实验性精索静脉曲张大鼠血清及睾内睾酮的变化
摘要： 目的:研究精索静脉曲张(VC)大鼠模型对血清T和睾丸内T的影响.方法:通过部分结扎左肾静脉建立SD大鼠VC模型20只;假手术组SD大鼠20只为对照组.模型建立后4、8周取静脉血,并取部分睾丸组织匀浆提取上清液,放免法测定血清及睾丸内T浓度.结果:血清T:实验组4、8周与同期对照组相比有下降趋势,但没有统计学意义.双侧睾丸内T水平:实验组4周与对照组4周相比下降,但无统计学意义(P＞0.05);实验组8周与对照组8周相比下降,具有统计学意义(P＜0.01).结论: 在8周内实验性大鼠VC并没有引起血清T的降低,但可以导致双侧睾丸内T降低.
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低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸细胞内质网应激及PERK-CHOP信号通路的激活
目的:探讨低剂量电离辐射与小鼠睾丸细胞内质网应激的发生以及PERK-CHOP通路激活的相关性. 方法:健康雄性昆明小鼠随机分成时程-效应(75 mGy照射后0、3、6、12和24h)和剂量-效应(0、50、75、100和200 mGy照射后12 h)组,每组动物10只.采用H2O2和MDA试剂盒比色法检测其含量；利用实时定量逆转录PCR( quantitative RT-PCR)检测GRP78、PERK和CHOP mRNA；Western印迹和图像分析技术检测GRP78、PERK、磷酸化PERK( phosphorylated PERK,pho-PERK)和CHOP蛋白表达. 结果:小鼠经75 mGy全身照射后,睾丸组织中H2O2含量随时间延长而增加,MDA含量在3和6h稍有降低,而后随时间延长而增加,二者在12和24h较0h时显著增加(P＜ 0.05,P＜0.01)；除了GRP78 mRNA(3和24 h)和蛋白表达(6 h)分别在照射后有降低趋势外,GRP78( 12 h)、PERK(3、6、12和24 h)和CHOP( 12和24h)的mRNA表达较0h显著增加(P＜0.05,P＜0.01),GRP78(12和24 h)、pho-PERK(3、12和24h)和CHOP(3、6、12和24 h)的蛋白表达也都较0h显著增加(P＜0.05,P＜0.01),PERK蛋白表达则无明显变化规律.小鼠经50 ～ 200 mGy全身照射后12 h,睾丸组织中H2O2含量在50 ～ 100 mGy照射后随剂量增加而增加,200 mGy照射后则稍有降低,MDA含量随剂量增加而增加,而且H2O2含量(75和100 mGy)和MDA含量(75、100和200 mGy)显著高于0 mGy组(P＜0.05,P＜0.01)；除了GRP78mRNA表达在50和200 mGy照射后有降低趋势外,GRP78(75和100 mGy)、PERK(75、100和200 mGy)和CHOP(50、75、100和200 mGy)的mRNA表达都显著高于0 mGy组(P＜0.05,P＜0.01),GRP78(100和200 mGy)、pho-PERK(50、100和200 mGy)和CHOP(50、75、100和200 mGy)的蛋白表达也都显著高于0mGy组(P＜0.05,P＜0.01),而PERK蛋白表达则无明显变化规律. 结论:低剂量电离辐射能够诱导小鼠睾丸细胞发生内质网应激,并且激活PERK-CHOP信号通路.
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肾移植与血液透析治疗对尿毒症患者阴茎勃起功能影响的临床对照研究
目的:研究对比男性尿毒症患者接受肾移植与接受血液透析治疗勃起功能的变化及与生殖激素水平变化的关系. 方法:收集2009年5月至2012年1月在我院门诊进行随访的肾移植男性患者35例、血液透析治疗的尿毒症患者30例,应用国际勃起功能指数( IIEF-5)调查表、夜间勃起功能(NEVA)测定仪评估阴茎勃起功能,同时测定生殖激素水平. 结果:接受肾移植手术者勃起功能障碍(ED)患病率为51.4％,血液透析者ED患病率为73.3％ (P ＜0.05)；肾移植后的ED患者发病情况要明显轻于单纯血液透析的ED患者；肾移植中重度ED患者(25.7％)要明显少于单纯血液透析者(46.6％)；肾移植组中ED患者夜间阴茎勃起次数、勃起强度及持续时间均强于单纯血液透析组ED患者(P＜0.05)；接受肾移植患者较单纯血液透析血清睾酮水平上升[(4.32±1.37)vs (2.53 ± 1.12) ng/ml,P＜0.05],雌二醇[(19.57±2.29)vs (43.38±5.58) pg/m)]和催乳激素[(8.59±1.19)vs (17.22 ±3.31)mIu/ml]明显下降(P均＜0.05). 结论:肾移植受者肾功能良好时其总体勃起功能要优于单纯血液透析的尿毒症患者.
