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转染细胞周期文献资料
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人剪切修复基因XPD对人肝癌SMMC-7721细胞中Ets-1和Cdk6基因的调控作用
目的:观察野生型人剪切修复基因XPD转染入人肝癌细胞SMMC-7721后,细胞内Ets-1和Cdk6基因的表达变化及对SMMC-7721肝癌细胞增殖的影响.方法:将人工合成的pEGFP-N2-XPD重组质粒通过Lipofectamine 2000TM转染SMMC-7721细胞.设重组质粒转染细胞SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD (XPD)组、空载质粒转染细胞SMMC-7721-pEGFP-N2(N2)组、脂质体组、无转染空白对照组.分别用逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测细胞中XPD、Ets-1、Cdk6基因mRNA和蛋白质的表达量,并用流式细胞仪检测细胞周期变化,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测各组细胞的增殖活力.结果:XPD组中的XPD的mRNA和蛋白质表达较其他3组明显增高(P＜ 0.001),而Ets-1、Cdk6 mRNA和蛋白质表达较其他3组明显减少(P＜ 0.001).转染pEGFP-N2-XPD重组质粒后细胞停滞在G1期,难于进入S期.转染了野生型XPD的SMMC-7721细胞增殖能力减弱.结论:XPD基因可能通过抑制Ets-1、Cdk6基因的表达影响肝癌细胞的生长.
