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卵泡抑制蛋白对大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的影响
目的:探讨卵泡抑制蛋白(follistatin, FS)对离体大鼠睾丸间质细胞(Leydig cell)分泌睾酮的影响.方法:用Percoll梯度分离法分离和培养Wistar雄鼠(220～250 g)睾丸的Leydig细胞.分别观察FS(rhFS-288)、Ca2+以及FS加Ca2+在基础状态(不加hCG)和刺激状态(hCG 1.0IU/L)对Leydig细胞分泌睾酮的影响.结果:FS抑制基础和刺激状态的睾酮分泌,并与剂量相关.Ca2+亦有抑制作用,但在100mmol/L时出现逸脱现象.FS加Ca2+表现为与剂量相关的抑制作用.结果:FS呈剂量依赖性抑制睾酮分泌,Ca2+可能是FS的第二信使,单独高浓度Ca2+出现抑制逸脱的机制未明.
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维拉帕米对c-jun调节睾丸间质细胞睾酮分泌的影响
目的通过c-jun反义寡脱氧核苷酸(ASODNs)观察c-jun在调节人绒毛膜促性腺激素(hCG)诱导的睾丸间质细胞(LC)睾酮(T)分泌的作用. 方法采用c-jun ASODNs拮抗c-jun,维拉帕米阻断钙通道,hCG诱导体外培养大鼠LC的T分泌,放射免疫方法检测T水平. 结果c-jun ASODNs(0～2 μmol/L)呈剂量依赖性抑制hCG诱导的离体LC的T分泌(P＜0.01).维拉帕米(10-5mol/L)可加强c-jun ASODNs抑制T分泌. 结论c-jun促进hCG诱导大鼠LC的T分泌,c-jun表达可能与钙离子相关.
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壬基酚对原代培养大鼠间质细胞3β-HSD活性的影响
目的 探讨壬基酚对体外培养大鼠leydig细胞3β-HSD的影响.方法 建立体外培养大鼠leydig原代培养的方法,染壬基酚(0、0.1、1.0和10 μmol/L)24 h后,ELISA方法检测细胞上清液中睾酮及细胞内3β-HSD的含量,并运用反转录-聚合酶链反应( RT-PCR)的方法检测leydig细胞内3β-HSD mRNA的表达水平.结果 与对照组相比,在设计剂量范围内,随着染壬基酚剂量的加大,细胞培养液中睾酮3β-HSD的含量逐渐降低.1.0和10 μmol/L时,差异具有统计学意义(P＜0.05).细胞内3β-HSD含量不断降低,1.0和10 μmol/L时,细胞内该酶的降低有统计学意义(P＜0.05).3β-HSD的mRNA的表达水平逐渐降低,1.0和10μmol/L时,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 壬基酚可下调3β-HSD的mRNA的表达水平,降低细胞内3β-HSD的含量,抑制体外培养leydig细胞睾酮的合成.
关键词： 壬基酚 睾丸间质细胞 3β-羟基类固醇脱氢酶 睾酮 -
硫酸镍处理原代培养大鼠睾丸间质细胞某些生化指标的变化
目的 从氧化应激角度,探讨硫酸镍对体外培养大鼠睾丸间质细胞损伤的机制.方法 选择健康雄性Wistar大鼠,采用胶原酶消化以及Percoll分离液密度梯度离心法,经体外贴壁培养获得高纯度大鼠睾丸间质细胞.取对数生长期大鼠睾丸间质细胞,硫酸镍0、250、500和1 000μmol/L分别处理6、12和24 h后收集细胞,超声处理后离心取上清液,采用分光光度法检测过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活力,羟自由基(·0H)抑制能力以及丙二醛(MDA)含量.结果 硫酸镍各浓度组与对照组比较:硫酸镍染毒6h时,硫酸镍l 000 μmol/L组CAT活力显著降低(P＜0.01),硫酸镍500 μmol/L抑制羟基由基能力也开始降低(P＜0.01);染毒12h时,硫酸镍500 μmol/L组CAT活力开始下降(P＜0.01),各染毒组SOD活力和抑制羟基由基能力开始降低(P＜0.01);染毒24 h时,各染毒组CAT和SOD活力以及抑制羟自由基能力均降低,MDA含量升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 硫酸镍可致大鼠睾丸间质细胞抗氧化能力下降而致氧化损伤.
