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微小RNA-26b在乳腺癌中的作用及其分子机制研究
目的 研究微小RNA-26b(miR-26b)在乳腺癌和正常乳腺组织中的表达以及对乳腺癌MBA-MD-231细胞增殖的影响,并分析其可能的机制.方法 选取上海市同济大学附属第十人民医院甲乳外科2010年1月-2012年5月行手术治疗的38例女性乳腺癌患者的乳腺癌组织,并取距离肿瘤组织＞5 cm正常乳腺组织.运用荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测乳腺癌组织和正常乳腺组织中miR-26b的表达量.运用MTT法分析miR-26b对乳腺癌MBA-MD-231细胞增殖的影响,采用50、100 nmol/L miR-26b mimics转染为50 nmol/L组和100 nmol/L组,脂质体处理为空对照组,小分子RNA片段转染为负对照组,转染后24、48、72、96 h分别测定细胞相对增殖情况.通过TargetScan软件寻找miR-26b可能靶基因[前列腺素内过氧化物酶2(PTGS-2)],并应用荧光素酶报告实验和Western blotting技术进行验证.结果 乳腺癌组织中miR-26b ΔCt为(15.25±0.98),正常乳腺组织中为(12.37±1.23),正常乳腺组织中miR-26b表达水平为乳腺癌组织的7.33倍,乳腺癌组织中miR-26b表达低于正常乳腺组织(t=12.21,P=0.007).MTT实验结果显示,50 nmol/L组、100 nmol/L组、空对照组和负对照组转染后72、96 h相对细胞增殖比较,差异均有统计学意义(F值分别为11.037和5.470,P值分别为0.003和0.024);其中转染后96 h 50 nmol/L组较空对照组降低(q=-3.048,P=0.038);转染后72 h和96 h 100 nmol/L组较空对照组降低 (q值分别为-3.248和-4.254,P值分别为0.031和0.013).荧光素酶报告实验结果显示,PTGS-2组、突变体对照组及空载体对照组荧光素酶活性比较,差异有统计学意义(F=99.88,P=0.000);其中PTGS-2组较突变体对照组和空载体对照组降低(q值分别为-10.314和-12.108,P值分别为0.000和0.000).Western blotting结果显示,与空对照组和负对照组相比,实验组PTGS-2 mRNA和蛋白的表达量明显减少.结论 miR-26b在乳腺癌组织中呈低表达,其可能通过作用于下游基因PTGS-2抑制乳腺癌细胞的增殖,miR-26b在肿瘤发生发展中可能担任着抑癌基因的角色.
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卵巢癌组织中miR-26 b的表达变化及其意义
目的 探讨卵巢癌组织微小RNA-26b(miR-26b)表达变化及其与卵巢癌患者临床病理参数、预后的关系.方法 选取93例卵巢癌患者为观察组、30例良性子宫肌瘤患者为对照组,取其手术切除卵巢癌组织或正常卵巢组织,采用实时荧光定量PCR法检测miR-26b相对表达量.分析观察组卵巢癌组织miR-26b相对表达量与患者临床病理参数(年龄、病理类型、腹水量、腹水细胞学检查结果、FIGO分期、组织分化程度、远处转移)的关系.对观察组卵巢癌患者进行Kaplan-Meier生存分析,比较miR-26b高、低表达者的5年生存率和生存时间.结果 观察组、对照组miR-26b相对表达量分别为0.34 ±0.12、1.13 ±0.11,两组miR-26b相对表达量相比,P<0.05.观察组卵巢癌组织miR-26b相对表达量与患者年龄、病理类型无关(P均>0.05),与患者腹水量、腹水细胞学检查结果、FIGO分期、组织分化程度、远处转移有关(P均<0.05).miR-26b高、低表达者5年生存率分别为77.78%(35/45)、54.16%(26/48),二者5年生存率相比,P<0.05.miR-26b高、低表达者生存时间分别为(54.09 ±2.00)、(44.54 ±2.78)个月,二者生存时间相比,P<0.05.结论 卵巢癌组织中miR-26b低表达.检测卵巢癌组织miR-26b有助于判断患者病情和评估预后.
