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miR-29b与Mcl-1蛋白表达的关系及其对肺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨miR-29b对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其与髓细胞白血病因子-1(Mcl-1)蛋白表达的关系.方法 采用实时定量PCR检测18例肺癌组织、癌旁正常组织以及人非小细胞肺癌株SPC-A1中miR-29b表达情况;Western blotting实验检测SPC-A1细胞中Mcl-1蛋白水平;双荧光素酶实验验证miR-29b与Mcl-1的相关性;MTT增殖实验检测miR-29b对SPC-A1细胞增殖能力的影响;细胞凋亡实验检测miR-29b对SPC-A1细胞凋亡的影响.结果 肺癌组织miR-29b表达水平低于癌旁正常组织(P＜0.05).miR-29b mimics组miR-29b的表达水平和细胞凋亡率高于对照组(P＜0.05),miR-29b inhibitor组低于对照组(P＜0.05).培养72 h和96 h时,miR-29b mimics组的增殖活性显著低于对照组(P＜0.05).培养96 h时,miR-29b inhibitor组的增殖活性明显高于对照组(P＜0.05).生物信息学软件预测结果显示,miR-29b与Mcl-1有类似的3'-UTR结合序列.双荧光素酶实验结果显示,转染miR-29b mimics后可以明显抑制Mcl-1的荧光素酶活性.miR-29b mimics组Mcl-1蛋白表达水平低于对照组(P＜0.05),miR-29binhibitor组高于对照组(P＜0.05).结论 miR-29b能抑制肺癌细胞增殖并诱导其凋亡,还能与Mcl-1的3'-UTR特异性结合,并抑制Mcl-1蛋白的表达活性.
关键词： 微RNA-29b 髓细胞白血病因子-1 肺肿瘤 细胞凋亡 细胞增殖 -
微RNA-29b对胃癌腹膜高转移潜能细胞系侵袭和增殖能力的影响
目的 研究miRNA 29b在胃癌细胞株GC9811及胃癌腹膜高转移潜能细胞株GC9811 P中的表达及其对细胞侵袭、增殖及凋亡能力的影响.方法 通过实时荧光定量PCR测定miRNA 29b在GC9811和GC9811 P细胞中的相对表达量.将GC9811细胞分3组,miRNA-29b下调组转染慢病毒LV miRNA 29b抑制子,阴性对照组转染空载体,未转染细胞作为空白对照组.将GC9811P细胞分3组培养,miRNA-29b上调组转染慢病毒LV-miRNA 29b,阴性对照组转染空载体,未转染细胞作为空白对照组.Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力,MTT实验检测细胞的增殖能力,平板克隆实验检测细胞的克隆形成能力,流式细胞术检测细胞的凋亡情况.实时荧光定量PCR检测胃癌细胞(GC9811-P、GC 9811、MKN28-M、MKN28-NM)中miRNA-29b与富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)基因较正常胃黏膜细胞GES的相对表达水平并进行相关性分析.两样本均数之间的比较采用两独立样本的t检验和SNK-q检验,3组样本均数之间的比较采用单因素方差分析.结果 GC9811P细胞中miRNA-29b的相对表达量(0.21±0.04)明显低于GC9811细胞(1.00±0.03,t=28.140,P＜0.01).GC9811细胞转染慢病毒LV-miRNA-29b抑制子后,细胞中miRNA-29b的表达(0.21±0.04)较阴性对照组(0.89±0.07)或空白对照组(1.00±0.04)明显降低(q=12.76、14.73,P均＜0.01),跨膜细胞数(274.33±9.03)较阴性对照组显著增多(110.67±13.69,t=9.981,P＜0.01),克隆形成能力明显增强(131.33±4.91比69.67±2.33,t=11.340,P＜0.01),MTT实验亦显示其增殖能力显著增强.GC9811-P细胞转染慢病毒LV miRNA-29b后,细胞中miRNA-29b的表达(4.08±0.20)较阴性对照组(1.15±0.05)或空白对照组(1.00±0.10)明显升高(q=21.73、22.81,P均＜0.01);跨膜细胞数(51.33±5.55)较阴性对照组(104.00±6.24)明显减少(t=6.305,P＜0.01),MTT实验亦显示其增殖能力明显减弱.细胞凋亡实验证实miRNA-29b具有促进细胞凋亡的趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05);胃癌细胞中miRNA-29b和SPARC mRNA的表达呈负相关(r=-0.97,P=0.03).结论 miRNA-29b在胃癌腹膜高转移潜能细胞系中低表达,对胃癌细胞的侵袭和增殖具有抑制作用,miRNA-29b可能成为抑制胃癌腹膜转移的一个新的靶点.