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硫酸镍对原代培养大鼠睾丸间质细胞DNA氧化损伤的研究
目的 探讨硫酸镍(NiSO4)致原代培养大鼠睾丸间质细胞DNA氧化损伤的作用.方法 选择健康成年雄性Wistar大鼠,采用胶原酶消化以及Percoll分离液梯度密度离心法,经贴壁培养获得高纯度大鼠睾丸间质细胞,采用3β-HSD法鉴定细胞纯度.取对数生长期的间质细胞,分别用浓度为0、250、500和1000μmol/L硫酸镍处理6、12和24 h.采用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平;分光光度法检测间质细胞抑制羟自由基能力(Anti-OH·),酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞内8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量.结果 经3β-HSD法鉴定,睾丸间质细胞纯度达95％以上.与对照组比较,250 μmol/L硫酸镍处理12h组和500、1000μmol/L硫酸镍各处理组,ROS水平均增高(P＜0.05);250μmol/L硫酸镍处理12和24 h组,以及500、1000 μmol/L硫酸镍各处理组,Anti-OH·均降低(P ＜0.05);500、1000μmol/L硫酸镍处理12和24 h组,8-OHdG含量均增加(P＜0.05).结论 硫酸镍致大鼠睾丸间质细胞DNA氧化损伤可能与其导致间质细胞Anti-OH·降低和ROS水平增加有关.
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硫酸镍对体外培养大鼠睾丸间质细胞毒作用的实验研究
目的 建立大鼠睾丸间质细胞体外分离、纯化和培养的方法,探讨不同浓度和时间硫酸镍对大鼠睾丸间质细胞的毒作用.方法 采用胶原酶消化、Percoll分离液密度梯度离心和差速贴壁法体外分离、纯化睾丸间质细胞,并采用3β-HSD染色法进行纯度鉴定.硫酸镍(NiSO4)0、62.5、125、250、500和1 000 μmol/L对分离纯化的睾丸间质细胞染毒,采用MTT比色法和乳酸脱氢酶(LDH)渗漏法观察染毒3、6、12、24、36和48 h后,睾丸间质细胞增殖和培养上清液中LDH活力的变化.结果 (1)纯化的睾丸间质细胞经3β-HSD特异性染色鉴定,纯度可达到95％以上.(2)相同时间NiSO4各浓度组与对照组比较:染毒12 h后,NiSO4各浓度组均出现间质细胞增殖抑制(P＜0.01)；染毒6h后,NiSO4各浓度组培养液中LDH活力均开始升高（P＜0.05或P＜0.01）.(3)相同浓度各染毒时间与对照组(0 h)比较:NiSO4 250μmol/L及其以上浓度组,各染毒时间均可抑制间质细胞增殖(P＜0.01).除NiSO462.5 μmol/L染毒3h组外,其他各浓度不同染毒时间LDH活力均明显升高（P＜0.05或P＜0.01）.结论 建立了较理想的体外分离、纯化和培养睾丸间质细胞的方法；镍对体外培养的睾丸间质细胞具有明显的毒作用,并呈现一定的剂量—效应和时间—效应关系.
