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焦磷酸测序法检测结直肠癌患者k-ras基因突变
研究证明,k-ras癌基因的激活在CRC发生发展过程中起重要作用[1].k-ras基因常见的激活方式为点突变,其中90%以上的突变发生在1号外显子第12位密码子(野生型:GGT)和第13位密码子(野生型:GGC)[2],突变率约30%～49%[3].近年来,k-ras基因是否突变已成为西妥昔单抗能否用于CRC分子靶向治疗的用药评判标准[4].因此,如何快速准确检出k-ras 基因突变对这类药物的应用及疗效预测显得尤为重要.焦磷酸测序法是一种酶促级联测序技术,特别适用于SNP常规检测[5].
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胰腺癌反义K-ras癌基因片段的分离和克隆
目的:分离及克隆胰腺癌基因组中K-ras基因片段,构建重组反义K-ras癌基因逆转录病毒载体,并探讨其意义.方法:设计2对PCR引物,分别在上下游引物中引进BamHI和EcoR I位点,以胰腺癌细胞株BxPC-3基因组DNA为模板扩增K-ras基因外显子1及侧翼序列,并采用重组DNA技术将目的基因插入逆转录病毒载体LZRSpBMN-Z中,并经菌液PCR和限制性内切酶酶切鉴定.结果:K-ras基因外显子1及侧翼序列已成功地克隆人LZRSpBMN-Z中.结论:LZRSpBMN-Z是胰腺癌反义基因治疗中新型候选载体之一.应用PCR方法获取反义K-ras目的基因外显子1方便可行,可用于重组反义K-ras癌基因逆转录病毒载体的构建.
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结直肠癌患者组织与粪便中K-ras癌基因12位点突变的分析
目的探讨结直肠癌(CRC)患者的组织与粪便中K-fas癌基因12位点突变检测结果的联系及检出率差异,为建立结直肠癌早期筛检方法提供科学依据.方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法对45例原发性结直肠癌患者手术切除的组织及术前粪便标本中K-ras癌基因12位点的突变情况进行检测,结果采用卡方检验及卡柏值(Kappa value)进行统计分析.结果癌组织、远端手术切缘粘膜、粪便标本中的K-fas癌基因12位点突变检出率分别为35.56%(16/45)、4.44%(2/45)、37.78%(17/45).癌组织与粪便标本检测结果的关联检验为:x2=33.09,P＜0.01;差别检验为:x2=0,P＞0.05;观察一致率为93.33%,卡柏值为0.86.结论粪便中K-ras癌基因12位点突变检测结果与癌组织的检测结果存在联系,其检出率无显著性差异,可靠性极好;且粪便取材方便,无创伤性,可能作为结直肠癌高危人群的筛检方法.
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人类肺癌组织中COX-2的表达及其与K-ras和Mcl-1表达的关系
背景与目的 环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)是花生四烯酸代谢限速酶的一个亚型,已发现COX-2与肿瘤的发生、发展和转移有关.本文旨在探讨肺癌组织中COX-2表达的临床病理学意义,及其与K-ras和Mcl-1表达的相互关系.方法 应用免疫组织化学染色及图像分析系统检测COX-2、K-ras和Mcl-1在101例肺癌及7例正常肺组织中的表达.结果 COX-2在非小细胞肺癌组织中高表达(P<0.05),以腺癌表达高;在周围型肺癌(P<0.05)及中晚期肺癌组织中高表达(P<0.05);并且COX-2的表达与K-ras和Mcl-1的表达呈正相关.结论 COX-2的表达与K-ras的基因突变和Mcl-1的表达上调有关,在肺癌的分化、进展过程中具有重要作用.