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带蒂阴囊正中皮瓣一期尿道下裂成形术的疗效分析
目的:总结带蒂阴囊正中皮瓣一期治疗各型尿道下裂的经验,提高一期治疗尿道下裂疗效. 方法:回顾分析本科室1993年5月至2010年12月收治310例各型(除冠状沟型)采用该术式治疗尿道下裂患者的临床资料,所有病例均随访6个月至2年. 结果:310例尿道下裂患者,手术治愈271例,治愈率为87.4％ (271/310),术后尿道发生尿屡39例,尿瘘发生率为12.6％,无其他并发症发生.术后尿瘘形成与尿道下裂分型、术后综合用药与否及成形皮管长度等因素有关,而与支架管留置时间无关.尿瘘患者瘘口多位于阴茎根部. 结论:对于除冠状沟型外的各型尿道下裂,该术式均是一种疗效可靠且简单易行的治疗方案,同时其术后处理也非常重要.
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左卡尼汀联合西地那非对雄性糖尿病大鼠生殖内分泌功能的保护作用
目的:初步探讨左卡尼汀与西地那非片在保护糖尿病(DM)大鼠生殖内分泌功能中的作用. 方法:40只体重为200 ～ 230 g的雄性SD大鼠随机均分为5组:A组为正常对照组,B组为DM大鼠模型组,C组为DM大鼠给予西地那非[5mg/(kg·d)]治疗组,D组为DM大鼠给予左卡尼汀[300 mg/(kg·d)]治疗组,E组为DM大鼠给予左卡尼汀[300 mg/(kg·d)]联合西地那非[5 mg/(kg·d)]治疗组.各组大鼠治疗6周后分别进行血睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)的检测. 结果:糖尿病大鼠治疗6周后,血清T,FSH、LH含量,A组:T为( 25.25±2.67) nmol/L,FSH为(5.78±0.61)IU/L,LH为(625.21 ±43.45) ng/L；B组:T为(9.63±1.71)nmol/L,FSH为(1.98 ±0.42) IU/L,LH为(479.89±27.62) ng/L:C组:T为(18.98±3.07)nmol/L,FSH为(5.08±0.33) IU/L,LH为(586.57 ±31.72) ng/L；D组:T为(16.18±2.65)nmol/L,FSH为(4.63 ±0.30) IU/L；LH为(540.78±25.52) ng/L;E组:T为(23.65 ±2.66) nmol/L,FSH为(5.59 ±0.48) IU/L,LH为(621.53 ±36.40) ng/L.各组血清T,FSH、LH含量之间比较,B组均显著低于A、C、D、E组(P均＜0.01)；C、D组均显著低于A、E组(P均＜0.05),而C、D组之间比较,差异均无显著性(P＞0.05)；E组与A组比较,差异也均无显著性(P＞0.05). 结论:西地那非片与左卡尼汀灌胃6周后均可增加DM大鼠血清T、FSH、LH的水平,而两者联合用药时,T、FSH、LH增加水平比单独用药更明显,显示联合用药在保护雄性DM大鼠生殖内分泌功能方面效果更佳.
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基于微流控芯片模拟生理状况下精子自然优选研究
目的:在微流控芯片上模拟生理状态下的精子与宫颈粘液相互作用过程,寻找一种自然的接近生理状态的精子优选方法. 方法:按功能构建微流控芯片,基于精子与宫颈粘液相互作用在芯片通道中模拟生理状态下的精子自然优选过程,进而实现对精子的优选,同时在芯片上集成实时精子检测池,通过计算机辅助精子分析系统(CASA)实时对精子的各项参数进行测定.本研究用微流控芯片法和常规上游法同时分析30例标本,并与分选前比较. 结果:分选前a+b级精子百分率为(29.78±11.24)％、正常形态精子百分率为(8.00±5.19)％、直线速度(VSL)为(18.89 ±4.90) μm/s、平均路径速度(VAP)为(26.84 ±5.13) μm/s、前向性(STR)为(70.15±7.61)％.常规上游法分选后各项参数相应为(71.65±11.18)％、(14.95±6.79)％、(24.14±5.95)μm/s、( 32.61±6.36) μm/s、(73.87±9.34)％.微流控芯片分选后各项参数相应为(92.37±6.33)％、(23.33±7.67)％、(34.03 ±16.78)μm/s、(38.73±16.40) μm/s、(84.91±12.56)％.芯片法与分选前比较,各参数差异有统计学意义(P均＜0.01)；与上游法比较,各参数差异亦有统计学意义(P均＜0.05). 结论:本研究在微流控芯片上模拟生理状态下精子与宫颈粘液的相互作用过程,实现了对精子的自然优选和实时检测.优选出的精子质量较分选前及上游法都有明显提高,为芯片上实现模拟生理状态下的受精过程奠定了基础.
