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离体再生文献资料
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159 洋金花离体再生枝中的甾类化合物
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鱼腥草离体再生及农杆菌介导的遗传转化
[目的]建立鱼腥草离体再生系统和农杆菌介导的遗传转化方法.[方法]以鱼腥草叶片为外植体置于不同激素配比的MS培养基上,进行愈伤组织诱导和分化再生.以根癌农杆菌EHA105/pCAMBIA1305.2进行转化,将外源GUS(β-葡萄糖醛糖苷酶)基因、潮霉素抗性基因转入鱼腥草,以组织化学染色法检测GUS活性,以聚合酶链反应(PCR)法鉴定基因组中的GUS基因.[结果]MS培养基中添加0.1 mg/L α-奈乙酸(NAA)、2.0 mg/L 6-苄基腺嘌呤(6-BA)、0.5 mg/L呋喃氨基嘌呤(KT)适于以鱼腥草叶片为外植体进行离体再生,出芽率达96.7%.潮霉素作为筛选试剂,使用浓度为2.5 mg/L;头孢霉素作为抑菌剂,使用浓度为250 mg/L.经感染的外植体中GUS反应呈阳性的占75.0%,8周统计抗性芽比率5.5%,PCR分析表明GUS基因已整合到鱼腥草基因组中.[结论]通过鱼腥草离体培养条件的研究及根癌农杆菌介导的遗传转化,获得了较高的离体再生率,实现了鱼腥草的遗传转化.