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miR-26b对不同分化状态神经干细胞系C17.2向肝细胞生长因子趋化迁移的影响观察
目的 观察微小RNA-26b(miR-26b)对不同分化状态神经干细胞(NSCs)系C17.2向肝细胞生长因子(HGF)趋化迁移的影响.方法 ①HGF刺激下不同分化状态NSCs细胞miR-26b检测取C17.2细胞,置于含N2和F12的诱导分化培养基中诱导分化.将细胞分为A、B、C、D组,A、B、C组分别于诱导分化12、24、72 h三个时间点终止诱导分化,D组为诱导分化前的细胞.采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞miR-26b.将诱导分化培养基更换为含25 ng/mL的HGF完全培养基,孵育5 h,每组均设相应对照,予无HGF的完全培养基孵育5 h.检测各组细胞miR-26b.②抑制、过表达miR-26b对C17.2细胞向HGF的趋化迁移的影响取对数生长期C17.2细胞,分为两组,分别转染miR-26b mimic(促进miR-26b表达)、miR-26b NC(对照),将完全生长培养基更换为含N2和F12的诱导分化培养基,分别于诱导分化0、12、24、72 h时终止诱导分化,采用Transwell实验测算各分化时间细胞的迁移细胞率.取对数生长期C17.2细胞,分为两组,分别转染miR-26b inhibitor(抑制miR-26b表达)、miR-26b乱序对照(ConⅠ),将完全生长培养基更换为含N2和F12的诱导分化培养基,分别于诱导分化0、12、24、72 h时终止诱导分化,采用Transwell实验测算各分化时间细胞的迁移细胞率.结果 A、B、C、D组细胞miR-26b相对表达量分别为1.16±0.07、1.39±0.11、2.30±0.11、1.00±0.03,与D组比较,B、C组胞miR-26b相对表达量升高,P均<0.05.A、B、C、D组HGF处理5 h时细胞miR-26b相对表达量分别为2.02±0.43、2.28±0.35、2.50±0.41、2.21±0.23,A、B、C、D组未经处理细胞miR-26b相对表达量分别为1.21±0.12、1.47±0.21、2.30±0.20、1.00±0.04,与未经处理者比较,HGF处理5 h时A、B、D组细胞miR-26b相对表达量均升高,P均<0.05.与转染NC者比较,分化0、12、24、72 h时转染miR-26b mimic的细胞迁移率均升高(P均<0.05).与转染ConⅠ者比较,分化0、12、24、72 h时转染miR-26b inhibitor的细胞迁移率均降低(P均<0.05).结论 不同分化状态C17.2细胞miR-26b表达均上调.在HGF刺激下,促进miR-26b表达的C17.2细胞定向迁移能力更强.miR-26b可促进不同分化状态的C17.2细胞向HGF的趋化迁移.
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微小RNA-26b对前列腺癌细胞迁移和侵袭行为的影响
目的 观察上调微小RNA(miRNA,miR)-26b表达对前列腺癌细胞生物学行为的影响.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测miR-26b在5种前列腺癌细胞株和良性前列腺组织中的表达.将miR-26b模拟物和阴性对照miRNA分别转染至miR-26b表达低的LNCaP细胞.噻唑蓝(MTT)法检测miR-26b表达对LNCaP细胞的增殖能力,流式细胞仪检测其细胞凋亡率,细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验分别检测其细胞迁移和侵袭能力.结果 与良性前列腺组织比较,miR-26b在5种前列腺癌细胞株中均呈低表达,以LNCaP细胞株(0.214±0.019)为明显.同阴性对照组比较,转染miR-26b的LNCaP细胞miR-26b表达(65.597±11.426)增强310倍,其迁移细胞数[(29±3)个]和细胞穿膜数[(30±2)个]均较对照组的(158±16)个和(147±15)个显著减少,差异有统计学意义(P＜0.05),而其细胞增殖能力、细胞凋亡率和细胞周期则变化不明显.结论 miR-26b在前列腺癌细胞株低表达,上调前列腺癌细胞miR-26b的表达能够抑制前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力.