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邻苯二甲酸二乙基己酯及代谢产物MEHP对幼鼠睾丸组织TGF-β1表达和端粒酶活性的影响
目的:观察邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)及代谢产物邻苯二酸-单-2-乙基己酯(MEHP)对幼鼠睾丸组织转化生长因子-β1(TGF-β1)表达和端粒酶活性的影响,探讨DEHP和MEHP损害生精功能可能的机制.方法:生后2周龄的Wistar雄性幼鼠96只,随机分8组,每组12只.随机选择1组行生理盐水[0.9％ NS0.2 ml/(kg·d),喂养3周]灌胃,作为正常对照组(NC组)；再选1组行环磷酰胺[CTX 100 mg/(kg·d),喂养1周]灌胃,作为阳性对照组(PC组)；余各组分别用DEHP、MEHP按低剂量[100 mg/(kg·d),喂养3周]、中剂量[ 200 mg/( kg·d),喂养2周]、高剂量[300 mg/(kg·d),喂养1周]灌胃制作动物模型.观察不同时期、不同剂量下睾丸组织精子形态变化,光镜下计数精子头部及畸形率；应用免疫组化SABC法及RT-PCR法检查睾丸组织TGF- β1的表达,并测定面密度；ELISA法检查睾丸组织中端粒酶活性. 结果:①睾丸组织内精子形态变化:用药组精子数量减少,出现精子断头、无钩、双尾等畸形精子；在光镜下精子计数,与NC组比较,用药各组精子头部显著减少(P＜0.05),畸形率增加(P＜0.05),但高剂量短时间用药组与低剂量长时间用药组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).②睾丸组织TGF-β1的表达变化:NC组低表达,DEHP及代谢产物MEHP染毒各组生精细胞内表达增多,PC组大量表达,阳性细胞呈黄褐色,主要分布于胞膜及胞质.NC组面密度为0.156 0±0.003 5、TGF-β1mRNA为1.51 ±0.20,PC组面密度为0.534 0±0.003 1、TGF- β1 mRNA为8.43 ±1.75；用药的DEHP组面密度均值为0.289 0±0.003 6、TGF- β1 mRNA为3.83 ±1.57,MEHP组面密度均值为0.284 0±0.003 1、TGF-β1 mRNA为3.51 ±1.41,用药各组与NC组、PC组比较差异有统计学意义(P＜0.01),但高剂量短时间用药组与低剂量长时间用药组比较,差异无统计学意义(P＞0.05)；③睾丸组织中端粒酶活性:与NC组比较,用药各组睾丸组织中端粒酶活性下降(P＜0.05),高剂量短时间用药组与低剂量长时间用药组比较,差异无统计学意义(P＞0.05). 结论:DEHP及代谢产物MEHP对幼鼠生精功能有明显损害,其损害机制可能与DEHP及代谢产物MEHP诱导睾丸组织TGF-β1的表达水平升高、端粒酶活性降低有关.
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体外诱导人脂肪干细胞向Leydig细胞定向分化的研究
目的:探讨体外诱导脂肪干细胞(ADSCs)向Leydig细胞分化的可能性和条件. 方法:应用Ⅰ型胶原酶消化法分离人皮下脂肪组织中ADSCs,原代培养,适时传代.免疫组化方法检测波形蛋白的表达.以人绒毛膜促性腺激素(hCG)不同浓度及不同作用时间进行诱导后,实时荧光PCR检测类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)基因的表达.MTT法测定hCG诱导下的细胞增殖情况.在hCG、DMSO诱导1周后行3β-HSD免疫组化染色,并采用放射免疫法检测其培养上清及细胞裂解液的睾酮水平. 结果:ADSCs增殖迅速,ADSCs波形蛋白呈黄褐色阳性表达；ADSCs中StAR基因的表达在一定范围内与hCG诱导浓度的增加成正相关,hCG 10 U/ml达到高峰,该浓度诱导1周内StAR表达随时间延长而增加；hCG诱导增加ADSCs细胞增殖；hCG 10 U/ml、DMS0 3.2×10-6mol/L条件下诱导1周后细胞中3β-HSD免疫组化染色可见胞质呈浅褐色弱阳性,且该条件下细胞裂解液睾酮测定值明显高于其它组. 结论:①hCG在一定范围内促进ADSCs的StAR基因表达；②hCG可以促进ADSCs增殖；③在hCG 10 U/ml、DMS0 3.2×10 -6mol/L诱导下,人ADSCs有向Leydig细胞分化的可能.
