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PCGF1文献资料
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利用CRISPR/Cas9系统构建PCGF1基因敲除MCF7稳定细胞系
[目的]构建PCGF1 (Polycomb Group Ring Finger 1)基因敲除的MCF-7稳定细胞系.[方法]以PCGF1序列为模板,设计sgRNA干扰序列,两端加入载体连接序列.通过DNA片段合成所需sgRNA序列.退火形成oligo二聚体序列后,使用T4 DNA连接酶重组干扰序列与pCAG-T7-Cas9-pgk-Puro-T2A-GFP质粒.测序鉴定后,将pCAG-T7-Cas9-gRNA-pgk-Puro-T2A-GFP重组载体通过脂质体转染MCF7细胞系.通过嘌呤霉素进行阳性克隆筛选,Western blotting检测PCGF1表达.[结果]测序结果显示构建的重组载体序列正确.转染筛选后,western blotting验证构建的MCF7细胞系PCGF1表达明显降低.[结论]利用pCAG-T7-Cas9-pgk-Puro-T2A-GFP质粒,成功构建PCGF1敲低载体.转染MCF7细胞系,通过嘌呤霉素筛选和westernblotting验证得到PCGF1稳定敲低的MCF7细胞系.
关键词: 乳腺癌 MCF7 PCGF1 CRISPR/Cas9