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miR-29通过调节抗凋亡蛋白Mcl-1表达参与胃癌细胞多药耐药的发生
目的 研究miR-29在胃癌多药耐药细胞株[SGC7901/长春新碱(vincristine,VCR)及SGC7901/阿霉素(adriamycin,ADR)]及其亲本细胞(SGC7901)中的表达差异,探讨其在胃癌多药耐药发生中的作用及可能机制.方法 qRT-PCR检测miR-29在不同胃癌细胞系中的表达差异,通过细胞转染调控miR-29的表达水平,MTT法检测不同化疗药物对转染后胃癌细胞的IC50值变化;流式细胞术检测细胞凋亡及周期变化;并应用Western blot、双荧光素酶报告基因实验等方法探讨其可能机制.结果 SGC7901/VCR及SGC7901/ADR细胞中miR-29家族(miR-29a/b/c)相对表达量均显著低于其亲本细胞SGC7901(P＜0.05);MTT实验表明,下调miR-29表达后SGC7901细胞对不同化疗药物的IC50值显著增高(P＜0.05);而上调miR-29表达后SGC7901/VCR及SGC7901/ADR细胞对不同化疗药物的IC5o值则显著降低(P＜0.05);流式细胞术检测结果显示,miR-29表达变化可显著改变5-氟尿嘧啶诱导胃癌细胞的凋亡水平(P＜0.05);Western blot、双荧光素酶报告基因实验等证实髓细胞白血病因子-1 (myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)是miR-29直接调控靶基因.结论 miR-29表达下调是人胃癌细胞多药耐药发生的机制之一,其可能与负性调控抗凋亡蛋白Mcl-1表达有关.
关键词： miR-29 胃癌 多药耐药 凋亡 髓细胞白血病因子-1 -
miR-29b与Mcl-1蛋白表达的关系及其对肺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨miR-29b对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其与髓细胞白血病因子-1(Mcl-1)蛋白表达的关系.方法 采用实时定量PCR检测18例肺癌组织、癌旁正常组织以及人非小细胞肺癌株SPC-A1中miR-29b表达情况;Western blotting实验检测SPC-A1细胞中Mcl-1蛋白水平;双荧光素酶实验验证miR-29b与Mcl-1的相关性;MTT增殖实验检测miR-29b对SPC-A1细胞增殖能力的影响;细胞凋亡实验检测miR-29b对SPC-A1细胞凋亡的影响.结果 肺癌组织miR-29b表达水平低于癌旁正常组织(P＜0.05).miR-29b mimics组miR-29b的表达水平和细胞凋亡率高于对照组(P＜0.05),miR-29b inhibitor组低于对照组(P＜0.05).培养72 h和96 h时,miR-29b mimics组的增殖活性显著低于对照组(P＜0.05).培养96 h时,miR-29b inhibitor组的增殖活性明显高于对照组(P＜0.05).生物信息学软件预测结果显示,miR-29b与Mcl-1有类似的3'-UTR结合序列.双荧光素酶实验结果显示,转染miR-29b mimics后可以明显抑制Mcl-1的荧光素酶活性.miR-29b mimics组Mcl-1蛋白表达水平低于对照组(P＜0.05),miR-29binhibitor组高于对照组(P＜0.05).结论 miR-29b能抑制肺癌细胞增殖并诱导其凋亡,还能与Mcl-1的3'-UTR特异性结合,并抑制Mcl-1蛋白的表达活性.
关键词： 微RNA-29b 髓细胞白血病因子-1 肺肿瘤 细胞凋亡 细胞增殖 -
神经母细胞瘤组织中B淋巴细胞瘤-2和髓细胞白血病因子-1蛋白表达及意义
目的 探讨B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白和髓细胞白血病因子-1(myeloid cell leukemia 1,Mcl-1)蛋白在神经母细胞瘤组织中的表达及意义.方法 神经母细胞瘤患者40例为神经母细胞瘤组,神经节细胞瘤患者10例为对照组,均行手术治疗,采用免疫组织化学法检测2组手术切除瘤组织中Bcl-2、Mcl-1蛋白阳性表达情况,分析Bcl-2、Mcl-1蛋白阳性表达与神经母细胞瘤临床病理特征的关系.结果 神经母细胞瘤组组织中Bcl-2、Mcl-1蛋白阳性表达率(67.50％、60.00％)均高于对照组(10.00％、10.00％)(P＜0.05);神经母细胞瘤组Bcl-2、Mcl-1蛋白阳性表达率在年龄≥1岁(75.00％、66.67％)、有淋巴结转移(78.94％、68.42％)、中低分化者(72.72％、63.64％)高于年龄＜1岁(56.25％、50.00％)、无淋巴结转移(57.14％、52.38％)、高分化者(42.85％、42.85％)(P＜0.05);临床分期Ⅰ～Ⅱ期患者Bcl-2、Mcl-1蛋白阳性表达率(66.67％、61.11％)与Ⅲ～Ⅳ期患者(68.18％、59.09％)比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 神经母细胞瘤组织中Bcl-2、Mcl-1蛋白呈高表达,可能与神经母细胞瘤的侵袭、淋巴结转移有关.
关键词： 神经母细胞瘤 神经节细胞瘤 B淋巴细胞瘤-2 髓细胞白血病因子-1 -
人类肺癌组织中COX-2的表达及其与K-ras和Mcl-1表达的关系
背景与目的 环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)是花生四烯酸代谢限速酶的一个亚型,已发现COX-2与肿瘤的发生、发展和转移有关.本文旨在探讨肺癌组织中COX-2表达的临床病理学意义,及其与K-ras和Mcl-1表达的相互关系.方法 应用免疫组织化学染色及图像分析系统检测COX-2、K-ras和Mcl-1在101例肺癌及7例正常肺组织中的表达.结果 COX-2在非小细胞肺癌组织中高表达(P<0.05),以腺癌表达高;在周围型肺癌(P<0.05)及中晚期肺癌组织中高表达(P<0.05);并且COX-2的表达与K-ras和Mcl-1的表达呈正相关.结论 COX-2的表达与K-ras的基因突变和Mcl-1的表达上调有关,在肺癌的分化、进展过程中具有重要作用.