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13号染色体重排所致严重少弱畸形精子症患者生精细胞减数分裂分析
目的:探讨13号染色体长臂相互缺失所致严重少弱畸形精子症患者生精阻滞的可能机制. 方法:对1例13号染色体异常的严重少弱畸形精子症患者血液样本进行全基因组的寡核苷酸微阵列比较基因组杂交分析,以确定受累染色体的断裂点或基因缺失.对患者生殖细胞进行多色荧光原位杂交分析,以观察初级精母细胞13号染色体配对的情况. 结果:寡核苷酸微阵列比较基因组杂交技术显示在13q12.3上有连续4个探针的缺失(A_16_P19757882,A16_P02744617,A_14_ P108858和A_16_P02744687),覆盖59.93 kb,位于基因FLT1和POMP之间,没有注释基因存在.初级精母细胞的减数分裂分析显示同源13号染色体配对错误,13q14和13qter信号彼此分离. 结论:染色体重排导致的精子发生阻滞可能是由于生殖细胞第一次减数分裂同源染色体配对错误导致的.
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雄激素受体基因CAG多态性与迟发性性腺功能减退症的相关性研究
目的:研究雄激素受体基因(AR)重复序列(CAG)n多态性与迟发性性腺功能减退症(LOH)的关系,探讨LOH的发病机制. 方法:共调查1 000例40 ～ 70岁中老年男性,其中19例迟发性性腺功能减退症患者,随机抽取127例正常健康中老年男性,测定甘油三酯(TG)、空腹血糖(FBG)、血清总睾酮(TT)、游离睾酮(fT),测量身高、体重、腰围(WC)、血压,并采用DNA测序方法进行AR基因外显子1氨基端转录调节区(CAG)n重复序列长度测定,比较两组各指标之间的差异. 结果:(CAG)n重复次数为15～32( 23.05±2.95).正常健康中老年男性的体重指数(BMI)、FBG较LOH患者显著下降(P＜0.01),而TG、TT及fT较LOH患者显著升高(P＜0.01).正常健康中老年男性AR基因(CAG)n重复数为22.54±3.06；LOH患者AR基因(CAG)n重复数为23.23±2.24；LOH患者(CAG)n重复数略高于正常健康人群,但两者比较无统计学意义(P =0.946).(CAG)n重复长度显示:长组(n≥22)AR基因(CAG)n在LOH组和正常健康中老年男性组的频率分别为73.68％和48.82％ (P ＜0.05).相关分析显示:TT、fT与(CAG)n重复序列无明显相关性(r=0.04和r=0.025,P＞0.05). 结论:LOH男性AR基因(CAG)n重复序列呈现多态性,长(CAG)n重复多态可能是LOH发病的遗传因素,但仍需进一步扩大样本量证实.
关键词： 迟发性性腺功能减退症 雄激素受体基因 CAG重复序列 基因多态性 -
短时受精周期中多原核合子发生率与妊娠结局的关系
目的:探讨短时受精多原核合子发生率与妊娠结局的关系. 方法:回顾性分析本中心2008年1月至2010年12月共3 862例IVF短时受精治疗资料,按多原核合子发生比例分成无多原核、1％ ～ 10％、11％～20％、21％～30％、31％ ～ 50％、≥51％6组.分别比较6组患者的妊娠率、种植率、流产率. 结果:6组患者年龄、促性腺激素使用剂量、E2值、hCG注射日卵泡数(≥14 mm)、获卵数均无显著差异(P＞0.05).当多原核合子比例在0 ～ 10％时妊娠率、种植率均高于其他5组,当多原核合子比例≥51％时妊娠率、种植率均略低于其他5组,而流产率高于其他5组,但6组患者间的妊娠率、种植率、流产率均无统计学差异(P＞0.05). 结论:当多原核比例≥51％时,妊娠率、种植率有降低趋势,流产率有增高趋势,但差异无显著性,短时受精周期中多原核合子发生率对临床妊娠结局的影响有待进一步研究.
