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乳糖酶缺乏
乳糖酶存在于小肠黏膜吸收细胞的刷状缘内,主要作用是使乳糖水解为葡萄糖和半乳糖,在乳糖的消化、吸收中起作用.乳糖酶缺乏是指小肠黏膜刷状缘乳糖酶数量不够或活性低下,如乳糖酶缺乏仅引起乳糖吸收障碍而无临床症状时,称为乳糖吸收不良;如还伴随腹胀、腹痛、腹泻、肠鸣和排气过多等一系列临床症状时,称为乳糖不耐受.现就乳糖酶缺乏分型、流行病学、基因多态性、临床特点、诊断和治疗等方面综述如下.
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含LacZ报告基因的腺病毒载体在体外培养类风湿关节炎滑膜细胞中表达的实验观察
目的观察含报告基因的腺病毒对体外培养的类风湿关节炎滑膜细胞的感染及其表达情况.方法将含LacZ报告基因腺病毒感染类风湿关节炎滑膜细胞,通过X-gal显色的方法观察腺病毒感染滑膜细胞后基因的表达情况,绘制感染效率曲线.结果腺病毒可以有效感染类风湿关节炎滑膜细胞,并表达携带的基因;报告基因,在一定范围内,腺病毒滴度越高,基因表达信号越强.结论腺病毒载体可以携带外源性基因在类风湿关节炎滑膜细胞中表达.
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bFGF发酵中以乳糖为诱导剂初探
重组牛碱性成纤维细胞生长因子(融合蛋白,bFGF)是被广泛应用的基因工程产品.在bFGF发酵生产中所采用的菌种含有乳糖操纵子,对抗生素具有抗性的工程菌.常用方法采用IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)做为诱导剂,可调节Lac启动子,使目的基因片段得以表达获得所需要的目的蛋白.
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用乳糖作为诱导剂进行重组蛋白的表达
目的研究用乳糖替代IPTG作为诱导剂进行重组蛋白的表达.方法以表达SARS刺突蛋白片段的工程菌BL21(DE3)/S为模型菌株,采用葡萄糖、甘油作为碳源,不同浓度的乳糖和异乳糖作为诱导剂,在摇瓶中进行表达实验.在40L发酵罐中进行验证.结果在摇瓶实验中,乳糖浓度大于0.5 mmol/L即可以很好地诱导目的蛋白的表达,表达量与IPTG诱导时相当;葡萄糖的存在可以抑制乳糖,但不能抑制异乳糖的诱导作用;使用甘油作为碳源,既不抑制乳糖,也不抑制异乳糖的诱导作用.在发酵罐实验中,诱导初始阶段葡糖糖的存在抑制乳糖的诱导作用.结论在以乳糖操纵子为调控手段的工程菌表达系统中,可以使用乳糖作为诱导剂,诱导阶段应采用非葡萄糖碳源.
