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血管内皮生长因子体外诱导CD34+造血干/祖细胞信号传导与转录活化因子的活化

叶枫;叶大风;谢幸;陈怀增;吕卫国

摘要: 目的通过对血管内皮生长因子(VEGF)诱导CD34+造血干/祖细胞内信号传导与转录活化因子(STAT)活化的研究,探索VEGF作用于CD34+造血干/祖细胞的分子机制及其信号传导途径.方法利用磁活化细胞分选系统(MACS)分离并纯化脐血CD34+造血干/祖细胞,体外以重组人细胞因子VEGF(50 ng/ml)持续刺激不同时间(0,15,30,45,60,90min)后,提取细胞总蛋白,用Western blot检测CD34+造血干/祖细胞内STAT-3和STAT-5磷酸化;免疫细胞化学鉴定CD34+造血干/祖细胞表面VEGF受体-2(VEGFR2)的表达,以及VEGF刺激不同时间后CD34+造血干/祖细胞内磷酸化STAT-3和STAT-5有无发生转核;采用能与VEGFR2特异性结合的七肽ATWLPPR封闭VEGF与VEGFR2的结合,Western blot观察STAT-3和STAT-5的磷酸化是否被相应阻断.结果Western blot检测结果显示,CD34+细胞在VEGF刺激下,STAT-3和STAT-5均发生了磷酸化,50 ng/ml VEGF作用15 min后,即可检测到磷酸化的STAT-3和STAT-5的表达,并分别在30和45 min时达到峰值;之后开始下降,到90 min时均已检测不到,不同刺激时间组间有显著性差异(P=0.0001).免疫细胞化学显示VEGF能诱导磷酸化STAT-3发生转核并且在作用30 min时为显著,不同刺激时间组间有显著性差异(P=0.0001),而磷酸化STAT-5在VEGF刺激的各时间组均未出现明显的转核现象(P>0.05).CD34+造血干/祖细胞表面有VEGF膜受体VEGFR2的表达,当ATWLPPR(80 μmol/L)特异性封闭VEGF与VEGFR2的结合后,STAT-3和STAT-5的磷酸化被完全阻断.结论STAT信号传导通路通过VEGFR2特异性的介导参与了VEGF在CD34+造血干/祖细胞内的信号传导.

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    关键词: 视神经炎 强的松
  • 小鼠大脑皮层层次特异表达基因天然反义转录物的筛选与鉴定

    作者:李萍;张靖;李爱花;王珊;谈小超;阴彬;彭小忠

    目的 筛选并鉴定小鼠大脑皮层发育过程中皮层层次特异表达的基因是否存在天然反义转录物(NAT).方法 对63个小鼠大脑皮层层次特异表达的基因进行生物信息学预测,筛选出31个可能存在NAT的基因,从小鼠脑组织及神经系统来源的细胞系提取总RNA,采用RT-PCR方法对筛选阳性基因进行鉴定并克隆到pGEM-T载体中进行测序.结果 31个经生物信息学预测的基因中,8个为NAT阳性.结论 小鼠大脑皮层发育过程中皮层层次特异表达的基因存在NAT,NAT可能通过调控编码基因影响小鼠皮层发育.

  • MUC4 mRNA在胰腺癌患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义

    作者:李晓辉;熊炯炘;王春友

    目的研究MUC4 mRNA在人胰腺癌患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义.方法采用逆转录实时PCR法检测20例胰腺癌、12例慢性胰腺炎患者及8例健康志愿者外周血单个核细胞中MUC4 mRNA的表达.结果MUC4 mRNA在慢性胰腺炎患者及健康志愿者外周血单个核细胞中无表达,20例胰腺癌患者中有12例表达,其阳性表达率(60%)明显高于慢性胰腺炎组及健康对照组(P均<0.01).MUC4 mRNA阳性表达率有随胰腺癌临床分期增加而逐渐增高的趋势,在临床TNM Ⅲ~Ⅳ期中的阳性表达率(76.92%)明显高于Ⅰ~Ⅱ期(28.57%)(P<0.05).结论胰腺癌患者外周血MUC4 mBNA的表达与临床分期具有高度相关性,可用于胰腺癌的早期诊断和鉴别诊断.

  • 79例儿童t(8;21)急性髓系白血病的核型及预后分析

    作者:陈玉梅;刘天峰;阮敏;邹尧;陈晓娟;郭晔;王书春;竺晓凡

    目的 调查儿童t(8;21)急性體系白血病(AML)的核型异常情况,评估缓解后治疗强度对预后的影响.方法 采用形态学、免疫学和细胞遗传学(MIC)方法对79例儿童t(8;21)AML患者进行检测确诊.诱导缓解治疗采用高三尖杉酯碱联合阿糖胞苷(HA)/柔红霉素联合阿糖胞苷(DA)/高三尖杉酯碱、阿糖胞苷和柔红霉素联合(HAD)方案.缓解后进行异基因造血干细胞移植或5~7疗程的联合化疗.结果 79例患儿中,55例(69.6%)有附加染色体异常,其中40例(50.6%)伴性染色体丢失,9例(11.4%)为del(9q),7例(8.9%)为复杂变异型t(8;21)异常.3例患儿染色体数量在90条以上且伴双重t(8;21)四倍体核型,预后均不良.1、2疗程完全缓解(CR)率分别力81.7%(49/60)和94.8%(55/58);3年无事故生存率、无病生存(DIS)率和总生存率分别为(26.2 ± 6.8)%、(31.3 ± 6.7)%和(27.6 ± 6.6)%;29例患儿缓解后治疗疗程数为5个或以上,其3年DFS率为(51.7 ± 9.3)%.单纯t(8;21)±性染色体丢失组与伴其他附加染色体异常组患儿的3年DFS率差异无统计学意义(P=0.36).大剂量阿糖胞苷组患儿的3年DFS率明显优于标准化疗组(66.7% vs.27.3%,P=0.03).结论 多数儿童t(8;21)AML患者伴有附加染色体核型异常,附加染色体核型异常对患儿生存没有不良影响.染色体数量在90条以上且伴双重t(8;21)四倍体核型少见,但预后不良.儿童伴t(8;21)AML治疗CR率高,远期疗效好.采用大剂量阿糖胞苷作为缓解后治疗能提高远期疗效.

  • 喉癌患者树突状细胞的体外培养与鉴定

    作者:冯云;谭会兵;苏华;张宝泉;李若凡;何维

    目的体外分离培养喉癌患者外周血来源的树突状细胞(DC),为DC接种治疗喉恶性肿瘤提供一定理论依据.方法从喉癌患者外周血分离贴壁的单个核细胞,加入GM-CSF和IL-4进行体外培养,以细胞免疫组化的方法鉴定DC的纯度,并行电镜观察;同时以混合淋巴细胞增殖反应判定DC的功能.结果体外培养1周后可得到大量悬浮、表面有毛刺的细胞,细胞免疫化学显示抗DC单克隆抗体阳性细胞占30%~60%.以喉癌组织粗制抗原负载DC,可激发自身混合淋巴细胞增殖反应.结论喉癌患者外周血经体外分离培养可得到纯度较高、功能正常的DC.

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