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硫酸镍诱导体外大鼠睾丸间质细胞凋亡及其对c-kit和caspase-3基因表达的影响
目的 观察硫酸镍( NiSO4)诱导体外培养大鼠睾丸间质细胞凋亡及其c-kit和caspase-3 mRNA及蛋白表达的变化,探讨镍致睾丸间质细胞损伤的可能机制.方法 体外提取和纯化大鼠睾丸间质细胞,用0、250、500和1 000μmol/L NiSO4分别处理睾丸间质细胞,染毒时间分别为6、12和24 h.采用AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测睾丸间质细胞的凋亡发生率,实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测c-kit和caspase-3 mRNA及蛋白的表达水平.结果 (1) AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测结果显示,间质细胞凋亡主要发生于NiSO41000 μmol/L染毒12 h和NiSO4 250、500、l 000 μmol/L染毒24 h组.(2)实时荧光定量PCR结果显示:与对照组比较,染毒6 h NiSO4 250 μmol/L、染毒12hNiSO4 250和500 μmol/L c-kit mRNA相对表达量上调(P＜0.05)；染毒24 h NiSO4 500和l 000 μmol/L c-kit mRNA相对表达量下降(P＜0.05).NiSO4各浓度和各时间组caspase-3 mRNA相对表达量均上调(P＜0.05).(3)Western blotting结果显示:与对照组比较,NiSO4各浓度c-kit蛋白表达逐渐减弱,caspase-3蛋白表达逐渐上调,主要见于NiSO41 000 μmol/L染毒6h以及NiSO4各浓度分别染毒12和24 h.结论 NiSO4可诱导体外大鼠睾丸间质细胞凋亡,且与基因c-kit和caspase-3 mRNA及蛋白异常表达有关.
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MnCl2对体外培养Leydig细胞3β-HSD的影响
目的 探讨锰对体外培养Leydig细胞3β-HSD的影响.方法 建立体外培养大鼠Leydig细胞的原代培养方法,染锰(0、10、30和100 μmol/L)24 h后,原子吸收光谱法检测细胞内外锰的含量,ELISA方法检测细胞培养上清液中睾酮及细胞内外3β-HSD的含量,并运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测Leydig细胞3β-HSD mRNA的表达水平.结果 与对照组相比,在设计剂量范围内,随着染锰剂量加大,细胞培养上清液中睾酮及细胞内Mn的含量逐渐增加,30、100 μmol/L时,有统计学意义(P＜0.05).细胞内外3β-HSD的含量及3β-HSD mRNA的表达水平均在染锰10μmol/L时升高,之后不断降低,100 μmol/L时,有统计学意义(P＜0.05).结论 在该实验条件下,MnCl2可以改变3βHSD基因表达及蛋白合成,影响体外培养Leydig细胞合成睾酮.
关键词： 氯化锰 睾丸间质细胞 睾酮 3β-羟基类固醇脱氢酶 -
氟化钠对体外培养小鼠睾丸间质细胞凋亡与Bcl-2、Bax表达的影响
目的 观察氟化钠对体外培养小鼠睾丸间质细胞凋亡的影响,以及对睾丸间质细胞中Bcl-2和Bax表达的改变.方法 体外培养的小鼠睾丸间质细胞,将细胞分4组,加入不同浓度的氟化钠(0、5、10和20 mg/L),染毒0、24、48、72、96和120 h后采用MTT法检测各组细胞的增殖,并用免疫组织化学法检测氟化钠对小鼠睾丸间质细胞Bcl-2和Bax的表达.结果 氟化钠作用24和48 h后,20 mg/L氟化钠对睾丸间质细胞增殖率有明显抑制作用,而5和10 mg/L组没有明显影响;10 mg/L氟作用72 h后,明显抑制睾丸间质细胞的增殖;各浓度氟作用96和120 h后均表现明显抑制作用.与对照组比较,染氟组睾丸间质细胞凋亡显著增加(P＜0.01),Bax表达增加(P＜0.01),而Bcl-2表达减少(P＜0.01).结论 氟化钠对小鼠睾丸间质细胞的增殖有抑制作用,并诱导小鼠睾丸间质细胞凋亡.氟化钠影响体外培养小鼠间质细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达,证实了氟化钠对小鼠间质细胞的发育有毒性作用.
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重金属镉对原代培养大鼠睾丸Leydig功能的影响
目的近几年来,镉污染对雄性动物包括水生动物及人类生殖功能的潜在危害作用越来越为科学家酥厥?研究发现,镉中毒可以引起家畜尤其是雄性家畜繁殖功能下降,并且可能与人类男性"ED"(ErectileDysfunction,勃起功能障碍)的发生有关.为探索镉雄性生殖毒性的机制,本实验采用体外染毒的方法,研舅镉对原代培养大鼠睾丸间质细胞的影响.
