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硫化氢对顺铂诱导近端肾小管上皮细胞凋亡的干预研究

杨波;倪倩;朱艳;赵欢顺;杨成;段绍斌;蒋云生

摘要: 目的 探讨硫化氢H2S对顺铂(DDP)诱导近端肾小管上皮细胞凋亡的干预作用.方法 研究分为阴性对照组、DDP组、DDP+硫氢化钠NaHS组.DDP组:DDP浓度为0、1、2、5、10、20和40 mg/L;DDP+NaHS组:NaHS浓度分别为0、0.2、0.4、0.5、0.8、1.0和2.0 mmol/L,加DDP(20 mg/L)共同作用.噻唑蓝(MTT)实验:DDP组、DDP+NaHS组与人近端肾小管上皮细胞株(HK-2细胞)共同培养,24 h后测光密度(OD)值.NaHS(0.5和1.0 mmol/L)加DDP(20 mg/L)与HK-2细胞共同培养24 h.4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI),Annexin V-FITC/PI染色通过显微镜观察各组细胞的形态学改变.Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测各组细胞凋亡率.结果 MTT实验:0、1、2、5、10和20 mg/L DDP浓度的OD值分别为(0.270±0.064)、(0.229±0.022)、(0.198±0.024)、(0.189±0.069)、(0.188±0.030)和(0.165±0.012),OD值随DDP浓度上升逐渐下降,在20 mg/L低于阴性对照组(P<0.05).20 mg/L DDP加浓度分别为0.2、0.4、0.5、0.8和1.0 mmol/L NaHS的OD值分别为(0.173±0.051)、(0.186±0.023)、(0.259±0.050)、(0.263±0.033)和(0.268±0.098),以上与浓度为20 mg/L DDP的OD值(0.153±0.017)比较,差异有统计学意义(P<0.05).DAPI、Annexin V-FITC/PI染色荧光显微镜显示,对照组HK-2细胞平均凋亡细胞数为(4.230±1.015),20 mg/L DDP影响下为(35.020±6.079),两者差异有统计学意义(P<0.05),DDP组高于阴性对照组.DDP+NaHS组在0.5和1.0 mmol/L的平均凋亡细胞分别为(22.550±2.912)和(9.780±2.063),差异有统计学意义(P<0.05),DDP+NaHS组低于DDP组.Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测,阴性对照组HK-2细胞凋亡率(5.167±0.612)%,在20 mg/L DDP影响下,为(31.598±1.014)%,细胞凋亡率增加(P<0.05).合用NaHS凋亡减少,在0.5和1.0 mmol/L的凋亡率为(18.375±2.239)% 和(11.636±1.233)%,差异有统计学意义(P<0.05),DDP+NaHS组低于DDP组.结论 NaHS对DDP导致的近端肾小管上皮细胞的凋亡有保护作用.

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