0.05).Cox回归分析显示RAD52、ATM和ATR是影响LMS患者OS的独立预后因子(P＜0.05).此外,ATM是LMS患者DFS的独立影响因子(P＜0.05),而RAD52是PFS的独立影响因子(P＜0.05).[结论] DNA损伤同源重组修复相关蛋白RAD52、ATM和ATR可作为评估LMS预后的独立因子.