关键词： 镉 睾丸间质细胞 3β-羟类固醇脱氢酶染色法 DNA损伤 -
迟发性性腺功能减退症的研究进展
随着全球老龄化进展的加速,各种与衰老相关的疾病越来越多地受到社会、家庭等各方面的关注.迟发性性腺功能减退症(LOH)给患者带来的严重困扰,更是成为近年研究热点.现在治疗LOH有效的途径是睾酮补充治疗(TST).对LOH行TST可以使骨骼的致密度得到加强和保持,使男性的肌肉量和身体力量得到增强,更加能促进性欲及增强性功能,使中老年男性的情绪和认知功能得到改善.但随之而来的一系列副作用也困扰着患者及医务人员.有鉴于此,很多学者希望能从生物源性睾酮补充来治疗老年男性LOH.目前,大部分学者已达成共识,睾丸间质细胞(LCs)的数量减少和功能减退是LOH的主要发病机制[1].关于新的诊断和治疗方法的研究层出不穷,骨髓间充质干细胞(BMSC)、睾丸间质干细胞及与其相关的研究更是成为近年研究的热点.
关键词： 迟发性性腺功能减退症 睾丸间质细胞 移植 睾酮 -
电针对睾酮低下老年大鼠睾丸间质细胞慢性炎性反应的影响
目的:探讨电针对睾酮低下老年大鼠睾丸间质细胞(L ey dig细胞)慢性炎性反应的影响及其抗雄性生殖衰老的可能机制.方法:SD老年大鼠随机分为电针组、药物组、老年对照组,每组8只,SD青年大鼠8只作为青年对照组.电针组取"肾俞""关元"穴予电针治疗,持续15min,每日1次,治疗5d休息2d,连续8周.药物组予腹部皮下注射丙酸睾酮注射液(7 mg·kg-1·3 d-1),连续8周.老年对照组和青年对照组给予腹部皮下注射0.9％ 氯化钠溶液,注射剂量及疗程同药物组.治疗前后观察大鼠力竭游泳时间,采用ELISA法检测大鼠血清睾酮(T T)和游离睾酮(FT)水平,免疫组化法检测Leydig细胞环氧化酶-2(COX-2)蛋白表达水平,Western blot法检测大鼠睾丸核因子-κB p 65(NF-κB p 65)、COX-2、白介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平.结果:与青年对照组比较,老年对照组力竭游泳时间及血清TT、FT水平降低(P<0.01);治疗后,电针组与药物组力竭游泳时间及血清TT、FT水平高于老年对照组(P<0.01).与青年对照组比较,老年对照组睾丸NF-κB p 65、COX-2及其下游炎性因子IL-1β、TNF-α表达明显上调(P<0.01);与老年对照组比较,电针组可显著下调睾丸NF-κB p 65、COX-2、IL-1β及TNF-α蛋白的表达水平(P<0.01).结论:电针能改善睾酮低下老年大鼠血清TT及FT含量,并能降低老年大鼠睾丸组织的炎性反应,这可能是改善雄性生殖衰老的机制之一.
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藏党参皂苷对睾丸间质细胞的影响及作用机制
目的:本研究以藏党参的正品长花党参Codonpsis thalictrifolia Wal1.为研究对象,对藏党参皂苷对睾丸间质细胞功能的影响进行了初步研究.方法:利用不同质量浓度的藏党参皂苷对大鼠睾丸间质细胞进行体外培养,并测定细胞分泌睾酮的含量,cAMP的含量以及MTT吸光度.结果:藏党参皂苷质量浓度为0.4 g·L-1时,可以显著升高体外培养的大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的含量(P＜0.05),提高cAMP的含量(P＜0.01),并降低MTT吸光度(P＜0.01).结论:藏党参总皂苷可使单个睾丸间质细胞的分泌能力增强,可能由PKA通路介导.
