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硫酸镍对体外培养大鼠睾丸间质细胞毒作用的实验研究

关聪会;张志刚;孙应彪;孔德万;李成云;赵秋燕

摘要: 目的 建立大鼠睾丸间质细胞体外分离、纯化和培养的方法,探讨不同浓度和时间硫酸镍对大鼠睾丸间质细胞的毒作用.方法 采用胶原酶消化、Percoll分离液密度梯度离心和差速贴壁法体外分离、纯化睾丸间质细胞,并采用3β-HSD染色法进行纯度鉴定.硫酸镍(NiSO4)0、62.5、125、250、500和1 000 μmol/L对分离纯化的睾丸间质细胞染毒,采用MTT比色法和乳酸脱氢酶(LDH)渗漏法观察染毒3、6、12、24、36和48 h后,睾丸间质细胞增殖和培养上清液中LDH活力的变化.结果 (1)纯化的睾丸间质细胞经3β-HSD特异性染色鉴定,纯度可达到95%以上.(2)相同时间NiSO4各浓度组与对照组比较:染毒12 h后,NiSO4各浓度组均出现间质细胞增殖抑制(P<0.01);染毒6h后,NiSO4各浓度组培养液中LDH活力均开始升高(P<0.05或P<0.01).(3)相同浓度各染毒时间与对照组(0 h)比较:NiSO4 250μmol/L及其以上浓度组,各染毒时间均可抑制间质细胞增殖(P<0.01).除NiSO462.5 μmol/L染毒3h组外,其他各浓度不同染毒时间LDH活力均明显升高(P<0.05或P<0.01).结论 建立了较理想的体外分离、纯化和培养睾丸间质细胞的方法;镍对体外培养的睾丸间质细胞具有明显的毒作用,并呈现一定的剂量—效应和时间—效应关系.

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