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跨学科融合创新性实验在医学生物学实验教学中的应用
将免疫组织化学两步法经跨学科设计改良后,应用于传代培养肺鳞癌细胞生长因子受体蛋白7(Grb7)的定性定位实验中,并将该改良法在医学生物学实验教学中推广实施.据此,拓宽学生跨学科学习医学理论知识的视野,加强学生实际操作动手能力,提升学生发现问题、分析问题、解决问题的综合实力.
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外源性骨形态发生蛋白9转入肺鳞癌细胞对其活性的影响及作用机制
目的 观察骨形态发生蛋白(BMP)9对人肺鳞癌细胞株YTMLC-90迁移和侵袭能力的影响及其作用机制.方法 RT-PCR和Western印迹法检测YTMLC-90细胞和正常人支气管上皮细胞(NHBE)中BMP9 mRNA和蛋白表达水平;以转染重组腺病毒Ad-BMP9的YTMLC-90细胞为研究组,转染Ad-GFP为阴性对照组,未转染为空白对照组;采用划痕愈合实验检测3组细胞迁移能力,Transwell实验检测迁移和侵袭能力,同时检测迁移相关因子基质金属蛋白酶(MMP)2 mRNA和蛋白表达情况;Western印迹法检测3组细胞BMP-Smad信号通路中Smad 1/5磷酸化水平.结果 YTMLC-90细胞中BMP9 mRNA和蛋白表达量均明显低于NHBE细胞(P<0.05).Ad-BMP9转染YTMLC-90细胞后胞内BMP9蛋白表达量明显高于阴性对照组(P<0.01).空白对照组48 h的细胞划痕愈合率与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);研究组细胞划痕愈合率明显低于阴性对照组和空白对照组,穿过小室膜和基质胶的YTMLC-90细胞数均明显少于阴性对照组和空白对照组,MMP2表达量明显低于阴性对照组,MMP2 mRNA和蛋白表达量均明显低于阴性对照组(均P<0.05).YTMLC-90细胞高表达BMP9后其p-Smad 1/5表达量明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01).结论 外源性BMP9转入人肺鳞癌细胞株YTMLC-90可有效抑制其迁移和侵袭能力,激活BMP-Smad信号通路是该抑制作用的机制之一.
关键词： 骨形态发性蛋白 肺鳞癌细胞 BMP-Smad通路 -
抑制肺鳞癌细胞FANCM和USP1基因对顺铂的增敏效应
目的:研究抑制FANCM和USP1基因后,人肺鳞癌SK-MES-1细胞株FA/BRCA通路激活状态以及对顺铂敏感性的变化.方法:用脂质体转染试剂将FANCM-siRNA和USP1-siRNA分别和共转染于SK-MES-1细胞株,采用蛋白质印迹法测定转染后FANCM和USP1蛋白表达,并检测转染前后经DDP处理后细胞FANCD2蛋白单泛素化水平.免疫荧光染色检测胞核内FANCD2核聚小体表达.CCK-8法测定转染前后细胞生存率的变化;Annexin V/PI流式细胞术测定转染前后细胞凋亡率.结果:转染FANCM-siRNA和USP1-siRNA后,SK-MES-1细胞中FANCM和USP1蛋白表达均较转染前明显降低.转染FANCM-siRNA后经顺铂诱导的FANCD2单泛素化水平和核聚小体表达明显下调;转染USP1-siRNA后,顺铂诱导的FANCD2单泛素化水平和核聚小体形成明显增加;转染USP1-siRNA后细胞生存率和细胞凋亡率高于转染FANCM-siRNA,同时共转染USP1-siRNA+ FANCM-siRNA后细胞对顺铂的致敏效应与转染USP1-siRNA相似.结论:沉默FANCM和USP1基因后,通过阻断FA/BRCA通路,抑制其DNA修复功能,导致SK-MES-1细胞对顺铂的敏感性增高,其中沉默USP1基因的增敏效应更为明显.