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天蚕壮阳散对中老年男性雄激素部分缺乏综合征模型大鼠睾丸间质细胞stAR蛋白表达的影响
目的 观察天蚕壮阳散对中老年男性雄激素部分缺乏综合征(partial androgen deficiency of aging male,PADAM)模型大鼠睾丸间质细胞中类固醇合成快速调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein,stAR蛋白)表达的影响.方法 以环磷酰胺造成生殖系统受损、雄激素部分缺乏的PADAM大鼠模型,按照随机分组的原则分为4组:正常对照组、模型组、丙酸睾酮组、天蚕壮阳散组,观察各组大鼠一般情况、体重、悬尾实验和强迫游泳实验、睾丸指数等改变以评价大鼠自身状况,放射免疫法测定各组治疗前后血清总睾酮(total testosterone,TT)、游离睾酮(free testosterone,FT)水平,免疫组化法测定各组大鼠睾丸间质细胞stAR蛋白表达水平,进行统计分析.结果 经环磷酰胺造模后,大鼠血清TT、FT水平下降(P<0.01)、行为学(悬尾试验)部分改变,基本类似PADAM,说明造模成功.两治疗组经治疗后血清TT、FT的含量较治疗前及模型组治疗后均显著提高(P<0.01),两治疗组比较差异无统计学意义(P>0.05).两治疗组经治疗后悬尾实验不动时间均显著缩短(P<0.05),力竭游泳实验时间与模型组比较显著延长(P<0.05).stAR蛋白灰度值显著下降(P<0.01).结论 天蚕壮阳散可阻止PADAM模型大鼠血清TT、FT的下降,提高stAR蛋白活性,改善抑郁状态和肌张力,其作用与丙酸睾酮相当.
关键词： 天蚕壮阳散 中老年男性雄激素部分缺乏综合征 睾酮 睾丸间质细胞 stAR蛋白 -
反义c-fos寡脱氧核苷酸对hCG诱导大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的影响
在睾酮合成过程中,细胞色素P450 17α-羟化酶(P450c17)的作用非常重要,其主要催化孕酮生成雄烯二酮,雄烯二酮作为雄激素的前体物质,终生成睾酮.
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雷公藤及铅镉对小鼠睾丸间质细胞NOS活性的影响
一氧化氮(NO)在睾丸内可促进生精过程和精子成熟,尚未见到有关雷公藤及铅、镉等重金属元素对睾丸间质细胞NOS活性影响的报道.本研究应用NADPH\|d黄递酶组织化学方法,对给与氯化镉、醋酸铅、雷公藤1、2、3、4周后小鼠睾丸间质内NOS活性变化进行观察,结果显示,正常组间质细胞呈NOS活性强阳性,而精曲小管管壁细胞均呈NOS活性阴性.
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半导体激光体外照射大鼠睾丸间质细胞作用的初步观察
目的 探讨低强度半导体激光照射对睾丸间质细胞分泌睾酮的作用.方法 原代培养大鼠睾丸间质细胞,用放射免疫方法测定睾丸间质细胞的睾酮分泌量,用MTr法测定细胞增殖率.比较激光照射组与对照组之间睾丸分泌量与细胞增值率的差异.结果 激光照射第5天后,睾丸间质细胞增殖活性明显高于对照组(P＜0.05).激光照射后第1天睾酮分泌量显著高于对照组(P＜0.05),第2天就恢复到接近对照组水平,第3天略低于对照组的睾酮分泌量.结论 低强度半导体激光可促进睾丸间质细胞增殖,使睾酮分泌量短暂升高.
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性早熟
性早熟属内分泌疾病，由于性发育早晚个体差异很大，诊断标准不一致［1］，化验检查技术复杂，正常范围波动大，与异常有交叉［2］，且因引起性早熟的原因复杂，不易确定，有效治疗方法少，所以儿科医生对性早熟诊断甚感困难，为此将近年来国内外对性早熟研究进展结合临床工作中的体会作一综述。1 定义 性早熟的定义书籍记载很不一致［3］，多数认为：①8岁前乳房增大；②10岁前有月经；③9岁前有腋毛；④阴蒂或阴茎肥大超过正常；⑤第二性征过早出现。有上述任何一条者，均应认为有性早熟。但由于性发育早晚本身有很大差别，又受遗传因素［4］、营养、疾病、经济、气候、个体差异、性知识等因素的影响［5］。如营养情况好、身体健壮、热带气候、经济情况好、性知识多等均可使性发育提前。近年来，我国人民营养状况迅速提高，疾病减少、性知识普及，因此性发育的年龄显著提前。因此对一个身高、体重、体态均已接近成年人，即使其性发育(乳房、月经、腋毛)比上述标准略有提前，不应轻易定为性早熟，而应继续观察其发展过程，再下肯定结论。2 影响性发育的器官 性发育受靶腺体(睾丸、卵巢)、脑下垂体、下丘脑和高级神经中枢的作用。高级神经中枢控制下丘脑。下丘脑有分泌性腺激素释放因子(GHRH)和性腺激素释放抑制因子(GHIR)，泌乳激素释放因子(PRF)和泌乳激素释放因子抑制因子(PIF)等垂体的调节系统。垂体分泌：①促卵泡刺激素(FSH)，为卵泡成长所必需，对男性生殖细胞也有刺激作用，能刺激睾丸使之产生精子；②黄体形成素(LH)又称促睾丸间质细胞刺激素(IGSH)，对性腺起刺激作用；③促黄体激素(LTH)即催乳腺素(Prolactin)对成熟的乳腺促进其乳汁分泌。卵巢分泌雌激素和孕酮，参与女性生殖器官的成熟排卵与月经循环，雌激素不促进乳腺导管的生长及女性第二性征的发育，孕酮还促进乳腺腺胞及腺小叶的成长，为分泌乳汁作准备。睾丸分泌睾丸酮(来自睾丸间质细胞)。 此外肾上腺皮质第3层网状带所产生的去氢雄酮和雄烷二酮，与睾丸酮共同刺激男性性器官和第二性征的发育，在女性则产生腋毛及阴毛的生长。睾丸、卵巢、肾上腺皮质产生性激素都能对丘脑起反馈作用，睾丸、卵巢、肾上腺皮质产生性激素过多起负反馈作用，使丘脑产生性腺激素释放抑制因子。性激素产生过少时起正反馈作用，使丘脑产生性激素释放因子。上述四种器官异常都可产生性早熟。有些肿瘤如肝细胞瘤等也可分泌性激素。
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雄激素及其受体在痛风炎症反应中作用
雄激素是一类含有19个碳原子的甾体激素，能促进雄性性征的出现并维持其正常状态。雄激素受体（ androgen receptor ， AR）是一种配体依赖性反转录调节蛋白，主要位于睾丸间质细胞和支持细胞的胞核内。雄激素通过与特异的AR结合发挥生理学作用。近年来，痛风发病率呈逐年升高趋势，其中95％的痛风患者为男性，提示雄激素在痛风炎症反应中起着重要作用。以往，雄激素及其受体的相关研究主要集中在肿瘤、遗传性疾病等领域，但越来越多的研究认为雄激素及其受体与痛风的发病和发展同样有着密切的关系。本文将近年来从雄激素及其受体与细胞因子、细胞免疫等方面的研究来对雄激素及其受体与痛风的关系进行综述，希望对以后痛风的预防及治疗提供参考。
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低浓度Ⅱ、Ⅳ型胶原酶联合消化法分离幼年SD大鼠睾丸间质细胞
目的 探索一种简单有效的大鼠睾丸间质细胞的分离、纯化方法.方法 采用0.1％ Ⅱ、Ⅳ型胶原酶混合液消化组织块分离睾丸间质细胞,用差速贴壁法纯化间质细胞,用3β-HSD免疫荧光染色鉴定间质细胞,同时用酶联法测定间质细胞分泌睾酮的活性.结果 (1)采用0.1％ Ⅱ、Ⅳ型胶原酶联合消化法分离睾丸间质细胞的佳酶解时间为1 h左右.(2)利用差速贴壁纯化睾丸间质细胞的佳贴壁时间为1～2 h.(3)培养24 h后,3β-HSD免疫荧光染色鉴定睾丸间质细胞纯度达(98.1±1.5)％,盼蓝染色鉴定睾丸间质细胞存活率达(97.3±1.6)％.(4)贴壁后培养12 h,睾丸间质细胞即达分泌高峰.结论 本实验建立了一种简便易行、稳定可靠的原代睾丸间质细胞分离纯化方法,通过此法能够获得足够多具高活性的高纯度睾丸间质细胞,并且睾丸间质细胞增殖能力较强.
